原發(fā)性干燥綜合征的生物學(xué)標(biāo)志物研究進展

段曉玲，吳娟，謝璠，石宇紅

1桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西桂林 541001；2桂林醫(yī)學(xué)院

pSS是累及多種外分泌腺體為主的淋巴細胞浸潤的慢性炎癥性自身免疫性疾病。我國pSS的患病率為0.29%～0.77%，多發(fā)于中老年人，但確切病因和發(fā)病機制尚不完全清楚。pSS常見的臨床表現(xiàn)有眼干、口干、乏力及關(guān)節(jié)受累，甚至出現(xiàn)猖獗齒，還可出現(xiàn)心理障礙性疾病[1]，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。約25%的pSS患者出現(xiàn)內(nèi)臟器官受累，其中間質(zhì)性肺疾病(約30.1%)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)較為常見[2,3]。pSS并發(fā)癥的出現(xiàn)進一步降低了患者的生活質(zhì)量、生存率，但此病的并發(fā)癥多數(shù)無法治愈。目前，pSS的診斷主要依賴于美國風(fēng)濕病學(xué)會/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(ACR/EULAR)的分類標(biāo)準(zhǔn)，但上述分類標(biāo)準(zhǔn)不能作為診斷標(biāo)準(zhǔn)。已用于診斷pSS的生物學(xué)標(biāo)志物主要有抗SSA/SSB抗體、類風(fēng)濕因子(RF)等，但SSA抗體的特異度不高，抗SSB抗體的靈敏度低[4]，而RF陽性主要見于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者。微小RNA(miRNA)和趨化因子參與pSS和其并發(fā)癥的發(fā)病機制，為pSS的治療和病情評估提供一定的依據(jù)。當(dāng)抗毒蕈堿受體抗體(M3型)和水通道蛋白(AQPs)受累時，會使唾液分泌明顯減少，對該兩種生物標(biāo)志物的研究也許會使口干的問題得到解決。近年發(fā)現(xiàn)，抗SSA/抗SSB抗體聯(lián)合抗α-fordrin抗體可提高pSS的診斷準(zhǔn)確率[5]。因此，選擇合適的生物學(xué)標(biāo)志物，對于早期發(fā)現(xiàn)pSS及其并發(fā)癥至關(guān)重要?，F(xiàn)就pSS的生物學(xué)標(biāo)志物研究進展情況綜述如下。

1 抗SSA抗體/抗SSB抗體

抗SSA抗體是一種免疫球蛋白，當(dāng)自身免疫系統(tǒng)發(fā)生紊亂時，其在自體細胞中的小核糖核酸蛋白發(fā)生免疫反應(yīng)后產(chǎn)生，特別在pSS患者中較為常見[6]?？筍SA抗體常單獨或與抗SSB抗體一起在血清中被測出，而抗SSB抗體很少單獨出現(xiàn)?？筍SA抗體診斷pSS的靈敏度較高，抗SSB抗體診斷此病的特異度較高[4]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)抗SSA抗體陽性率約為57%[7]，RA的陽性率為3%～15%，系統(tǒng)性硬化癥的陽性率為3%～11%[8]。在pSS中，抗SSA抗體陽性率為68.2%～89.3%，抗SSB抗體陽性率為47.5%[9]?；趐SS抗SSA抗體/抗SSB抗體陽性表達情況，2012年ACR/EULAR已把上述兩個生物學(xué)標(biāo)志物納入pSS的分類標(biāo)準(zhǔn)。目前研究發(fā)現(xiàn)，抗SSA/SSB抗體不僅可用于pSS的診斷，還可用于該病并發(fā)癥的評估，如抗SSA/SSB抗體陽性患者發(fā)生靜脈血栓栓塞、腦血管疾病和多發(fā)性骨髓瘤的風(fēng)險增加[10,11]。Bartoloni等[12]發(fā)現(xiàn)，pSS患者較健康者更易發(fā)生高血壓和高膽固醇血癥，尤其是抗SSA/SSB抗體陽性的pSS患者。間質(zhì)性肺疾病是pSS的常見并發(fā)癥之一，Bermea等[13]發(fā)現(xiàn)，pSS患者抗SSA抗體陽性患者比抗SSA抗體陰性患者更易發(fā)生肺部毛玻璃樣變和肺功能損害。上述研究結(jié)果提示，抗SSA/SSB抗體不僅與pSS的發(fā)生發(fā)展有密切相關(guān)，也可作為該病嚴(yán)重并發(fā)癥的危險因素。

2 RF

RF是屬于一種自身抗體，是一種針對人類免疫球蛋白G的Fc部分的抗體，包括IgM-RF(此類型為主)、IgA-RF、IgG-RF[14]。目前，RF在臨床中應(yīng)用較普遍，如用于診斷RA，以及其他風(fēng)濕免疫疾病疾病活動度的評估。在無腺體外表現(xiàn)和有腺體外表現(xiàn)的pSS患者中，IgM-RF的中位濃度相似，而有腺體外表現(xiàn)的pSS患者，RF-IgA和IgG的中位濃度較低。Meek等[14]發(fā)現(xiàn)，pSS患者中IgA-RF濃度普遍高于RA患者。Lee等[15]發(fā)現(xiàn)，pSS患者血清IgA-RF水平高于特發(fā)性Sicca患者(80.1%pSS患者存在IgA-RFs，而只有20.1%的特發(fā)性Sicca患者存在IgA-RFs)，IgA-RF診斷pSS患者的靈敏度、特異度、陽性和陰性的預(yù)測值分別為83.1%、78.4%、88.9%和69.0%。但上述研究是一單中心研究、病例數(shù)相對較少，且非IgM-RF在以前的研究中并沒有常規(guī)測量和評估，因此需要進一步研究IgA-RF在pSS中的作用。研究[16]顯示，IgA-RF與pSS患者并發(fā)腎臟疾病相關(guān)。Nocturne等[17]通過多中心病例對照調(diào)查發(fā)現(xiàn)，RF濃度高的pSS患者發(fā)生淋巴瘤的風(fēng)險增加。因此從目前的研究來看，RF適合用于pSS的疾病活動度，也可作為pSS患者的預(yù)后因素，但其是否可用于診斷pSS和評估并發(fā)腺體外表現(xiàn)風(fēng)險有意義，還需要多中心更大的病例數(shù)進一步研究。

3 miRNA

3.1 miR-146a、miR-4484 Sun等[18]發(fā)現(xiàn)，miRNA-146a的表達與SLE沒有關(guān)系，而與pSS的風(fēng)險相關(guān)，miRNA-146a可作為pSS診斷的一種新生物學(xué)標(biāo)志物。研究[6]發(fā)現(xiàn)，觀察組miR-146a、miR-4484表達明顯高于對照組，而觀察組治療后miR146a、miR-4484表達較治療前明顯下調(diào)(P均<0.05)。研究[19]發(fā)現(xiàn)，干燥小鼠模型的唾液腺和血液中miRNA-146a表達上調(diào)。Jiang等[6]還發(fā)現(xiàn)，miR-146a、miR-4484低表達組中腎損傷和肺間質(zhì)損害的發(fā)生率明顯低于高表達組(P均<0.05)，這可能與miR-146a的高表達可誘導(dǎo)大量的炎癥因子如TNF-α和IL-lβ，和miR-4484可能通過調(diào)節(jié)淀粉樣前體蛋白和MSRB3蛋白等多種蛋白參與pSS的病理生理過程有關(guān)。Jiang等[6]還發(fā)現(xiàn)，miR-146a、miR-4484在抗SSA抗體陽性pSS患者中表達上調(diào)，聯(lián)合檢測兩指標(biāo)可提高pSS的診斷率。綜上，miR-146a和miR-4484可以作為pSS的新生物學(xué)標(biāo)志物，其不僅提高pSS的診斷率，亦可作為此病預(yù)后和療效評估的生物學(xué)標(biāo)志物。

3.2 miR-1248 Jang等[20]發(fā)現(xiàn)，miR-1248在人唾液腺腺泡細胞中通過雙路徑發(fā)揮作用，通過其規(guī)范的miRNA功能，分別通過與RIG-I結(jié)合來激活I(lǐng)nterferon-β(IFN-β)途徑，以及分別下調(diào)DAK1和ITPR3來調(diào)節(jié)IFN信號和鈣信號，由此認為miR-1248參與pSS的潛在分子機制，這為pSS患者的腺泡細胞功能紊亂的發(fā)病機理和潛在的治療方法提供了重要的見解。

3.3 miR-200b-5p pSS有許多并發(fā)癥，其中淋巴瘤較為常見，使pSS患者預(yù)后變差，且大大增加患者病死率。Kapsogeorgou等[21]發(fā)現(xiàn)，pSS即將發(fā)展為NHL或已經(jīng)發(fā)展為NHL的患者中，miR-200b-5p水平下調(diào)，并與無淋巴瘤或無pSS性涎腺炎的患者有顯著性差異(P<0.05)。此外，miR-200b-5p在淋巴瘤臨床發(fā)作前很長一段時間內(nèi)表達減少，在向淋巴瘤過渡時沒有顯著變化，而且重要的是，它被證明是發(fā)展為NHL患者的強獨立預(yù)測因子[21]。

3.4 其他miRNA Jin等[22]在pSS、SLE、RA、潰瘍性結(jié)腸炎患者中檢測血清miRNAs，經(jīng)QRT-PCR檢測和ROC曲線分析，miR-448、miR-124、miR-551b可作為區(qū)分自身免疫性疾病患者和健康對照者的有價值的特異度生物標(biāo)記物。miR-92a和18a的表達下調(diào)與pSS患者的晚期臨床分期有關(guān)[23]。

4 趨化因子

趨化因子是一組由免疫細胞產(chǎn)生的、結(jié)構(gòu)相似的、具有趨化作用的細胞因子。趨化因子的生物學(xué)作用是通過與靶細胞表面的趨化因子受體特異度結(jié)合而實現(xiàn)，CCL25可能為pSS的治療作出貢獻，CCL22有助于pSS的診斷及在此病的治療中起重要作用。

4.1 CCL25 Slm等[24]發(fā)現(xiàn)，pSS患者唇唾液腺(LSG)中CCL25和CCR9+Th表達增強，LSG上清液中CCL25與淋巴細胞病灶評分、B細胞亢進和自身免疫顯著相關(guān)，而CCR9+T細胞能產(chǎn)生大量細胞因子刺激B細胞產(chǎn)生IgG。表明CCL25/CCR9軸在PSS免疫病理學(xué)中起著重要作用，這也許代表了一種新的治療靶點。另有研究[25,26]也發(fā)現(xiàn)，在干燥樣小鼠和pSS患者中CCL25/CCR9表達明顯增加。從以上研究可以推斷，對于CCL25的研究可能為pSS的治療作出貢獻。

4.2 CCL22 Ushio等[27]在干燥小鼠模型中觀察到，CD11bhigh巨噬細胞產(chǎn)生的CCL22通過增加其受體CCR4對pSS模型中T細胞的遷移活性而上調(diào)CD4+T細胞的遷移活性來控制自身免疫損傷。Moriyama等[28]用PCR技術(shù)檢測36例pSS患者LSG和外周單核細胞(PBMCs)中的細胞因子、趨化因子及受體的mRNA，發(fā)現(xiàn)pSS可能由Th1和Th17細胞啟動或維持，并通過CCL22/CCR4之間的相互作用與Th2細胞發(fā)生關(guān)聯(lián)。CCL22/CCR4可能對pSS的診斷和揭示疾病狀態(tài)是有幫助的。趙嘉英等發(fā)現(xiàn)，血清CXCL10、CXCR3診斷pSS患者的靈敏度和特異度高，可作為pSS診斷的有效生物學(xué)標(biāo)志物[29]。表明CCL22有助于pSS的診斷。

5 抗毒蕈堿受體抗體(M3型)

毒蕈堿受體3(M3R)是一種自主性G蛋白偶聯(lián)受體，主要表達于平滑肌細胞，是介導(dǎo)許多生理反應(yīng)(如平滑肌收縮、心率和腺體分泌)的毒蕈堿受體家族成員[30]，其中M3R、M2R在結(jié)腸和胃平滑肌收縮中均起作用。研究[31]發(fā)現(xiàn)，pSS-IgG組可顯著抑制CCH或EFS誘導(dǎo)的結(jié)腸肌收縮，而健康組的IgG作用不大，M3R在結(jié)腸和胃平滑肌中均起主導(dǎo)作用，M2R在平滑肌中起部分作用。Minagi等[32]發(fā)現(xiàn)，連續(xù)使用毛果蕓香堿，可使唾液中毒蕈堿型乙酰膽堿受體3基因表達增加，從而激活唾液的分泌。Kudo等[33]在給小鼠服用表達N1-APL7(M3R的T細胞表位之一的N端1的改變肽配體)的水稻種子，結(jié)果顯示其通過抑制M3R特異度IFN-γ和IL-17的產(chǎn)生，以增強調(diào)節(jié)性T細胞，進而顯著恢復(fù)唾液流量，并抑制涎腺炎的發(fā)生。因此，抗M3R抗體可作為診斷、評估pSS患者病情進展及治療靶點的生物學(xué)標(biāo)志物之一。

6 AQPs

AQPs是一個透水通道家族(AQP0-AQP12)，與所有生物體的跨細胞透水性有關(guān)。Soyfoo等[34]發(fā)現(xiàn)，在炎癥作用下，AQP5的分布、定位及功能發(fā)生改變。在AQP5基因敲除時，毛果蕓香堿誘導(dǎo)小鼠唾液分泌減少了約60%，發(fā)生唾液粘稠和高滲[35]，上述研究可能解釋了導(dǎo)致唾液分泌減少的原因。Ichiyama等[36]發(fā)現(xiàn)，AQP3和AQP5在腺泡細胞頂端細胞膜上表達高強度免疫反應(yīng)(干燥組明顯高于口干組)。因此認為，AQP3和AQP5在涎腺頂端細胞膜的分布可能是鑒別pSS和口干癥的關(guān)鍵因素。也許調(diào)控AQPs和AQPs基因轉(zhuǎn)移是恢復(fù)唾液腺功能解決口干的潛在治療方案。

7 抗α-fordrin抗體

α-fodrin抗體是一種肌動結(jié)合細胞骨架蛋白，是pSS患者體內(nèi)獨有的自身免疫抗體，含量明顯高于其他自身免疫系統(tǒng)疾病患者及健康人群。有報道顯示，抗α-fodrin抗體診斷pSS的特異度和靈敏度分別為0.80～1.00和0.60～0.90[37]?？功?fodrin抗體單獨診斷pSS的準(zhǔn)確率為44.23%，而抗SSA抗體聯(lián)合抗SSB抗體、抗SSA抗體聯(lián)合抗α-fodrin抗體、抗SSB抗體聯(lián)合抗α-fodrin抗體檢測診斷pSS的準(zhǔn)確率分別為90.38%、90.38%和92.31%[5]。說明抗α-fodrin抗體可作為診斷pSS的生物學(xué)標(biāo)志物尤其是與抗SSA抗體及抗SSB抗體聯(lián)合準(zhǔn)確率更有意義。

綜上所述，抗SSA/SSB抗體不僅可用于pSS的診斷。RF評估其病情活動度和預(yù)后比作為診斷指標(biāo)也許更有價值。α-fodrin抗體在聯(lián)合抗SSA/SSB抗體診斷pSS的準(zhǔn)確率明顯提高?？筂3R抗體用于診斷、評估pSS的嚴(yán)重程度和治療有極大的作用，但目前還未應(yīng)用于臨床。miRNAs、趨化因子、AQPs都參與了pSS的不同病理生理過程，miRNA還參與了pSS合并淋巴瘤的發(fā)病機制，因此這三種生物學(xué)標(biāo)志對該病的診斷、并發(fā)癥的早發(fā)現(xiàn)和作為疾病治療的靶點都有重要的意義。