EGFR表達(dá)與結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及其調(diào)控作用

蔡宇翔， 謝仲鵬， 張懷念

武漢大學(xué)中南醫(yī)院病理科，武漢 430071

作為臨床最常見的惡性消化道腫瘤之一，結(jié)腸癌(colon cancer)具有發(fā)生發(fā)展迅速、侵襲范圍廣、轉(zhuǎn)移速度快、病死率高的特點(diǎn)[1]。依據(jù)現(xiàn)今的外科醫(yī)療條件，早期結(jié)腸癌可通過(guò)根治性手術(shù)切除得到理想的治療效果[2]，而晚期結(jié)腸癌一般采用手術(shù)與化療相輔助的治療方案，但是結(jié)腸癌患者的術(shù)后再次復(fù)發(fā)以及癌細(xì)胞的不可控性轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致結(jié)腸癌患者死亡的最重要的原因之一[3]。隨著分子病理學(xué)在臨床應(yīng)用技術(shù)上的突破，腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子研究逐漸應(yīng)用于結(jié)腸癌的診斷、治療中[4]。表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是原癌基因CerbB-1的表達(dá)產(chǎn)物，具有酪氨酸激酶跨膜活性，其介導(dǎo)的信號(hào)通路能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞核內(nèi)基因的表達(dá)，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)分化[5]。有報(bào)道稱，EGFR直接參與器質(zhì)性腫瘤如大腸癌、大腸腺癌的形成過(guò)程[6]，近年來(lái)越來(lái)越多的研究證實(shí)EGFR在結(jié)腸癌中存在過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象[7]，并且伴隨有整合素β6(anti-integrin beta 6，ITGB6，屬于跨膜糖蛋白受體，是一種粘附分子)表達(dá)異常的情況出現(xiàn)，但未見關(guān)于EGFR以及ITGB6與結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的報(bào)道。本研究以臨床結(jié)腸癌組織標(biāo)本以及結(jié)腸癌細(xì)胞株為研究對(duì)象，探討EGFR對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移的影響及其作用機(jī)制，希望為結(jié)腸癌的診斷和治療提供新的線索和靶向位點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 結(jié)腸癌患者臨床資料及組織樣本收集

收集2017年3月～2019年3月于我院接受手術(shù)治療的120例結(jié)腸癌患者的臨床資料以及手術(shù)切除的癌組織及其對(duì)應(yīng)的正常癌旁組織(距離癌組織超過(guò)2.5 cm處)。患者包括男60例，女60例，年齡38～72歲，中位年齡51歲。所有患者均以手術(shù)切除病灶，術(shù)前均未接受化療或者放療。所有入選患者均對(duì)本研究的目的知情，并已經(jīng)簽署同意書。用以上組織構(gòu)建結(jié)腸癌組織芯片，在免疫組織化學(xué)染色后組織標(biāo)本均未出現(xiàn)缺失，且組織病理學(xué)檢測(cè)證實(shí)為原發(fā)性結(jié)腸癌。將患者的性別、年齡、腫瘤大小、組織分化程度、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、臨床分期情況分別與EGFR的表達(dá)做Spearman相關(guān)性分析。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

1.2.1 細(xì)胞 人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116來(lái)自上海中科院細(xì)胞庫(kù)，EGFR過(guò)表達(dá)病毒載體rAAV9-EGFR及空載體rAAV9-EGFR-NC(陰性對(duì)照)由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供。

1.2.2 主要試劑 DMEM培養(yǎng)液(TOYOBO，日本)；Trizol試劑盒(TaKaRa，日本)；Ⅰ、Ⅲ型膠原兔多克隆抗體(Abcam，美國(guó))；麻醉劑、ITGB6抗體、EGFR抗體、鼠抗GAPDH單克隆抗體(Jackson，美國(guó))，Transwell小室(BD，美國(guó))；CCK-8試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Western blot試劑盒(Sigma，美國(guó))；全蛋白抽提試劑盒、免疫組化試劑盒(QIAGEN，德國(guó))；Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑(Vector，美國(guó))。

1.2.3 主要儀器 蘇凈Airtech超凈工作臺(tái)(北京六一儀器廠)；SANYO MCO-15AC細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國(guó)強(qiáng)生公司)；Nikon Ti-U/Ti-s倒置熒光顯微鏡(日本三菱公司)；5810R型高速離心機(jī)(日本島津公司)；Roche R480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Promega公司)；Multiskan MK3酶標(biāo)儀(美國(guó)Corning公司)。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)結(jié)腸組織中EGFR mRNA的表達(dá)

Trizol法提取結(jié)腸癌組織總RNA，按照PrimeScrip反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒要求執(zhí)行。采用SYBR Premix Ex Taq說(shuō)明書配置PCR反應(yīng)體系，反應(yīng)條件為①預(yù)變性：75℃，120 s；②變性：90℃，5 min；③退火：60℃，60 s；④延伸72℃，30 s；⑤PCR儀采集熒光信號(hào)40個(gè)循環(huán)，以U6作為內(nèi)參。U6上游引物為5′-CT-CGCTTCGGCAGCACA-3′，下游引物為5′-AAC-GCTTCACGAATTTGCGT-3′；EGFR上游引物為5′-ACTGTCTCCCAACCCTTGTA-3′，下游引物為5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。mRNA相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt表示，每個(gè)樣本獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

1.4 免疫組化法檢測(cè)EGFR的蛋白表達(dá)

將結(jié)腸癌組織樣本固定包埋并切片，用二甲苯和梯度乙醇脫蠟后置于檸檬酸鹽緩沖液中進(jìn)行修復(fù)，以充分暴露抗原決定簇。然后用3%雙氧水室溫下浸泡10 min，封閉，分別加稀釋好的一抗4℃過(guò)夜孵育，次日沖洗干凈，分別加入適量生物素標(biāo)記的二抗室溫孵育30 min，清洗。加適量二氨基聯(lián)苯胺(DAB)作用2～5 min后用去離子水終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染1.5～2 min，清洗后以梯度乙醇脫水，二甲苯浸泡并干燥后用中性樹膠封片，鏡檢觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。染色評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)以腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性，每個(gè)切片隨機(jī)取10個(gè)400倍視野，以100個(gè)細(xì)胞為計(jì)數(shù)單位，按染色面積及細(xì)胞被染色強(qiáng)度計(jì)分，計(jì)分原則如下：染色面積范圍～10%為0分，～25%為1分，～50%為2分，～75%為3分，>75%為4分；細(xì)胞無(wú)染色0分，弱黃色1分，黃色染色2分，棕黃色3分。兩計(jì)分之和大于或等于3分則為表達(dá)陽(yáng)性，低于3分則為表達(dá)陰性。由腫瘤病理科2位醫(yī)師雙盲閱片，單獨(dú)評(píng)分，最后統(tǒng)一匯總，對(duì)有爭(zhēng)議的評(píng)分需要經(jīng)病理科2位以上主任醫(yī)師復(fù)核修訂，得到最終結(jié)果。

1.5 細(xì)胞培養(yǎng)以及轉(zhuǎn)染

將高侵襲性HCT116細(xì)胞接種于含有10%滅活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞融合度達(dá)85%時(shí)，胰蛋白酶消化傳代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，采用Lipofectamine 3000通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)法，將濃度均為100 nmol/L的rAAV9-EGFR和rAAV9-EGFR-NC轉(zhuǎn)染至細(xì)胞，轉(zhuǎn)染操作完成后，常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞48 h進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞分為rAAV9-EGFR組、rAAV9-EGFR-NC組以及空白對(duì)照組(HCT116細(xì)胞，僅加入Lipofectamine 3000試劑)。

1.6 CCK-8及平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖

調(diào)整細(xì)胞密度，以1×105個(gè)/孔接種于96孔培養(yǎng)板中，分組處理同上，輕輕混勻后，置入37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，每孔加CCK-8溶液20 μL，37℃避光4 h后，棄掉孔內(nèi)液體，再加DMSO各100 μL，置于37℃搖床上快速振蕩15 min，以便充分溶解結(jié)晶物，最后將96孔板置于酶標(biāo)儀上檢測(cè)492 nm處的吸光度(A)值。將上述各組細(xì)胞按每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度鋪6孔板繼續(xù)培養(yǎng)，隔周更換新鮮培養(yǎng)液，2周后用考馬斯亮藍(lán)染色，以大于30個(gè)細(xì)胞的克隆記為一個(gè)集落，在顯微鏡下通過(guò)100倍視野進(jìn)行觀察并拍照，并隨機(jī)選取5個(gè)視野記錄集落形成數(shù)量，計(jì)算平均值，每組設(shè)3個(gè)樣品，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

1.7 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲

實(shí)驗(yàn)前12 h更換細(xì)胞培養(yǎng)液為無(wú)血清培養(yǎng)液，將40 μL基質(zhì)膠鋪于Transwell小室中，消化細(xì)胞并用1 μL PBS清洗2遍，將500 μL無(wú)血清培養(yǎng)液加入24孔板，取5×105細(xì)胞重懸，向Transwell小室中加入200～250 μL細(xì)胞懸液，保證下層完全培養(yǎng)液與Transwell小室間無(wú)氣泡。置于培養(yǎng)箱內(nèi)正常培養(yǎng)24 h，加用甲醇配制、PBS稀釋的0.1%結(jié)晶紫染液500 μL進(jìn)行染色，室溫避光15 min，PBS漂洗后用棉棒擦拭Transwell小室內(nèi)部，倒置晾干，置于倒置熒光顯微鏡下通過(guò)200倍視野觀察穿過(guò)膜的細(xì)胞并拍照計(jì)數(shù)，隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算平均值。

1.8 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移

調(diào)整細(xì)胞密度，以5×104個(gè)/孔接種于24孔培養(yǎng)板中，分組處理同上，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，棄掉培養(yǎng)液，用滅菌的10 μL加樣槍槍頭沿直線做劃痕，加入100 μL PBS將細(xì)胞碎片沖洗掉，然后以無(wú)血清培養(yǎng)液，37℃、5%CO2溫箱培養(yǎng)，分別于0 h和24 h在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞遷移情況以及劃痕寬度。采用圖像分析軟件Image J測(cè)量細(xì)胞劃痕間距，并根據(jù)公式：細(xì)胞遷移率=(24 h邊緣距離-0 h邊緣距離)/0 h邊緣距離×100%，計(jì)算出各組細(xì)胞的遷移率。

1.9 Western blot檢測(cè)各組HCT116細(xì)胞中EGFR、ITGB6的表達(dá)

按照細(xì)胞濃度1×106個(gè)/mL加入300 μL的RIPA蛋白裂解液，裂解30 min，12000 r/min 4℃離心10 min，收集上清，采用BCA試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，將蛋白樣品和上樣緩沖液混合，100℃水浴變性5 min，然后加入至制備好的SDS-PAGE凝膠(5%濃縮膠，10%分離膠)上樣孔中，每孔25 μL，濃縮膠時(shí)調(diào)整電壓為60 V，分離膠電壓為120 V，結(jié)束后取出凝膠，4℃轉(zhuǎn)膜1.5 h，采用5%脫脂奶粉封閉PVDF膜2 h，加入一抗，4℃過(guò)夜，TBST洗膜后加入辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗兔IgG，37℃孵育2 h后加入ECL顯影，采用自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)采集圖像，以GAPDH作為內(nèi)參，分析蛋白表達(dá)水平。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 19.0軟件，做圖工具采用Graphpad 5.01，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中EGFR mRNA的表達(dá)

qRT-PCR結(jié)果如圖1示，與癌旁組織比較，結(jié)腸癌組織中EGFR的mRNA表達(dá)量明顯上升(P<0.05)。

2.2 免疫組化檢測(cè)結(jié)腸癌組織中EGFR蛋白的表達(dá)

免疫組化結(jié)果如圖2所示：EGFR陽(yáng)性染色主要存在于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中，EGFR在結(jié)腸癌組織中以陽(yáng)性表達(dá)為主，而在正常癌旁組織中以陰性表達(dá)為主。在收集的120例結(jié)腸癌組織中EGFR的表達(dá)陽(yáng)性率為66.7%(80/120)，而在癌旁組織中僅為8.3%(10/120)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 EGFR表達(dá)與結(jié)腸癌患者臨床病理特征的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示(表1)，結(jié)腸癌組織EGFR的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤分化程度以及T分期無(wú)顯著相關(guān)(均P>0.05)；而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、臨床醫(yī)學(xué)分期相關(guān)(均P<0.01)。

圖1 qRT-PCR檢測(cè)結(jié)腸癌與癌旁組織EGFR mRNA的表達(dá)Fig.1 qRT-PCR detection of the mRNA expression of EGFR

A：EGFR在結(jié)腸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)；B：EGFR在結(jié)腸癌組織中陰性表達(dá)；C：EGFR在癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)圖2 免疫組化檢測(cè)EGFR在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá)Fig.2 Immunohistochemical detection of the expression of EGFR in colon cancer and adjacent tissues

表1 EGFR的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的相關(guān)性分析(n=120)Table 1 The correlation analysis between the expression of EGFR and clinicopathological charateristics of colon cancer(n=120)

2.4 過(guò)表達(dá)EGFR對(duì)HCT116細(xì)胞增殖能力的影響

CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)EGFR的rAAV9-EGFR組A492 nm明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3A)；平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)EGFR后，rAAV9-EGFR組細(xì)胞克隆數(shù)明顯增多(P<0.05，圖3B、3C)。說(shuō)明過(guò)表達(dá)EGFR后，HCT116細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)。

2.5 過(guò)表達(dá)EGFR對(duì)HCT116細(xì)胞侵襲能力的影響

Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，過(guò)表達(dá)EGFR的rAAV9-EGFR組細(xì)胞穿過(guò)基質(zhì)膠的數(shù)量明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該結(jié)果表明過(guò)表達(dá)EGFR后，HCT116細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng)。見圖4。

A：CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖，與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；B：各組細(xì)胞平板克隆結(jié)果；C：平板克隆檢測(cè)細(xì)胞增殖圖3 CCK-8法和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組HCT116細(xì)胞的增殖Fig.3 The proliferation of HCT116 cells in each group detected by cell counting kit-8 and plate cloning assay

圖4 Transwell小室檢測(cè)各組HCT116細(xì)胞的侵襲能力Fig.4 The invasion of HCT116 cells in each group

2.6 過(guò)表達(dá)EGFR對(duì)HCT116細(xì)胞遷移能力的影響

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，過(guò)表達(dá)EGFR的rAAV9-EGFR組細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖5。

圖5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組HCT116細(xì)胞的遷移能力Fig.5 The migration of HCT116 cells in each group

2.7 過(guò)表達(dá)EGFR對(duì)HCT116細(xì)胞EGFR、ITGB6表達(dá)水平的影響

ITGB6是廣泛存在于生物細(xì)胞表面的特異性粘附分子，主要調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘附、生長(zhǎng)、遷移、侵襲以及誘導(dǎo)血管新生。本研究首先在http：//genemania.org上查詢了EGFR的和ITGB6的相互作用關(guān)系(圖6)。采用Western blot檢測(cè)HCT116細(xì)胞中EGFR、ITGB6的表達(dá)水平(圖7)，與空白對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)EGFR后，rAAV9-EGFR組細(xì)胞中ITGB6的表達(dá)水平明顯上升(P<0.05)。

圖6 預(yù)測(cè)EGFR的和ITGB6的相互作用關(guān)系Fig.6 The interaction between EGFR and ITGB6

圖7 各組細(xì)胞中EGFR、ITGB6的表達(dá)水平Fig.7 The expression of EGFR and ITGB6 in the cells of different groups

3 討論

近年來(lái)，由于環(huán)境和日常膳食結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)腸癌的發(fā)病率和致死率不斷攀升，嚴(yán)重危害人類的健康。目前缺乏根治性治療的外科手段[8]，而結(jié)腸癌的靶向治療尚處于起步階段[9]。已有研究證實(shí)[10]細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)分子調(diào)控或參與結(jié)腸癌細(xì)胞的發(fā)生及癌細(xì)胞的侵襲和遷移，因此從分子生物學(xué)角度出發(fā)尋找結(jié)腸癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，為患者提供有效的治療方法有著重要的意義。

EGFR位于7號(hào)染色體上，在大多數(shù)組織和細(xì)胞中廣泛存在，并且EGFR能通過(guò)多種途徑如PI3K/AKT通路、RAS/RAF/ErK通路直接影響細(xì)胞的增殖和遷移[11]。有報(bào)道稱EGFR可與Ral-GTPase結(jié)合激活原癌基因，導(dǎo)致細(xì)胞癌變的發(fā)生[12]。在對(duì)大量前列腺癌、大腸癌、乳腺癌臨床標(biāo)本的研究中發(fā)現(xiàn)[13]，EGFR信號(hào)通路異常表達(dá)所引起的惡性腫瘤占很大比重。另外，Chen等[14]在對(duì)小鼠肝癌模型的研究中發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh2可通過(guò)抑制EGFR的表達(dá)發(fā)揮抗腫瘤效用；Xu等[15]研究發(fā)現(xiàn)上調(diào)EGFR的表達(dá)能明顯抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲以及遷移。目前尚無(wú)明確關(guān)于EGFR表達(dá)與結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究報(bào)道。

本研究首先檢測(cè)EGFR在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中的mRNA表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)EGFR mRNA在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示EGFR蛋白主要存在于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中。在收集的120例結(jié)腸癌組織中EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率為66.7%(80/120)，而在癌旁組織中僅為8.3%(10/120)，前者明顯高于后者(P<0.05)。接下來(lái)對(duì)EGFR的表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)性別、年齡、腫瘤大小、組織分化程度以及T分期與EGFR的表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)(均P>0.05)；而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、臨床醫(yī)學(xué)分期與EGFR陽(yáng)性表達(dá)有相關(guān)性(P<0.01)。這提示EGFR的高表達(dá)可能在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。

為進(jìn)一步研究EGFR在結(jié)腸癌中的作用，本研究構(gòu)建上調(diào)EGFR表達(dá)的病毒載體rAAV9-EGFR，轉(zhuǎn)染高侵襲性結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116，通過(guò)CCK-8和分子克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HCT116細(xì)胞增殖能力明顯升高，Transwell小室和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)EGFR后HCT116細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯增強(qiáng)。

整合素ITGB6是一種跨膜二聚體糖蛋白，主要通過(guò)特異性的蛋白識(shí)別來(lái)介導(dǎo)細(xì)胞間以及細(xì)胞與周圍外基質(zhì)的粘附，維系細(xì)胞形態(tài)，與細(xì)胞的粘附、運(yùn)動(dòng)、侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[16]。已有研究證實(shí)ITGB6的粘附作用依靠EGFR的進(jìn)一步活化[17]；何松原等[18]研究發(fā)現(xiàn)EGFR能影響ITGB6的表達(dá)，從而影響A549細(xì)胞的體外血管生成能力。本研究利用生物信息網(wǎng)站預(yù)測(cè)到EGFR和ITGB6可能存在相互作用；Western blot檢測(cè)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照rAAV9-EGFR-NC組比較，轉(zhuǎn)染rAAV9-EGFR后，HCT116細(xì)胞中EGFR、ITGB6的表達(dá)水平明顯上升(P<0.05)。

本研究證明EGFR在結(jié)腸癌的發(fā)展以及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，為結(jié)腸癌的治療提供了一個(gè)關(guān)鍵性靶向位點(diǎn)。未來(lái)有望通過(guò)針對(duì)EGFR分子的生物學(xué)特性來(lái)設(shè)計(jì)結(jié)腸癌的分子靶向治療手段[19](如EGFR的特異性抑制劑或EGFR的單克隆抗體)，以抑制EGFR信號(hào)通路的激活或者抑制其信號(hào)傳導(dǎo)。但是患者是否適合靶向治療，如何將靶向治療跟化療藥物聯(lián)用，以及怎樣將多種靶向藥物聯(lián)合使用，以達(dá)到更好的治療效果，還需要更深入的研究。

綜合上述，本研究提示EGFR在結(jié)腸癌組織中存在高表達(dá)的現(xiàn)象，并且可能在結(jié)腸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用，為未來(lái)開啟結(jié)腸癌的個(gè)體化靶向治療提供了新線索。