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    老年急性心肌梗死患者血清微小核糖核酸-133a、微小核糖核酸-208a表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變程度相關(guān)性研究

    2020-12-05 11:10:34張小坤王玉霞劉亞寧
    關(guān)鍵詞:內(nèi)皮細(xì)胞冠脈程度

    張小坤,王玉霞,劉亞寧,謝 明

    華北石油管理局總醫(yī)院 心內(nèi)一科,河北 任丘 062550

    急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)在老年群體中患病率高,其病變機(jī)制較復(fù)雜,包括炎癥因子聚集、內(nèi)皮細(xì)胞功能損害、冠脈粥樣硬化、血栓形成等,具有發(fā)病急、病情進(jìn)展快等特點(diǎn),若未及時(shí)治療,可出現(xiàn)心力衰竭、心律失常、心臟破裂等并發(fā)癥,預(yù)后欠佳[1]。有研究報(bào)道,微小核糖核酸(microRNA,miR)與AMI患者內(nèi)皮細(xì)胞功能損害、炎癥聚集、脂代謝紊亂、冠狀動(dòng)脈病變等過程密切相關(guān)[2]。miR-208a對(duì)心臟發(fā)育影響較大,參與心肌損傷病變過程,臨床將其視為評(píng)估心肌損傷的重要標(biāo)志物[3]。有研究報(bào)道,當(dāng)心肌組織受損后,可導(dǎo)致miR-208a表達(dá)增高[4]。miR-133a則參與慢性心力衰竭等病變過程[5]。有研究報(bào)道,miR-133a表達(dá)水平與AMI主要不良心血管事件發(fā)生率有關(guān)[6]。血清miR-208a、miR-133a可能參與AMI病理過程,有望成為評(píng)估AMI病情的潛在指標(biāo)。目前,關(guān)于miR-208a、miR-133a表達(dá)與AMI病變程度的相關(guān)研究較少。本研究旨在觀察AMI患者血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平,分析其與冠脈病變程度的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取自2017年2月至2019年2月收治的120例AMI患者為AMI組,患者均存在不同程度的冠狀動(dòng)脈病變;選取同期收治的80例穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pcctoris,SAP)患者為SAP組;選取同期體檢的72例健康者為健康組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)AMI、SAP符合《臨床診療指南·心血管分冊(cè)》中診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。(2)AMI患者為首次發(fā)病,冠脈造影提示至少存在1支血管狹窄超過50%。(3)AMI、SAP患者意識(shí)清醒,認(rèn)知功能、溝通能力良好。(4)AMI、SAP患者病例資料齊全。(5)健康體檢者身體健康狀況良好,既往無嚴(yán)重病史。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)惡性腫瘤病史者。(2)伴有心肌炎、先天性心臟病者。(3)肝、腎等器官嚴(yán)重受損者。(4)既往有精神病史者。(5)既往存在心臟手術(shù)史者。(6)近3個(gè)月內(nèi)有慢、急性感染病史者。3組患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)等臨床資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),研究對(duì)象均簽署知情同意書。

    表1 3組患者臨床資料比較/例(百分率/%)

    1.2 研究方法 分別于入院當(dāng)日或體檢當(dāng)日空腹取3 ml肘靜脈血,3 000 r/min離心5 min,離心半徑10 cm,分離血清存放于低溫冰箱待檢測(cè)。采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)3組血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平。主要儀器:冷凍高速離心機(jī)(湖南邁克爾,VL-200R)、熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀(美國Bio-rad,CFX96)、電子天平(日本島津,TW-O5B)、移液器(瑞士伊孚森,SOCOREX)、滅菌器(日本ALP,CL-32L)。主要試劑:無水乙醇(國藥集團(tuán),規(guī)格:500 ml)、血清miRNA提取試劑盒(北京天根生物)、miR-133a引物(銳博科技)、miR-208a引物(銳博科技)。采用血清miRNA提取試劑盒對(duì)總RNA進(jìn)行提取,并經(jīng)反轉(zhuǎn)錄處理成互補(bǔ)DNA,具體操作參考說明書。miR-133a引物序列,上游5′-CGCCGGTTACTGAGACACATTC-3′,下游5′-TGCAGATCGAA TATTCCAGCATAC-3′;miR-208a引物序列,上游5′-GTCCTTCAAGCAGACCGATGT-3′,下游5′-CAGCACTCAGTCAACGTCTCA-3′。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)條件:預(yù)變性95℃ 10 min 1個(gè)循環(huán);95℃ 2 s,60℃ 20 s,70℃ 10 s,49個(gè)循環(huán)。miR-133a、miR-208a相對(duì)表達(dá)量以2-△△CT表示,二者均以U6視為內(nèi)參基因,引物序列上游5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′,下游5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。

    1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較3組血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平。對(duì)AMI患者行冠狀動(dòng)脈造影,根據(jù)Gensini評(píng)分[8]明確AMI患者冠狀動(dòng)脈病變程度,總分<25分為輕度,總分25~50分為中度,總分>50分為重度,比較不同冠狀動(dòng)脈病變程度的AMI患者血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平。分析AMI患者血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性,血清miR-133a、miR-208a對(duì)冠狀動(dòng)脈病變加重的評(píng)估價(jià)值及AMI患者冠脈病變加重的危險(xiǎn)因素。

    2 結(jié)果

    2.1 3組血清miR-133a、miR-208a比較 AMI組、SAP組的血清miR-133a、miR-208a相對(duì)表達(dá)量高于健康組,且AMI組高于SAP組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表2 3組血清miR-133a、miR-208a相對(duì)表達(dá)量比較

    2.2 不同冠狀動(dòng)脈病變程度患者血清miR-133a、miR-208a比較 重度、中度病變患者的血清miR-133a、miR-208a相對(duì)表達(dá)量均高于輕度病變患者,且重度病變患者高于中度病變患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

    表3 不同冠狀動(dòng)脈病變程度患者血清miR-133a、miR-208a比較

    2.3 血清miR-133a、miR-208a與AMI冠狀動(dòng)脈病變程度相關(guān)性 以Gensini評(píng)分反映冠狀動(dòng)脈病變程度,AMI組患者Gensini評(píng)分為(45.23±20.76)分。經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析顯示,血清miR-133a、miR-208a與AMI冠狀動(dòng)脈病變程度呈正相關(guān)(r=0.729、r=0.680,P<0.05)。見圖1。

    2.4 血清miR-133a、miR-208a對(duì)AMI冠狀動(dòng)脈病變加重的評(píng)估價(jià)值 以中度、重度患者為冠狀動(dòng)脈病變加重,ROC曲線顯示,血清miR-133a、miR-208a及二者聯(lián)合評(píng)估冠脈病變加重的ROC曲線下面積分別為0.751、0.774、0.854。見表4、圖2。

    表4 血清miR-133a、miR-208a對(duì)AMI冠狀動(dòng)脈病變加重的評(píng)估價(jià)值

    2.5 AMI冠脈病變加重的危險(xiǎn)因素分析 采用Logistic回歸模型對(duì)各變量進(jìn)行量化賦值,血清miR-133a、miR-208a以ROC曲線得出的截?cái)嘀禐榻邕M(jìn)行賦值。以性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙史、飲酒史、糖尿病、高血壓以及血清miR-133a、miR-208a相對(duì)表達(dá)量作為自變量,以AMI冠脈狹窄是否加重作為因變量。Logistic回歸分析結(jié)果顯示,糖尿病、高血壓以及血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平增高是AMI冠脈病變加重的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表5。

    表5 AMI冠脈病變加重的危險(xiǎn)因素分析

    3 討論

    冠狀動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展是導(dǎo)致AMI發(fā)病的重要因素之一,粥樣斑塊形成需要一定時(shí)間,這期間一旦血管壁炎癥受損程度加重,會(huì)促進(jìn)脂質(zhì)堆積,引起巨噬細(xì)胞聚集,纖維帽厚度下降,促使斑塊破裂,導(dǎo)致局部血小板大量聚集,誘發(fā)血栓,增加AMI發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[9]。盡早評(píng)估、診斷冠狀動(dòng)脈病變程度是改善預(yù)后的關(guān)鍵。目前,關(guān)于評(píng)估冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重度的可靠生物學(xué)標(biāo)志物的研究較少。有研究報(bào)道,miRNA在心血管疾病進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用,如冠心病、心力衰竭等疾病中均發(fā)現(xiàn)有miRNA參與,其涉及的機(jī)制較復(fù)雜,可影響免疫細(xì)胞的分化、發(fā)育過程,調(diào)節(jié)免疫、炎癥系統(tǒng)[10]。miR-133a、miR-208a與心肌受損、心臟衰竭密切相關(guān),二者影響心臟轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)[11-12]。miR-133a、miR-208a表達(dá)異??赡芘c心肌損傷病變存在關(guān)聯(lián)。miR-133a能調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能,參與心血管疾病進(jìn)展[13]。miR-208a表達(dá)異常能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞功能受損,導(dǎo)致大量炎癥因子局部聚集,誘發(fā)不良事件,加重病情[14]。

    本研究結(jié)果顯示,AMI患者血清miR-133a、miR-208a的相對(duì)表達(dá)量明顯增高,且血清miR-133a、miR-208a與AMI冠狀動(dòng)脈病變程度呈正相關(guān)。miR-133a在心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá),可調(diào)控平滑肌細(xì)胞增殖,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化[15]。有研究發(fā)現(xiàn),心肌梗死患者損傷面積越大,受損程度越重,miR-133a表達(dá)越高,且表達(dá)增高會(huì)影響冠脈循環(huán)[16]。筆者推測(cè),在心肌組織受損后,因局部受損細(xì)胞內(nèi)環(huán)境改變,可導(dǎo)致miR-133a釋放量增加,并進(jìn)入冠脈循環(huán)。心肌受損、冠狀動(dòng)脈病變程度越重,miR-133a釋放量可能越大,最終參與血液循環(huán),導(dǎo)致血清miR-133a表達(dá)水平增高。miR-208a能促進(jìn)心肌組織重構(gòu),在miR-208a表達(dá)異常的情況下,可誘發(fā)心律失常,這一過程可能與其促進(jìn)β-主要組織相容性復(fù)合體增高有關(guān)[17]。筆者推測(cè),AMI患者因心肌組織受損,導(dǎo)致miR-208a異常表達(dá),上調(diào)β-主要組織相容性復(fù)合體水平,致β-主要組織相容性復(fù)合體與α主要組織相容性復(fù)合體處于失衡狀態(tài),進(jìn)一步損害心功能與內(nèi)皮細(xì)胞,加重冠狀動(dòng)脈病變程度。上述分析表明,血清miR-133a、miR-208a表達(dá)水平增高說明患者存在心肌組織損傷,可加重內(nèi)皮細(xì)胞功能損害,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生,這可能是二者加重AMI患者冠狀動(dòng)脈病變的機(jī)制。本研究繪制ROC曲線證實(shí),血清miR-133a、miR-208a對(duì)AMI冠狀動(dòng)脈病變加重有一定評(píng)估價(jià)值,ROC曲線下面積均>0.700,總體評(píng)價(jià)效果較理想。

    本研究中,采用Gensini評(píng)分反映AMI患者的冠狀動(dòng)脈病變程度。結(jié)果顯示,血清miR-133a、miR-208a與AMI冠狀動(dòng)脈病變程度呈正相關(guān),二者表達(dá)水平越高,冠狀動(dòng)脈病變程度越重。有研究報(bào)道,miR-133a、miR-208a在血清內(nèi)表達(dá)上調(diào),有利于炎癥因子釋放入血,引起機(jī)體炎癥,可能誘發(fā)血栓性靜脈炎,促進(jìn)血栓形成[18-19]。筆者推測(cè),miR-133a、miR-208a表達(dá)增高,可能通過加重機(jī)體炎癥、促進(jìn)血栓形成來導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈病變加重。本研究發(fā)現(xiàn),血清miR-133a、miR-208a異常增高是AMI冠狀動(dòng)脈病變加重的危險(xiǎn)因素。在未來的AMI治療探索中,miR-133a、miR-208a有望作為新的治療靶點(diǎn)。此外,高血壓、糖尿病也與AMI冠狀動(dòng)脈病變程度有關(guān)。高血壓可導(dǎo)致患者冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮功能受損,還可增強(qiáng)血小板粘附作用,促進(jìn)脂蛋白大量沉積,加重冠狀動(dòng)脈病變[20]。糖尿病患者若持續(xù)處于高血糖狀態(tài),可導(dǎo)致凝血機(jī)制異常,促進(jìn)血小板聚集,上調(diào)纖維蛋白原水平,有利于冠狀動(dòng)脈血栓形成,加重冠狀動(dòng)脈病變[21]。本研究選取樣本較少,且未分析血清miR-133a、miR-208a表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響,仍需在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。

    綜上所述,血清miR-133a、miR-208a在AMI患者中表達(dá)明顯增高,且與冠狀動(dòng)脈病變密切相關(guān),二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)冠狀動(dòng)脈病變程度具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。

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