石榴皮藥材的快速多信息梯度薄層鑒別方法

付 莉，韓桂茹△，蘭新財(cái)，趙麗麗

（1.河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊050011；2.浙江金大康動(dòng)物保健品有限公司，浙江 金華301016）

石榴皮是臨床止瀉常用藥材，具有澀腸止瀉[1-3]、止血、驅(qū)蟲(chóng)[4]之功效，用于久瀉、久痢、便血、脫肛、崩漏、帶下、蟲(chóng)積腹痛。其主要含鞣質(zhì)類和黃酮類化合物[5]，如沒(méi)食子酸、鞣花酸等，黃酮類化合物包括木犀草素、山柰酚、槲皮素、芹菜素和柚皮素及其與糖結(jié)合成的苷類等，包括脂溶性、中極性和水溶性成分。石榴皮的薄層鑒別鮮有報(bào)道，目前多以鞣酸類成分為指標(biāo)[6-8]，以酸性展開(kāi)劑進(jìn)行鑒別。2015年版《中國(guó)藥典（一部）》石榴皮藥材的薄層鑒別方法[9]煩瑣、費(fèi)時(shí)，且需有機(jī)溶劑110 mL。有機(jī)溶劑的蒸干嚴(yán)重污染環(huán)境，且檢測(cè)信息單一，不利于質(zhì)量的控制。若供試品溶液不經(jīng)反復(fù)萃取、除雜、排除鞣酸聚合物，以酸性展開(kāi)劑展開(kāi)的薄層色譜圖中都會(huì)出現(xiàn)部分斑點(diǎn)拖尾[6]，很難獲得所有斑點(diǎn)都分離良好的色譜圖。為給石榴皮藥材及其不同工藝制備的多種制劑提供簡(jiǎn)便、快捷、低成本、高效率的多信息鑒別方法，本研究中對(duì)10批石榴皮藥材進(jìn)行了快速多信息梯度薄層鑒別研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KH-100B型超聲波清洗儀（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司，功率為200 W，頻率為50 kHz）；2F-2型三用紫外儀（上海安亭電子儀器廠）；AX205DU型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥

石榴皮藥材由浙江金大康保健品有限公司提供，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)研究院段吉平中藥師鑒定為正品；石榴皮對(duì)照藥材（批號(hào)為121043-201304，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷（分析純，天津市百世化工有限公司）；濃氨試液（分析純，石家莊市華迪化工工貿(mào)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 石榴皮藥材脂溶性成分

取石榴皮藥材和對(duì)照藥材各0.5 g，研細(xì)，分別加70%甲醇2 mL，超聲處理20 min，取上清液作為供試品溶液和對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各6～8μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-濃氨試液（5∶3∶0.5，V/V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；再噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；再在日光下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)。詳見(jiàn)圖1。

2.2 石榴皮藥材中極性成分

吸取2.1項(xiàng)下供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各6～8μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶2∶4∶0.5，V/V/V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；再噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；再置暗室內(nèi)透過(guò)燈光檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)。詳見(jiàn)圖2。

2.3 石榴皮藥材水溶性成分

吸取2.1項(xiàng)下供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各6～8μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（1∶2∶4∶0.5，V/V/V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；再噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；再置暗室內(nèi)透過(guò)燈光檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)。詳見(jiàn)圖3。

3 討論

3.1 定義中藥材梯度多信息薄層鑒別

圖1石榴皮脂溶性成分薄層色譜圖

圖2石榴皮中極性成分薄層色譜圖

圖3石榴皮水溶性成分薄層色譜圖

是將高效液相梯度洗脫的含義引申到中藥薄層鑒別領(lǐng)域，將中藥材中的脂溶性、中極性及水溶性成分，依據(jù)相似相溶的溶解定律，按非極性、中極性、極性的梯度順序，將藥材中的大部分有效成分，按極性大小，在極少數(shù)的薄層板上，多種檢視條件下，獲得盡可能全的斑點(diǎn)信息圖譜，得到從脂溶性成分到水溶性成分的多信息薄層色譜圖和鑒別方法。

3.2 3種不同極性的梯度展開(kāi)劑選擇

在3塊薄層板上，檢出的主斑點(diǎn)是不一樣的，說(shuō)明檢出的是極性不同的成分；且每塊薄層板上，各自3種檢視條件下，檢出的成分不完全相同；由圖3 A至圖3 B可知，亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)形狀不同，證明不是同一種成分，發(fā)揮了不同檢視條件下的信息斑點(diǎn)互補(bǔ)；3塊薄層板共檢出互不重合的信息斑點(diǎn)17個(gè)，經(jīng)確認(rèn)這些斑點(diǎn)均無(wú)沒(méi)食子酸。

3.3 優(yōu)勢(shì)

本方法簡(jiǎn)便、快捷，藥材與對(duì)照藥材只需用含水甲醇超聲處理，上清液點(diǎn)樣，展開(kāi)，在不同檢視條件下檢視即可；只需藥材與對(duì)照藥材各0.5 g，前處理溶劑4 mL，時(shí)間20 min，與2015年版《中國(guó)藥典（一部）》收載的石榴皮薄層鑒別需藥材3 g、提取溶劑110 mL、總提取溶劑220 mL（加上對(duì)照藥材的提?。?、時(shí)間3 h、且斑點(diǎn)單一相比，該薄層鑒別方法具有節(jié)約資源、提高效率、減少環(huán)境污染、提升質(zhì)量監(jiān)督指標(biāo)的實(shí)用價(jià)值。本鑒別方法與已報(bào)道方法的不同之處還在于，非極性、中極性和水溶成分的展開(kāi)劑都是堿性的，而已報(bào)道方法展開(kāi)劑都是酸性或偏酸性的，堿性展開(kāi)劑使一些酸性物質(zhì)的酯鍵水解成鹽，以離子體形式存在，克服了多酚羥基化合物或其聚合體的拖尾現(xiàn)象，使各斑點(diǎn)收縮、集中，而呈現(xiàn)出的各成分雖相互交叉，但在不同檢視條件下，互不干擾，都能呈現(xiàn)出清晰的顏色斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。