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      葵花籽粕蛋白提取及分離純化工藝優(yōu)化探究

      2020-11-21 02:40:04包少文
      廣東蠶業(yè) 2020年9期
      關(guān)鍵詞:樣量葵花籽流速

      包少文

      (銀川能源學院 寧夏銀川 750000)

      目前,我國葵花籽蛋白利用率較低,蛋白提取和分離純化兩項工藝存在較大提升空間[1-2]。為了進一步優(yōu)化工藝,文章運用正交試驗法,對工藝優(yōu)化進行淺析。

      1 試驗材料及設(shè)備

      1.1 材料與試劑

      (1)采用自制法制備的葵花籽粕;(2)EDTA、HCl、(NH4)2SO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaOH、NaH2PO4、分析純。

      1.2 主要設(shè)備

      (1)電熱恒溫箱,設(shè)備型號為DRH-100,產(chǎn)自廣東省環(huán)境保護儀器設(shè)備廠;(2)電子天平,設(shè)備型號為AL-104,產(chǎn)自梅特勒-托利多有限公司;(3)pH 測試計,設(shè)備型號為pHS-3C,產(chǎn)自海虹益儀器儀表有限公司;(4)水浴鍋,設(shè)備型號為HH-S,產(chǎn)自鞏義市予華儀器有限責任公司;(5)高級蛋白純化系統(tǒng),設(shè)備型號為AKTApurifier PH/C10,產(chǎn)自通用公司。

      2 葵花籽粕蛋白提取工藝優(yōu)化

      2.1 提取操作要點

      料液的調(diào)配控制比例為1:08、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18,環(huán)境溫度保持在30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃,在水浴鍋中浸提蛋白,蛋白提取試驗時間控制為0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h,堿液pH 值為12,確保堿液能夠完全溶解蛋白質(zhì)。

      2.2 試驗因素及水平

      本次研究采取L9(34)正交試驗法,選取蛋白料液、蛋白提取時間、蛋白提取溫度、NaCl 濃度作為試驗指標,設(shè)計如表1所示的因素水平[3]

      表1 試驗因素水平

      2.3 試驗結(jié)果分析

      文章通過開展單因素試驗,得到如圖1所示的試驗結(jié)果。

      觀察圖1中的測試結(jié)果可知,NaCl 濃度為1.5 mol/L、蛋白料液比為1:12(g/mL)、溫度為60 ℃、提取時間為1.5 h 時,蛋白提取率最高。

      2.4 工藝優(yōu)化

      基于上述單因素試驗結(jié)果,按照表1中的因素水平設(shè)置方法開展正交試驗,得到4 種因素R 值計算結(jié)果,分析提取溫度對工藝影響最大,料液比對工藝影響最小,確定A2、B3、C2、D2作為蛋白提取工藝優(yōu)化方案,即料液比為1:14(g/mL)、NaCl 濃度為1.5 mol/L、溫度為50 ℃、提取時間為1.5 h。

      3 葵花籽粕蛋白分離純化工藝優(yōu)化

      3.1 樣品溶液與試驗方法

      樣品溶液:20 g/L 蛋白溶液。

      試驗方法:洗脫流速參數(shù)設(shè)置為0.5 mL/min、0.4 mL/min、0.3 mL/min;溶液上樣量參數(shù)設(shè)置為1 mL、3 mL、5 mL,采取自由組合方法,生成5 組試驗,利用水浴鍋,分別對蛋白采取分離純化處理[4]。

      3.2 實驗結(jié)果分析

      按照上述試驗方法,配置5 組試驗,分別對這5 組試驗蛋白分離純化結(jié)果進行分析,結(jié)果如圖2所示。

      (1)洗脫流速0.3 mL/min,上樣量為3 mL:溶液測試結(jié)果不存在重疊峰,并且峰值較為明顯,依據(jù)此結(jié)果滿足要求,但是隨著時間的推移,受洗脫處理時間較長,測試液體下降,低于填料平面,不滿足分離純化要求。

      (2)洗脫流速0.4 mL/min,上樣量為3 mL:溶液測試結(jié)果分辨率較高,數(shù)值變化中出現(xiàn)峰值,且峰形較為明顯,符合分離純化要求。

      (3)洗脫流速0.5 mL/min,上樣量為3 mL:溶液測試結(jié)果分辨率偏低,洗脫流速較高,數(shù)值形成的峰形不規(guī)則。

      (4)洗脫流速0.4 mL/min,上樣量為1 mL:溶液測試結(jié)果分辨率偏低,形成的峰形不明顯,處于平穩(wěn)狀態(tài),不滿足分離純化要求。

      (5)洗脫流速0.3 mL/min,上樣量為5 mL:溶液測試結(jié)果分辨率較高,形成的峰形不明顯,不滿足分離純化要求。

      3.3 工藝優(yōu)化

      依據(jù)分離純化試驗結(jié)果,洗脫流速0.4 mL/min,上樣量3 mL 為蛋白分離純化最佳條件。在實踐應用中,通過調(diào)節(jié)洗脫流速、上樣量兩項參數(shù),為蛋白分離純化創(chuàng)造最佳處理環(huán)境,從而高效去除雜質(zhì)。采用此方法與以往的分離純化方法處理葵花籽粕蛋白,測試結(jié)果表明,文章提出的優(yōu)化方法蛋白純度比純化前提高了39.21%,可以作為蛋白生產(chǎn)加工工藝。

      4 總結(jié)

      文章圍繞葵花籽粕蛋白提取及分離純化工藝的優(yōu)化展開研究,包括兩項試驗內(nèi)容:(1)蛋白提取正交試驗,測試結(jié)果表明,料液比1:14(g/mL)、NaCl 濃度1.5 mol/L、溫度50 ℃、提取時間1.5 h 為最佳蛋白提取工藝;(2)蛋白分離純化試驗,測試結(jié)果表明,洗脫流速0.4 mL/min,上樣量3 mL 為蛋白分離純化最佳條件。

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