CD44、CD133和NLR與胃癌病理特征的關(guān)系及對(duì)預(yù)后評(píng)估的意義

王紹榮 李 宏 唐春梅

胃癌(GC)為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，占全球癌癥發(fā)病率第4位，國(guó)內(nèi)GC患者每年新增約679萬(wàn)人[1]。近年來(lái)GC診治雖取得較大進(jìn)步，但進(jìn)展期GC患者的預(yù)后依然較差，據(jù)統(tǒng)計(jì)進(jìn)展期GC患者5年生存率<10%[2]。GC患者缺乏典型臨床表現(xiàn)，病情隱匿且無(wú)有效標(biāo)志物，探尋新型分子標(biāo)志物將有利于GC的早期診治。相關(guān)研究證實(shí)腫瘤干細(xì)胞上標(biāo)記蛋白表達(dá)水平隨著腫瘤體積增大、浸潤(rùn)深度加深以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多而明顯升高[3]，由此提示腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物在腫瘤浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移中起到重要作用，或可作為GC患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)。近期有研究發(fā)現(xiàn)CD44、CD133在胃間質(zhì)瘤組織中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)[4]；此外文獻(xiàn)報(bào)道中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(NLR)在GC預(yù)后評(píng)估中有一定價(jià)值[5]。但目前國(guó)內(nèi)關(guān)于CD44、CD133和NLR與胃癌病理特征關(guān)系及在預(yù)后中的意義尚處于初步探索階段，為此本文展開(kāi)臨床對(duì)照性研究，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年6月至2019年6月本院收治的100例GC患者(記為GC組)的臨床病理及隨訪資料，①納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整；病理組織學(xué)檢查明確診斷為GC；年齡>18歲；術(shù)前3個(gè)月未應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、粒細(xì)胞集落刺激因子及性激素等藥物治療。②排除標(biāo)準(zhǔn)：合并重度心、肝、腎等重要臟器功能障礙；合并血液性疾病或其他影響炎性指標(biāo)的疾??；存在嚴(yán)重精神疾?。蝗焉锲诨虿溉槠谂?；合并其他惡性腫瘤；非原發(fā)性胃癌者。100例GC患者，男性58例、女性42例，年齡19～60歲，平均(52.25±3.02)歲，臨床分期：Ⅰ期24例、Ⅱ期50例、Ⅲ期26例，腺癌47例、鱗癌53例，分化程度：低分化21例、中分化54例、高分化25例。收集GC患者石蠟包埋癌組織及其癌旁石蠟包埋組織，所有標(biāo)本均經(jīng)我院病理科進(jìn)一步病理檢驗(yàn)。另以同期本院診治的35名慢性胃炎患者作為良性組，男性21例、女性14例，年齡20～58歲，平均(51.99±2.91)歲。良性組與GC組患者性別、年齡基線(xiàn)資料比較，差異不顯著(P>0.05)，有可比性。

1.2 研究方法

(1)CD44、CD133免疫組化染色：組織切片脫蠟水化-消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性-抗原修復(fù)-滴加一抗、二抗-DAB顯色-染色-脫水-透明-封片；CD44、CD133免疫組化陽(yáng)性結(jié)果判斷[6]：細(xì)胞在細(xì)胞質(zhì)著色(呈棕黃色)，半定量積分法判斷染色強(qiáng)度，每份標(biāo)本隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野取平均值，陽(yáng)性細(xì)胞占比≤5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分，陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)著色深度：不著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別對(duì)應(yīng)0、1、2、3分，染色強(qiáng)度、著色深度兩項(xiàng)積分相乘得分0～2分為陰性，3～4分為弱陽(yáng)性，5～8分為中陽(yáng)性，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性，本研究中擬定≥3分為CD44或CD133陽(yáng)性表達(dá)。(2)NLR測(cè)定：采集GC患者術(shù)前肘靜脈血，采用血液細(xì)胞分析儀(SYSMEX XE-2000)檢測(cè)受檢者血常規(guī)指標(biāo)，包含淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)等，計(jì)算NLR。(3)預(yù)后分析：生存時(shí)間以患者手術(shù)當(dāng)日為起點(diǎn)，隨訪截至日期(術(shù)后2年)或患者死亡時(shí)間為終點(diǎn)。

1.3 分析指標(biāo)

(1)各組CD44、CD133、NLR表達(dá)情況，比較GC癌組織、癌旁組織CD44、CD133陽(yáng)性表達(dá)率，GC組、良性組的NLR比較；(2)CD44、CD133和NLR與GC患者病理特征的關(guān)系分析；(3)CD44、CD133和NLR表達(dá)與GC患者預(yù)后的關(guān)系分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組CD44、CD133、NLR表達(dá)情況

GC癌組織中CD44、CD133陽(yáng)性表達(dá)率相較于癌旁組織中的明顯高(P<0.05)，見(jiàn)表1。GC組血清中NLR水平為(1.99±0.28)，明顯高于良性組的(1.68±0.23)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.887,P=0.000)。

表1 GC癌組織及其癌旁組織中CD44、CD133陽(yáng)性表達(dá)情況(例,%)

2.2 CD44、CD133、NLR與GC患者病理特征的關(guān)系

GC患者CD44、CD133陽(yáng)性表達(dá)率在病理分期、分化程度、瘤灶直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分布上存在明顯差異(P<0.05)，而瘤灶直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移GC患者NLR明顯高于同類(lèi)其它項(xiàng)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 CD44、CD133和NLR與GC患者病理特征的關(guān)系

2.3 CD44、CD133和NLR表達(dá)與GC患者預(yù)后的關(guān)系分析

GC患者外周血NLR為(1.99±0.28)，當(dāng)NLR為2.35時(shí)，約登指數(shù)最大，故而將NLR=2.35為最佳截點(diǎn)，將GC患者分為NLR高組(NLR>2.35，n=31)、NLR低組(NLR≤2.35，n=69)；此外依據(jù)GC患者癌組織中CD133、CD44表達(dá)情況分為CD133陽(yáng)性組(n=82)、CD133陰性組(n=18)，CD44陽(yáng)性組(n=86)、CD44陰性組(n=14)。100例GC患者均獲取了術(shù)后2年隨訪資料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NLR低組術(shù)后2年生存率[89.86%(62/69)]明顯高于NLR高組[32.26%(10/31)](χ2=35.198，P<0.05)；CD133陰性組術(shù)后2年生存率[94.44%(17/18)]明顯高于CD133陽(yáng)性組[67.07%(55/82)](χ2=5.485，P<0.05)；而CD44陰性組術(shù)后2年生存率[85.71%(12/14)]與CD44陽(yáng)性組的[69.77%(60/86)]相較差異不顯著(χ2=1.519，P>0.05)，見(jiàn)圖1。

圖1 NLR、CD133、CD44陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)的GC患者生存曲線(xiàn)

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞中有成體干細(xì)胞自我更新及不對(duì)稱(chēng)分裂、多向分化能力的細(xì)胞(即腫瘤干細(xì)胞)，腫瘤干細(xì)胞是腫瘤形成以及不斷生長(zhǎng)的根源，其中CD44、CD133是腫瘤干細(xì)胞中備受關(guān)注的特異性標(biāo)志物，兩者在實(shí)體瘤(如卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)直腸癌等)中均被檢測(cè)到[7]。有學(xué)者認(rèn)為炎性介質(zhì)以及細(xì)胞因子為腫瘤局部微環(huán)境的重要部分，慢性炎性反應(yīng)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而術(shù)前NLR表達(dá)水平增高患者常存在淋巴細(xì)胞減少以及中性粒細(xì)胞增多，這有助于腫瘤前炎性反應(yīng)的應(yīng)答[8]。文獻(xiàn)報(bào)道NLR在尿路上皮腫瘤、GC及黑色素瘤等患者預(yù)后中發(fā)揮重要作用[9]。因此，分析CD44、CD133和NLR與胃癌病理特征關(guān)系及在預(yù)后中的意義有重要的價(jià)值。

本次分析結(jié)果顯示：GC癌組織中CD44、CD133陽(yáng)性表達(dá)率相較于癌旁組織中的明顯高，GC組血清中NLR明顯高于良性組，提示CD44、CD133在GC患者癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，而外周血中淋巴細(xì)胞明顯減少、中性粒細(xì)胞明顯增多；進(jìn)一步分析結(jié)果顯示GC患者分期越高、分化程度越低、瘤灶直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CD44、CD133陽(yáng)性表達(dá)率越高，初步提示CD44、CD133表達(dá)與GC患者病理特征密切相關(guān)。CD133主要特異性表達(dá)于組織干細(xì)胞群中，CD44屬于一種細(xì)胞黏附分子，研究證實(shí)其可介導(dǎo)淋巴細(xì)胞的歸巢、淋巴細(xì)胞向炎性部位以及黏膜相關(guān)淋巴組織歸位以及調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)等[10]，兩者或在胃腸癌干細(xì)胞參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用，可有效預(yù)測(cè)GC病情嚴(yán)重程度。本次研究則間接說(shuō)明CD133、CD44或參與了GC發(fā)生和發(fā)展，為GC患者新型靶向抗癌治療藥物的研制提供參考。此外，本次分析結(jié)果顯示瘤灶直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移GC患者NLR明顯高于同類(lèi)其它項(xiàng)，說(shuō)明GC瘤灶大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與NLR密切相關(guān)，NLR值越高表明患者外周血中淋巴細(xì)胞越少而中性粒細(xì)胞越多，中性粒細(xì)胞增多會(huì)通過(guò)分泌活性氧從而損傷癌前病變細(xì)胞的DNA，并產(chǎn)生血管生長(zhǎng)因子繼而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)化形成，通過(guò)促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶分泌從而損傷細(xì)胞外基質(zhì)，干擾T細(xì)胞應(yīng)答[11]，而淋巴細(xì)胞(可產(chǎn)生一系列細(xì)胞毒性因子，通過(guò)多種途徑抑制并殺傷腫瘤細(xì)胞)減少則意味著對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用減弱[12]，因此NLR與腫瘤患者的病理特征密切相關(guān)。

張鵬等[13]研究指出GC患者CD133表達(dá)情況與疾病發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。而胡根等[14]的研究則發(fā)現(xiàn) CD44、CD133 雙陽(yáng)性表達(dá)是影響胃間質(zhì)瘤患者術(shù)后生存的獨(dú)立預(yù)后因素，CD44、CD133 可作為臨床評(píng)價(jià)胃間質(zhì)瘤腫瘤生物學(xué)行為及預(yù)后的有效指標(biāo)。黃婷婷等[15]研究則證實(shí)術(shù)前NLR在惡性腫瘤發(fā)生及預(yù)后中起到重要作用。本次分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)NLR低組術(shù)后2年生存率89.86%(62/69)明顯高于NLR高組32.26%(10/31)，CD133陰性組術(shù)后2年生存率94.44%(17/18)明顯高于CD133陽(yáng)性組67.07%(55/82)，而CD44陰性組術(shù)后2年生存率85.71%(12/14)與CD44陽(yáng)性組的69.77%(60/86)相較差異不顯著，由此證實(shí)GC患者預(yù)后與CD133、NLR表達(dá)情況密切相關(guān)，而GC患者預(yù)后與CD44是否存在密切關(guān)系尚存在爭(zhēng)議，未來(lái)還需進(jìn)一步深入探究。

綜上，CD44、CD133和NLR與GC患者病理特征、預(yù)后相關(guān)，或可為GC患者早期診治提供重要參考。