庫拉索蘆薈與中華蘆薈抗氧化酶活性比較研究

王 斌，趙金榮，張騰霄，趙洪波，郭妍瑤，齊 琦

（綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院，黑龍江 綏化 152061）

庫拉索蘆薈（Aloe barbadensis Mill.）和中華蘆薈（Aloe vera L.var. Chinesis）是主要蘆薈品種［1］，前者收錄于2015 版《中國藥典》一部。蒽醌和多糖是蘆薈中最主要的功能性成分［2-4］，還有酚類［5］、甾體、酶等［6-10］。蘆薈中含有豐富的超氧化物歧化酶（SOD）等抗氧化酶［11-14］，SOD 等抗氧化酶與蘆薈的抗衰老及美容作用有密切關(guān)聯(lián)。不同種類的蘆薈及同種蘆薈不同部位所含各類抗氧化酶是否存在差異，關(guān)于此方面的研究相對(duì)較少。本研究通過比較研究庫拉索蘆薈、中華蘆薈不同部位SOD、過氧化氫酶（CAT）和過氧化物酶（POD）活性，為其在抗氧化方面的開發(fā)和應(yīng)用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料于2019 年9 月分別采于6 年生和10年生植株，產(chǎn)地為黑龍江省綏化市，經(jīng)綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院王雙俠老師分別鑒定為庫拉索蘆薈和中華蘆薈。

1.2 儀器

TGL-16LM 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湖南星科科學(xué)儀器有限公司），SD40 制冰機(jī)（廣州市廣坤電器制造有限公司），725 型紫外可見分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）。

1.3 試劑

磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、L-甲硫氨酸（Met）、核黃素、EDTA-Na2、氮藍(lán)四唑（NBT）、H2SO4、KMnO4、H2O2、愈創(chuàng)木酚，以上試劑均為分析純。

1.4 方法

1.4.1 樣品處理 分別取同株庫拉索蘆薈、中華蘆薈嫩葉（頂部葉）、中葉（中部葉）和老葉（底端葉），清水沖洗3 次，無菌水沖洗3 次。用滅菌剪刀將葉片兩側(cè)刺剪掉，縱向剖開，一半取凝膠（中間部分汁液），一半取皮和凝膠。每個(gè)部位稱取5 g，平行重復(fù)3 次。供試樣品見表1。陽性對(duì)照由揚(yáng)州完美日用品有限公司生產(chǎn)。

表1 供試樣品

1.4.2 抗氧化酶活性測(cè)定 將處理好的樣品各5 g，勻漿機(jī)勻漿，置于加入10 mL 0.05 mol/L 磷酸緩沖液（pH 7.95）的預(yù)冷研缽中，冰浴研磨成漿，加入磷酸緩沖液40 mL，使終體積為50 mL。置于10 000 r/min 冷凍離心機(jī)中冷凍離心20 min，上清液保存于4 ℃冰箱，備用。采用核黃素-NBT 還原法測(cè)定SOD，采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定CAT，采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定POD［15］。

2 結(jié)果與分析

庫拉索蘆薈和中華蘆薈不同部位中的SOD、CAT、POD 活性見圖1、圖2。由圖1 可知，庫拉索蘆薈老葉、中葉、嫩葉中SOD、CAT、POD 活性不同。同株老葉凝膠部位SOD 酶活性較高。中葉整個(gè)葉片CAT 酶活性較高，整個(gè)葉片CAT 酶活性是凝膠部位的5.57 倍。老葉整個(gè)葉片POD 酶活性較高，整個(gè)葉片POD 酶活性是凝膠部位約6.84 倍。從葉齡角度分析，老葉中SOD、POD 活性明顯高于嫩葉，說明抗氧化酶代謝合成在老葉中更加活躍。研究表明，老葉中各類化合物種類和數(shù)量高于嫩葉，推測(cè)其抗氧化酶活性與化合物合成可能存在一定相關(guān)性［16］。從部位角度分析，同株同葉齡庫拉索蘆薈整個(gè)葉片（皮和凝膠部位）CAT、POD 活性高于凝膠部位，說明這些抗氧化酶在皮部積累可能較多。

由圖2 可知，中華蘆薈老葉、中葉、嫩葉中的SOD、CAT、POD 活性不同。嫩葉凝膠部位SOD 活性最高。老葉整個(gè)葉片中CAT 活性較高，整個(gè)葉片中活性是凝膠部位的9.20 倍。老葉整個(gè)葉片中POD 活性較高，整個(gè)葉片活性是凝膠部位的12.10倍。從葉齡角度分析，對(duì)于整個(gè)葉片老葉中CAT、POD 活性明顯高于嫩葉，說明二者代謝合成在老葉中更加活躍。但嫩葉中SOD 活性較高，高出老葉部位SOD 活性約2 倍。從部位角度分析，同株同葉齡中華蘆薈整個(gè)葉片（皮和凝膠）部位的CAT、POD 活性高于凝膠部位，這與庫拉索蘆薈的試驗(yàn)結(jié)論一致。

圖2 中華蘆薈中抗氧化酶活性比較

植物中的天然抗氧化成分是實(shí)現(xiàn)機(jī)體細(xì)胞抗衰老、抗癌變功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。蘆薈中含有多種天然抗氧化成分，目前試驗(yàn)研究多集中在蘆薈多糖［17-19］、蘆薈酚類化合物［20］等，但對(duì)抗氧化酶的研究相對(duì)較少，特別是不同蘆薈品種和不同部位抗氧化酶活性對(duì)比鮮見報(bào)道。研究表明，蘆薈葉中含有種類豐富的抗氧化酶，多種酶協(xié)同作用具有較強(qiáng)酶解各類自由基作用從而發(fā)揮抗氧化功效，生物體氧化衰老機(jī)制已被公認(rèn)，外用蘆薈制品能很好地保留抗氧化酶活性，成為其在養(yǎng)顏美容功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。蘆薈植物體上，老葉不脫落而新葉不斷抽生，因此，研究不同葉齡不同部位蘆薈葉中抗氧化酶種類和含量，對(duì)確定原材料品質(zhì)及提高終端產(chǎn)品質(zhì)量具有重要價(jià)值。

3 小結(jié)

通過試驗(yàn)表明，不同部位庫拉索蘆薈、中華蘆薈中不同抗氧化酶活性存在差異。結(jié)合生物學(xué)產(chǎn)量，開發(fā)應(yīng)用SOD 方面，應(yīng)以2 種蘆薈中葉中間凝膠為原料；開發(fā)應(yīng)用CAT 和POD 方面，應(yīng)以2 種蘆薈老葉整個(gè)葉片為原料。研究結(jié)果為蘆薈抗氧化功能性產(chǎn)品的定向開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。今后還應(yīng)結(jié)合其他化學(xué)成分對(duì)不同部位蘆薈進(jìn)行比較研究，這種多指標(biāo)、多角度的中藥資源質(zhì)量評(píng)價(jià)才更具有現(xiàn)實(shí)應(yīng)用價(jià)值。