參連復(fù)脈顆粒治療室性期前收縮的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

龍 佳，魯婷婷，汪吳嬌，逯金金，劉 靜，任建勛，萬(wàn) 潔，林 謙

室性期前收縮(ventricular premature contraction，VPC)是臨床常見(jiàn)的心律失常之一。盡管通常認(rèn)為無(wú)器質(zhì)性心臟病的病人在體檢中發(fā)現(xiàn)室性期前收縮屬正常現(xiàn)象，無(wú)須干預(yù)治療，但近年來(lái)研究顯示，頻發(fā)的室性期前收縮可能會(huì)影響心臟的結(jié)構(gòu)與功能，進(jìn)而導(dǎo)致心功能不全和心肌病[1]。目前藥物治療常用的β受體阻斷劑禁忌證較多，其他抗心律失常藥幾乎均有一定的致心律失常作用[2]，而射頻消融術(shù)等非藥物治療手段因具有創(chuàng)傷性、適應(yīng)證及并發(fā)癥的局限、醫(yī)療條件要求高、價(jià)格昂貴等原因僅使部分病人能夠從中受益。中醫(yī)藥在治療心律失常尤其是室性期前收縮方面具有一定優(yōu)勢(shì)[3]。益氣復(fù)脈合劑為北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院心內(nèi)科治療心律失常的協(xié)定處方，已獲國(guó)家發(fā)明專利(ZL 2013 1 0303390.5)。既往研究表明，該方用于治療室性期前收縮有較好的臨床療效[4]。目前，已根據(jù)《藥品注冊(cè)管理辦法》(GLP)的相關(guān)要求，通過(guò)水提工藝[5]和醇提工藝[6]制備成顆粒劑，命名為參連復(fù)脈顆粒(SLFM)，具有益氣活血、清心化痰、安神復(fù)脈之功效[7]。本研究旨在進(jìn)一步驗(yàn)證參連復(fù)脈顆粒對(duì)室性期前收縮的藥效作用及最佳有效藥物濃度，為該顆粒劑治療室性期前收縮提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性ICR小鼠，體重23～25 g，斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0004。普通級(jí)雄性豚鼠，體重240～320 g，北京芳元緣養(yǎng)殖場(chǎng)，許可證號(hào)：SCXK(京)2014-0012。清潔級(jí)雄性SD大鼠，體重190～230 g，斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(京)2013-0004；北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn)，許可證號(hào)：SCXK(京)2013-0007。

1.2 藥物與試劑 參連復(fù)脈顆粒，提取浸膏粉，每克粉含4.27 g生藥，批號(hào)：Z70301，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院提供。鹽酸胺碘酮片，每片0.2 g，賽諾菲(杭州)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：130020。鹽酸美西律片，每片50 mg，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào)：377131203。0.9%氯化鈉注射液，每袋500 mL，北京華潤(rùn)雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：D201701093。0.9%氯化鈉注射液，每袋500 mL，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：C201202095。氯化鈣(CaCl2)，SIGMA-ALDRICH產(chǎn)品，貨號(hào)：C7902-500G，批號(hào)：058k06941。哇巴因，SIGMA-ALDRICH產(chǎn)品，批號(hào)：057K1625。烏頭原堿，批號(hào)：110720-200410，中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供。

1.3 儀器 心電圖解析系統(tǒng)(Softron SP-2006)，北京軟隆生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。ALC-IP800LB微量注射泵(ALC-IP800LB Syringe Pump)，上海奧爾特生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)一 參連復(fù)脈顆粒對(duì)CaCl2致小鼠心律失常的影響。采用一次性靜脈注入CaCl2(225 mg/kg)的方法誘導(dǎo)小鼠心律失常模型，觀察益氣復(fù)脈顆?？剐∈笮穆墒С５淖饔?。ICR小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(生理鹽水20 mL/kg)、胺碘酮組(78 mg/kg)及SLFM大劑量組(參連復(fù)脈生藥16.0 g/kg)、中大劑量組(參連復(fù)脈生藥8.0 g/kg)、中劑量組(參連復(fù)脈生藥4.0 g/kg)、小劑量組(參連復(fù)脈生藥2.0 g/kg)。并按以上所述劑量溶于生理鹽水中進(jìn)行口服灌胃給藥。給藥后30 min，連接心電圖解析系統(tǒng)記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。尾靜脈注入CaCl2誘發(fā)心律失常后，記錄心律失常持續(xù)時(shí)間(s)并計(jì)算對(duì)數(shù)(Log)。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)二 參連復(fù)脈顆粒對(duì)哇巴因致豚鼠心律失常的影響。采用靜脈恒速注入哇巴因的方法誘發(fā)豚鼠心律失常模型，觀察參連復(fù)脈顆粒經(jīng)灌胃口服給藥對(duì)哇巴因誘導(dǎo)豚鼠心律失常的影響。將豚鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(蒸餾水3 mL/kg)、對(duì)照西藥美西律組(50 mg/kg)、中藥對(duì)照SLFM大、中、小劑量組(生藥6.0 g/kg、生藥3.0 g/kg、生藥1.5 g/kg)。并按以上所述劑量溶于蒸餾水中經(jīng)灌胃口服。給藥30 min后，豚鼠分離左側(cè)頸外靜脈，以微量注射泵恒速注入哇巴因(100 μg/mL、0.08 mL/min)，觀察動(dòng)物出現(xiàn)室性期前收縮、室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)及心臟停搏的時(shí)間，并計(jì)算哇巴因消耗量。

1.4.3 實(shí)驗(yàn)三 參連復(fù)脈顆粒對(duì)烏頭原堿致大鼠心律失常的影響。采用一次性靜脈注入烏頭原堿的方法誘導(dǎo)大鼠心律失常模型，觀察參連復(fù)脈顆?？勾笫笮穆墒С５淖饔?。SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(生理鹽水3 mL/kg)、西藥陽(yáng)性對(duì)照美西律組(60 mg/kg)、中藥對(duì)照SLFM大劑量組(生藥8.0 g/kg)、中劑量組(生藥4.0 g/kg)、小劑量組(生藥2.0 g/kg)。并按以上所述劑量溶于生理鹽水中進(jìn)行口服灌胃給藥。給藥后30 min，連接心電圖解析系統(tǒng)記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。頸靜脈注入烏頭原堿誘發(fā)心律失常后，記錄心律失常持續(xù)時(shí)間。

2 結(jié) 果

2.1 參連復(fù)脈顆粒對(duì)CaCl2致小鼠心律失常發(fā)生率及持續(xù)時(shí)間的影響 對(duì)照組小鼠尾靜脈注射CaCl2后出現(xiàn)心率由快到慢、停搏、室性期前收縮等心律失常，發(fā)生率為100%。與對(duì)照組比較，SLFM大劑量組、中大劑量組、中劑量組心律失常持續(xù)時(shí)間均明顯縮短(P<0.05或P<0.01)；胺碘酮組心律失常持續(xù)時(shí)間明顯縮短(P<0.01)，而SLFM大劑量組、中大劑量組、中劑量組心律失常持續(xù)時(shí)間縮短程度與胺碘酮組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。CaCl2致小鼠心律失常心電圖的變化見(jiàn)圖1。

表1 參連復(fù)脈顆粒對(duì)CaCl2致小鼠心律失常發(fā)生率及持續(xù)時(shí)間的影響(±s) 單位：s

圖1 CaCl2致小鼠心律失常心電圖的變化

2.2 參連復(fù)脈顆粒對(duì)哇巴因致豚鼠心律失常的影響 與對(duì)照組比較，美西律組發(fā)生室性期前收縮、室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)及心臟停搏時(shí)哇巴因消耗量均明顯增加(P<0.01)；SLFM大劑量組發(fā)生室性期前收縮、室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)、心臟停搏時(shí)哇巴因消耗量明顯增加(P<0.01)；SLFM中劑量組、小劑量組也能夠增加哇巴因的消耗量。而SLFM大劑量組發(fā)生心律失常時(shí)哇巴因消耗量與美西律組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

與對(duì)照組比較，美西律組和SLFM大劑量組、中劑量組、小劑量組對(duì)哇巴因誘導(dǎo)豚鼠不同心律失常出現(xiàn)時(shí)間具有一定的延長(zhǎng)作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。而SLFM大劑量組致豚鼠心律失常出現(xiàn)延長(zhǎng)的時(shí)間與美西律組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表3。哇巴因致豚鼠心律失常的心電圖變化見(jiàn)圖2。

表2 參連復(fù)脈顆粒對(duì)豚鼠心律失常哇巴因消耗量的影響(±s) 單位：μg/kg

表3 參連復(fù)脈顆粒對(duì)哇巴因誘導(dǎo)豚鼠不同心律失常出現(xiàn)時(shí)間的影響(±s) 單位：s

圖2 哇巴因致豚鼠心律失常的心電圖變化

2.3 參連復(fù)脈顆粒對(duì)烏頭原堿致大鼠心律失常持續(xù)時(shí)間的影響 美西律組和SLFM大劑量組、中劑量組心律失常持續(xù)時(shí)間均明顯縮短，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。而SLFM大劑量組、中劑量組大鼠心律失常持續(xù)時(shí)間與美西律組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表4。烏頭原堿致大鼠心律失常心電圖的變化見(jiàn)圖3。

表4 參連復(fù)脈顆粒對(duì)烏頭原堿致大鼠心律失常持續(xù)時(shí)間的影響 (±s) 單位：min

圖3 烏頭原堿致大鼠心律失常心電圖的變化

3 討 論

室性期前收縮在中醫(yī)學(xué)屬于“心悸”范疇。心悸的基本病機(jī)有虛實(shí)兩方面，虛者為氣血陰陽(yáng)虧損、心神失養(yǎng)所致；實(shí)者則多由痰火擾心、水飲凌心或瘀血阻脈、氣血運(yùn)行不暢引起，虛實(shí)之間可以相互夾雜或轉(zhuǎn)化。隨著人民生活水平不斷提高，嗜食肥甘厚味、飲食失節(jié)的人群增多，室性期前收縮病人多易在氣虛血瘀基礎(chǔ)上化生痰熱。臨床證候?qū)W研究表明，室性期前收縮病人氣虛血瘀合并痰熱內(nèi)蘊(yùn)證所占比例較多[8]。目前上市的以治療室性期前收縮等心律失常且相對(duì)應(yīng)用廣泛的中成藥僅有穩(wěn)心顆粒、參松養(yǎng)心膠囊兩個(gè)品種，但二者均為針對(duì)氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)的證型，尚無(wú)同時(shí)針對(duì)氣虛血瘀合并痰熱擾心證型的中成藥。參連復(fù)脈顆粒由黨參、丹參、黃連、法半夏、赤芍、川芎、鬼箭羽、白芍、遠(yuǎn)志、酸棗仁、炙甘草組成。全方配伍，共奏益氣活血、清心化痰、安神復(fù)脈之效[7]。適用于氣虛血瘀、痰熱擾心所致心悸，癥見(jiàn)胸悶、胸痛、心煩、口苦、氣短、乏力、咽干、便干、口唇紫暗、舌暗紅、苔黃膩。

參連復(fù)脈顆粒藥物中君藥丹參的主要有效成分丹酚酸B和丹參酮ⅡA對(duì)心腦血管系統(tǒng)都具有一定的保護(hù)作用[9-10]。已有研究表明，臣藥黃連的主要有效成分小檗堿具有顯著抗心律失常作用，且對(duì)不同病因引起的各種心律失常均有效，具有廣譜的抗心律失常作用[11]。佐藥赤芍的有效成分芍藥苷通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、抗自由基，從而改善由缺血、缺氧引起的心腦血管舒縮功能障礙[12]。使藥炙甘草的主要成分甘草酸二銨注射液能明顯減少大鼠心肌缺血再灌注性心律失常的發(fā)生率及降低心律失常評(píng)分[13]；甘草總黃酮可延長(zhǎng)烏頭堿誘發(fā)的小鼠心律失常的潛伏期，減少氯仿誘發(fā)的小鼠心室顫動(dòng)陽(yáng)性率[14]，增加哇巴因誘導(dǎo)豚鼠出現(xiàn)室性期前收縮等心律失常所用劑量。參連復(fù)脈顆粒中主要藥物組分的藥理作用均具有抗心律失常的作用。

本研究團(tuán)隊(duì)曾采用參連復(fù)脈顆粒組方的水煮湯劑——益氣復(fù)脈合劑進(jìn)行了相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[15-17]，并對(duì)益氣復(fù)脈合劑治療室性期前收縮的有效性和安全性做了初步驗(yàn)證[4]。而參連復(fù)脈顆粒是在益氣復(fù)脈合劑處方基礎(chǔ)上，通過(guò)部分水提和部分醇提等符合藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范(GLP)標(biāo)準(zhǔn)制備加工后，最終研發(fā)成顆粒劑。相對(duì)湯劑存在熬制方法難以規(guī)范、易發(fā)霉變質(zhì)、質(zhì)量難以控制而言，顆粒劑有效成分含量更穩(wěn)定，攜帶方便，保質(zhì)期長(zhǎng)，能夠更好地發(fā)揮并利用中藥的有效成分。根據(jù)不同種屬動(dòng)物心臟電生理特點(diǎn)而選擇小鼠、大鼠和豚鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：①參連復(fù)脈顆粒大劑量組、中大劑量組、中劑量組對(duì)CaCl2致小鼠心律失常發(fā)生率及持續(xù)時(shí)間的影響與胺碘酮組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明參連復(fù)脈顆粒大劑量、中大劑量、中劑量有類胺碘酮作用，劑量越大，心律失常持續(xù)時(shí)間越短。②參連復(fù)脈顆粒大劑量組對(duì)豚鼠心律失常哇巴因消耗量的影響與美西律組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且與美西律對(duì)哇巴因消耗量及心律失常出現(xiàn)的時(shí)間有相同的拮抗趨勢(shì)。③參連復(fù)脈顆粒大劑量組、中劑量組對(duì)烏頭原堿致大鼠心律失常持續(xù)時(shí)間的影響與美西律組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由此推斷參連復(fù)脈顆粒有類胺碘酮、美西律等抗心律失常藥物的藥效作用，與劑量呈正相關(guān)。相對(duì)胺碘酮、美西律等西藥，參連復(fù)脈顆粒毒性作用更小，安全性更高。

本研究結(jié)果提示，參連復(fù)脈顆粒對(duì)氯化鈣、哇巴因、烏頭原堿引起的室性期前收縮均有一定的抑制作用，中劑量為最低起效劑量，故推薦臨床常用劑量(即成人生藥40.5 g/d)為最佳有效劑量。通過(guò)本研究可知，參連復(fù)脈顆粒具有抗心律失常的藥效作用，可以用于治療室性期前收縮，其臨床療效及作用機(jī)制有待后續(xù)研究進(jìn)一步探索驗(yàn)證。