呼吸道感染病原體IgM抗體檢測結(jié)果分析及其干擾因素探討

江云川 龔麗坤 高衛(wèi) 楊婷 沈藍(lán) 張瑛

[摘要] 目的 分析呼吸道感染病原體IgM抗體檢測結(jié)果，總結(jié)呼吸道感染病原體分布情況以及其相關(guān)影響因素。方法方便選取2018年4月—2019年2月該院收治的1 004例疑似呼吸道感染患兒的血清標(biāo)本為研究對象，應(yīng)用間接免疫熒光法對肺炎支原體、乙型流感病毒、甲型流感病毒、腺病毒、嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎衣原體、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、Q熱立克次體9項(xiàng)病原體IgM抗體，分析檢測結(jié)果。 結(jié)果 1 004例疑似呼吸道感染患兒的血清標(biāo)本中IgM總陽性率40.04%，其中肺炎支原體陽性率最高，占32.84%，乙型流感病毒陽性率次之，占29.64%。402例陽性樣本中單一感染338例，占84.08%，混合感染64例，占15.92%，而在混合感染樣本中肺炎支原體+乙型流感病毒感染混合所占比例最高，為45.31%。而且肺炎支原體、乙型流感病毒、嗜肺軍團(tuán)菌1型、呼吸道合胞病毒在不同年齡段兒童之間的病原體檢測陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（MP：χ2=12.475，P=0.006;IFB：χ2=19.554，P=0.000;LP1：χ2=11.999，P=0.007;RSV：χ2=35.992，P=0.000）。 結(jié)論 呼吸道感染的病原體主要以肺炎支原體、乙型流感病毒為主，但受流行病學(xué)因素、病原體協(xié)同易感性以及試劑交叉反應(yīng)等因素影響，間接免疫熒光法檢測呼吸道感染病原體IgM抗體有可能導(dǎo)致陽性重和率升高，針對此情況臨床可采用病原體抗原檢測、分子生物學(xué)檢測、病原體分離培養(yǎng)等方法加以分析驗(yàn)證，保證疾病診斷的準(zhǔn)確性。

[關(guān)鍵詞] 呼吸道感染;病原體IgM抗體;間接免疫熒光法;干擾因素

[中圖分類號] R446? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）06（c）-0172-03

Respiratory Tract Infection Pathogen IgM Antibody Detection Result Analysis and Its Interference Factors

JIANG Yun-chuan1， GONG Li-kun1， GAO Wei1， Yang Ting1， SHEN Lan2， ZHANG Ying3

1.Department of Medical Laboratory， Chuxiong Yi Autonomous Prefecture Traditional Chinese Medicine Hospital， Chuxiong， Yunnan Province， 675000 China; 2.Department of Emergency Medicine， South Yunnan Central Hospital （Honghe First People's Hospital）， Honghe Prefecture， Yunnan Province， 661199 China; 3.Department of Medical Laboratory， First People's Hospital of Zhaotong， Yunnan Province， 675000 China

[Abstract] Objective To analyze the detection results of IgM antibody against pathogens of respiratory tract infection， and to summarize the distribution of pathogens of respiratory tract infection and their related influencing factors. Methods Serum specimens of 1004 children with suspected respiratory tract infections admitted to the hospital from April 2018 to February 2019 were convenient selected as the research subjects， Legionella pneumophila， Chlamydia pneumoniae， respiratory syncytial virus， parainfluenza virus， Q fever Rickettsia 9 pathogen IgM antibodies， analysis and detection results. Results The total positive rate of IgM in 1004 children with suspected respiratory tract infection was 40.04%. Among them， the positive rate of Mycoplasma pneumoniae was the highest， accounting for 32.84%， followed by the positive rate of influenza B virus， accounting for 29.64%. Among the 402 positive samples， there were 338 single infections， accounting for 84.08%， and 64 mixed infections， accounting for 15.92%. Among the mixed infection samples， the proportion of Mycoplasma pneumoniae + influenza B virus infection was the highest， which was 45.31%. And the positive rate of pathogen detection of Mycoplasma pneumoniae， Influenza B virus， Legionella pneumophila type 1 and respiratory syncytial virus in children of different ages was significantly different（MP：χ2=12.475， P=0.006; IFB：χ2=19.554， P=0.000; LP1：χ2=11.999， P=0.007; RSV：χ2=35.992， P=0.000）. Conclusion The pathogens of respiratory tract infections are mainly Mycoplasma pneumoniae and influenza B virus， but influenced by epidemiological factors， synergistic susceptibility of pathogens and reagent cross-reactivity and other factors， indirect immunofluorescence detection of respiratory tract infection pathogen IgM antibody may lead to an increase in the rate of positive recombination， for this situation can be clinically analyzed by pathogen antigen detection， molecular biology detection， pathogen isolation culture and other methods to ensure the accuracy of disease diagnosis.

[Key words] Respiratory tract infection; Pathogen IgM antibody; Indirect immunofluorescence; Interference factors

呼吸道感染性疾病為臨床常見的一種肺部疾病，主要由于機(jī)體感染細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體等病原體而致病。在臨床上，不同病原體導(dǎo)致的感染其治療方法不盡相同，但因?yàn)椴煌≡w引起感染的臨床表現(xiàn)無顯著的差異，故若依靠臨床癥狀體征觀察以及臨床經(jīng)驗(yàn)難以明確診斷治療本病，極易造成抗生素濫用現(xiàn)象或耽誤病情，因此，臨床往往采用實(shí)驗(yàn)室檢查手段明確呼吸道感染的病原體[1]。該文對2018年4月—2019年2月該院收治的1 004例疑似呼吸道感染患兒進(jìn)行的9項(xiàng)病原體IgM抗體實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 對象與方法

1.1? 研究對象

方便選取該院收治的1 004例疑似呼吸道感染患兒的血清標(biāo)本為研究對象，其中有626例男患兒，378例女患兒，年齡在6個(gè)月～13歲之間，平均年齡（5.06±1.98）歲，包括96例6個(gè)月～1歲，118例1～3歲，633例3～6歲，157例6～13歲?；純杭覍賹υ撗芯績?nèi)容知情，自愿參與，簽訂了同意書，且該研究經(jīng)該院倫理委員會(huì)審批同意。

1.2? 方法

1.2.1? 儀器與試劑? 奧林巴斯BX-51熒光顯微鏡;九項(xiàng)呼吸道感染病原體1 gM抗體檢測試劑盒（間接免疫熒光法）（國械注進(jìn)20173406446）。

1.2.2? 檢測方法? （1）標(biāo)本采集：收集受檢者的空腹肘靜脈血2～3 mL，并進(jìn)行離心處理提取血樣本中血清。（2）間接免疫熒光法檢測：選用間接免疫熒光法檢測9項(xiàng)病原體的IgM抗體，具體操作方法：①按照1：1的比例將血樣樣品進(jìn)行稀釋，再經(jīng)過吸附劑處理、離心后分別取15 μL稀釋后血清樣品添加到在載玻片的10個(gè)檢測孔中，同時(shí)每次實(shí)驗(yàn)用試劑盒配套的陰性、陽性對照，做陰性、陽性對照片各一張，置于濕盒內(nèi)放37攝氏度恒溫箱靜置90 min;②用PBS緩沖液洗滌2次，蒸餾水洗滌1次;③晾干后加入適量熒光素結(jié)合物，置于濕盒內(nèi)放37攝氏度恒溫箱靜置30 min后洗滌（重復(fù)步驟②）、晾干并分別滴入適量封閉介質(zhì)，封片;④在熒光顯微鏡下觀察檢驗(yàn)結(jié)果，根據(jù)試劑盒說明書的標(biāo)準(zhǔn)判斷陰陽性。

1.3? 觀察指標(biāo)

①分析9項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體的檢測結(jié)果;②比較不同年齡段患兒呼吸道感染病原體檢測陽性率的差異。

1.4? 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)資料用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 9項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測結(jié)果分析

1 004例疑似呼吸道感染患兒的血清標(biāo)本中有402例（469項(xiàng)病原體）IgM抗體檢測陽性，陽性率40.04%。其中，單一感染338例，占84.08%，混合感染64例，占15.92%。而單項(xiàng)呼吸道感染病原體檢測結(jié)果顯示，肺炎支原體陽性率最高，占32.84%，乙型流感病毒陽性率次之，占29.64%，見表1。而且在混合感染樣本中肺炎支原體+乙型流感病毒感染混合所占比例最高，為45.31%，見表2。

2.2? 不同年齡段患兒呼吸道感染病原體檢測陽性率分析

肺炎支原體、乙型流感病毒、嗜肺軍團(tuán)菌1型、呼吸道合胞病毒在4個(gè)年齡組之間的病原體檢測陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

3? 討論

在臨床中大多數(shù)感染呼吸道病原體后的患兒具有病情重、并發(fā)癥多等特點(diǎn)，嚴(yán)重影響著患兒的生長發(fā)育[2]。因此，快速明確呼吸道感染病原體，并了解相關(guān)病原體感染分布狀況，對于促進(jìn)患兒身心健康發(fā)展至關(guān)重要。

臨床檢測呼吸道病原體的常用方法有培養(yǎng)法、PCR擴(kuò)增技術(shù)、抗原抗體檢測等。PCR擴(kuò)增技術(shù)是當(dāng)前研究中證實(shí)敏感度最高的一種檢測方法，但受檢測成本、檢測條件等因素限制，難以推廣應(yīng)用。培養(yǎng)法是明確病原體的金標(biāo)準(zhǔn)，但對檢測技術(shù)要求較高，培養(yǎng)時(shí)間長，而且容易受前期應(yīng)用抗生素影響，導(dǎo)致檢測陽性率偏低。該研究應(yīng)用的間接免疫熒光法檢測9項(xiàng)呼吸道感染病原體具有敏感性、特異性良好，檢測快速等優(yōu)點(diǎn)，尤其適合于臨床篩查。

該研究結(jié)果顯示，1 004例疑似呼吸道感染患兒的血清標(biāo)本中有402例IgM抗體檢測陽性，陽性率40.04%，與其他文獻(xiàn)報(bào)道的宜賓地區(qū)（35.0%）[3]相比，該地區(qū)的呼吸道病原體檢測陽性率較高，但較深圳地區(qū)的57.2%[4]要低，這可能與地域的差異性有關(guān)。

在病原體合并感染中，檢測出混合感染64例占15.92%，其中肺炎支原體+乙型流感病毒感染混合所占比例最高，為45.31%，與北京地區(qū)（32.8%）[5]的報(bào)道較高。筆者分析該地區(qū)混合感染陽性率較高的可能原因有以下幾項(xiàng)：①人群易感性：兒童機(jī)體免疫相對較弱，淋巴細(xì)胞數(shù)量較少，抑制病毒的能力較弱，極易同時(shí)感染多種病原體[6]。此外，受氣候環(huán)境、空氣質(zhì)量差等因素影響，病原體的協(xié)同易感性因素也會(huì)導(dǎo)致混合感染陽性升高。②試劑交叉反應(yīng)：在應(yīng)用間接免疫熒光法檢測9項(xiàng)病原體的過程中有可能是抗體之間發(fā)生沖突，或與其它試劑有效成分發(fā)生交叉反應(yīng)，進(jìn)而影響檢測結(jié)果。針對此因素，對于混合感染陽性的樣本可通過更換試劑廠家重復(fù)檢測1次進(jìn)行驗(yàn)證[7]。另外在臨床實(shí)踐中還發(fā)現(xiàn)嗜肺軍團(tuán)菌1型IgM檢測在血清稀釋1：1的時(shí)候假陽性率偏高與臨床癥狀差異較大， 其原因很可能是非軍團(tuán)菌感染的患者也經(jīng)常出現(xiàn)低滴度的交叉抗體，根據(jù)說明書的建議在嗜肺軍團(tuán)菌1型IgM檢測時(shí)適當(dāng)增加稀釋倍數(shù)可以有效提高陽性預(yù)測值， 便于臨床診斷工作。

此外，該研究結(jié)果顯示，不同年齡組患兒的不同呼吸道感染病原體易感性是不完全一致的，肺炎支原體和乙型流感病毒的抗體陽性率在3～6歲最高，分別為17.69%、17.38%;嗜肺軍團(tuán)菌1型抗體檢測陽性率在6～13歲最高，占12.74%;呼吸道合胞病毒抗體檢測陽性率在6個(gè)月～1歲最高，占11.46%。學(xué)齡前兒童肺炎支原體、乙型流感病毒檢測陽性率高可能是兒童免疫功能尚未發(fā)育完善，而且此階段兒童在主要在幼兒園中進(jìn)行集體活動(dòng)，極易發(fā)生相互感染[8]。而嗜肺軍團(tuán)菌1型陽性率在6～13歲較高，具體原因不明確，但大多數(shù)患兒是在機(jī)體感染流感病毒后并發(fā)混合感染的。呼吸道合胞病毒具有普遍易感性，6個(gè)月～1歲的幼兒機(jī)體免疫力低下，且其逐漸頻繁與外界接觸。

綜上所述，呼吸道感染的病原體主要以肺炎支原體、乙型流感病毒為主，但受流行病學(xué)因素、病原體協(xié)同易感性以及試劑交叉反應(yīng)等因素影響，間接免疫熒光法檢測呼吸道感染病原體IgM抗體有可能導(dǎo)致陽性重和率升高，針對此情況臨床可采用病原體抗原檢測、分子生物學(xué)檢測、病原體分離培養(yǎng)等方法加以分析驗(yàn)證，保證疾病診斷的準(zhǔn)確性。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2020-03-23）

[作者簡介] 江云川（1983-），男，云南楚雄人，本科，主管檢驗(yàn)師，研究方向：臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。

[通訊作者] 張瑛（1985-），女，云南昭通人，本科，主管檢驗(yàn)師，研究方向：臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)， E-mail：308448544@qq.com。