入境鹽漬白尾鹿皮中截獲的頸利虱蠅(雙翅目：虱蠅科)*

趙 爽 曹秀娟 高云霞 何振毅

(1.中華人民共和國南沙海關(guān)，廣東廣州 510000；2.中華人民共和國佛山海關(guān)駐南海辦事處，廣東佛山 528000；3.中華人民共和國廣州海關(guān)，廣東廣州 510000；4.中華人民共和國佛山海關(guān)駐禪城辦事處，廣東佛山 528000)

2018年南?？诎秾碜悦绹髂崽K達(dá)州的白尾鹿皮集裝箱進(jìn)行開柜查驗(yàn)時(shí)，截獲到虱蠅8頭，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定其為頸利虱蠅Lipoptenacervi(Linnaeus，1758)，均為雌性。頸利虱蠅隸屬于雙翅目Diptera虱蠅科Hippoboscidae利虱蠅屬LipoptenaNitzsch，俗稱鹿蜱蠅，是歐洲鹿科動物最常見的吸血性體表寄生蟲(Haighetal.，2002；Kaunistoetal.，2009)。虱蠅科全世界已知有21屬213種(Dick，2006)，我國已知12屬44種(Maa, 1969；薛萬琦等，1996；徐保海，2011)。頸利虱蠅在北歐Fennescandia半島和美國都是入侵種類，在我國北部、東部和甘肅也有文獻(xiàn)記錄頸利虱蠅的分布(Maa, 1969；徐保海，2011)。本文將對截獲樣品進(jìn)行詳細(xì)描述，結(jié)合現(xiàn)有的研究資料，對該蠅的世界分布、宿主、生物學(xué)及經(jīng)濟(jì)和衛(wèi)生重要性進(jìn)行詳細(xì)介紹，以便于國內(nèi)口岸監(jiān)管部門和鹿科動物養(yǎng)殖從業(yè)人員參考。

1 材料與方法

1.1 材料來源

以佛山海關(guān)南?？诎?018年6月28日截獲的8頭虱蠅標(biāo)本為研究對象，其中1頭用于分子生物學(xué)鑒定，其余標(biāo)本用75%酒精浸制，保存在佛山海關(guān)駐南海辦事處的醫(yī)學(xué)媒介生物標(biāo)本庫中。

1.2 方法

1.2.1形態(tài)鑒定 使用體式顯微鏡(型號：奧林巴斯SZ51)進(jìn)行觀察，利用萊卡DVM6數(shù)碼視頻顯微鏡(Digital Microscope Leica DVM6)拍攝外部形態(tài)圖片，根據(jù)標(biāo)本特征和相關(guān)文獻(xiàn)(Maa，1965；Petersonetal.，1970；Andreanietal., 2019；Salvettietal., 2020)對樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定和描述，雄性特征描述見上述文獻(xiàn)。

1.2.2DNA提取 鑒定完畢選取其中一頭標(biāo)本，按照DNA提取試劑盒(TIANamp Genomic DNA Kit，目錄號：DP304-02)說明書進(jìn)行基因組DNA的提取。

1.2.3PCR擴(kuò)增 以提取的基因組DNA為模板，正向引物L(fēng)CO1490(5′-G G T C A A C A A A T C A T A A A G A T A T T G G-3′；反向引物HCO21985′-T A A A C T T C A G G G T G A C C A A A A A A T C A-3′(多細(xì)胞無脊椎動物DNA條形碼通用引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，以下簡稱生工)。采用PCR擴(kuò)增試劑盒(Taq)Ready-To-Use PCR Kit(Taq DNA polymerase)(with Loading Dye)(生工，編號：B532081-0020)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。

1.2.4測序及結(jié)果比對 將PCR產(chǎn)物直接送至生工進(jìn)行雙向測序，測序結(jié)果通過Mega7.0軟件進(jìn)行校對拼接，去除序列兩端的引物序列，得到目的片段。將所得序列在GenBank和BOLD system v4中進(jìn)行同源性分析，然后使用Mega7.0軟件以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(Neighbor-joining tree，NJ樹)。

1.3 文獻(xiàn)整理

搜集并整理頸利虱蠅相關(guān)文獻(xiàn)，對其世界分布、寄主、生物學(xué)及攜帶病原體情況進(jìn)行介紹。

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)描述

鑒定特征 頭寬約為長的2倍；額唇基區(qū)后緣寬平，略呈方形。前胸腹板突上的剛毛幾乎分布在整個(gè)表面；肩鬃6，前4(1+3)后2排成2行；腹部背面骨片3(Tergite 3, T3)明顯小于骨片4(Tergite 4, T4)。雌性生殖前板分3個(gè)骨片，兩側(cè)骨片長約為寬的2倍，略短于中央骨片。(圖1～2)。

圖1 頸利虱蠅雌性背面觀(左)和腹面觀(右)

雌性 體扁平，棕黃色，成蟲翅脫落，密被深褐色鬃毛，體長6.0～7.0 mm，頭部短小闊扁，前緣寬弧形，頭部嵌入前胸窩內(nèi)，與胸部連接緊密，活動范圍極?。活~唇基區(qū)(frontoclypeus area，為額囊縫至口器上片的區(qū)域)略呈方形；前口式，刺吸式口器。側(cè)額寬，約為復(fù)眼寬的1/2；間額約與復(fù)眼等寬。額鬃3，側(cè)額鬃4，頂鬃1。觸角短，深陷入觸角溝內(nèi)(圖2-a)。前胸背板帶狀，寬度較均一；前胸腹板突上的剛毛分布均勻。中胸背板具中刻線和1對側(cè)縱刻線，側(cè)縱刻線中間略平行，向前弧形漸寬至端部略收縮，向后微弱變寬末端不達(dá)小盾溝。肩鬃(humeral bristles)6，前4(1+3)后2排成2行，(此處所指肩鬃指中胸背板的前側(cè)角的區(qū)域，其上鬃序排列特征是該種區(qū)別于其他種的重要特征之一)。中鬃(Acrostical bristles)8，側(cè)中鬃(Laterocentral bristles)15～18；小盾鬃6(圖2-c)。平衡棒淡黃色。足粗壯，具較密的鬃。前足基節(jié)矩退化；各足具急劇彎曲的爪，具明顯爪墊和爪間突。腹部背板和側(cè)板界限模糊，背面有明顯的中央骨片，各骨片近平均分布，骨片3明顯小于骨片4。雌性生殖前板(Pregenital plate)分3個(gè)骨片，兩側(cè)骨片各具2或3鬃，中間骨片具4鬃(圖2-b)。

圖2 頸利虱蠅雌性

2.2 序列結(jié)果及分析

截獲樣本的COI序列片段為661 bp，將序列輸入NCBI和BOLD數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對，與GenBank中公布的L.cervi(登錄號分別為：KR362275.1和KR362270.1)的COI序列相似度為99.85%，覆蓋度為98%；與BOLD System v4中的L.cervi(BIN ID: ABX1452)的COI序列相似度同樣高達(dá)99.85%。

用Mega7.0軟件對所得序列及NCBI中搜索到相似度高的其他虱蠅科的蠅種的序列，以須舌蠅Glossinapalpalis為外群，以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(NJ樹)。如圖3所示，通過COI序列鑒定的結(jié)果呈現(xiàn)出與現(xiàn)行傳統(tǒng)分類系統(tǒng)中屬級分類關(guān)系較一致的格局，除去L.mazamae(序列號：EF531205.1)的結(jié)果異常之外，NJ樹中大多種的臨近序列都來自同屬的物種。此外，南海截獲的頸利虱蠅(NHF)與來自北歐Fennescandia半島的頸利虱蠅并為一支，并與其他利虱蠅屬的種類區(qū)分開，但本研究所用樣本來自北美種群，與北歐樣本間出現(xiàn)一定的差異，這可能是由于頸利虱蠅大約在19世紀(jì)從歐洲傳入美國(Bequaert，1953)，在過去的一百多年間與歐洲的種群產(chǎn)生了地理隔斷，逐漸發(fā)生了一定的遺傳分化有關(guān)，但是該分化尚未達(dá)到種級階元的差別。

圖3 基于COI基因序列構(gòu)建的NJ樹

2.3 頸利虱蠅的分布、宿主、生物學(xué)及醫(yī)學(xué)重要性

2.3.1分布 歐洲(英國、瑞典、丹麥、荷蘭、比利時(shí)、法國、德國、愛沙尼亞、拉脫維亞、立陶宛、波蘭、捷克、斯洛伐克、奧地利、瑞士、匈牙利、南斯拉夫、阿爾巴尼亞、保加利亞、意大利、西班牙)、非洲(阿爾及利亞)、亞洲(俄羅斯(東西伯利亞)、白俄羅斯、中國)、北美洲(美國)(Maa, 1969；Ivanov，1974；徐保海，2011)。

2.3.2宿主 在北歐Fennescandia半島頸利虱蠅的宿主主要是駝鹿Alcesalces，在芬蘭發(fā)現(xiàn)其也能夠在野生馴鹿Rangifertarandusfennicus體上繁殖發(fā)育，在中歐該蠅的宿主主要是紅鹿Cervuselaphus、獐鹿Capreoluscapreolus和歐洲小鹿Damadama(Haarl?v，1964；Hackmanetal.，1983；V?lim?kietal.，2010)。在北美頸利虱蠅主要寄生于其獲得性宿主白尾鹿Odocoileusvirginianus(Matsumotoetal.，2008)體表。頸利虱蠅的雌蠅隨時(shí)可侵襲任何潛在的寄主(Ivanov，1974；Hermosillaetal.，2006；Kortetetal.，2010)，但是其他鹿類對其宿主選擇的重要性尚不清楚，僅被當(dāng)做頸利虱蠅的替代宿主或潛在宿主。也有記載稱牛、馬等是該蠅的宿主(徐保海，2011)。偶有頸利虱蠅侵襲其他動物(如狗)甚至是人類的報(bào)道，但沒有證據(jù)顯示該蠅能夠在鹿科以外的動物體表完成繁殖和發(fā)育(Rantanenetal.，1982)。

2.3.3生物學(xué) 頸利虱蠅是一化性吸血昆蟲(Haarl?v，1964)。成蟲不論雌雄均可吸血，胎生，成蟲交配后，幼蟲在雌蠅體內(nèi)發(fā)育至老熟幼蟲，待該化蛹時(shí)產(chǎn)出。雌蠅每次僅產(chǎn)一頭幼蟲，幼蟲產(chǎn)出后幾小時(shí)內(nèi)即化蛹，蛹在動物皮毛內(nèi)或落到地面(Bequaert，1939)，在北歐夏末或秋初時(shí)，蛹經(jīng)過3～6周后即可羽化為具翅成蟲。成蟲可到處飛舞尋找鹿科寄主，一旦尋找到合適的寄主后，雌雄蠅的翅便會脫落并開始吸血生活(Bequaert，1953；Haarl?v，1964；Hackmanetal.，1983)。雌蠅一生可產(chǎn)12～15頭幼蟲，每次間隔6～8 d。頸利虱蠅主要在鹿科動物體表毛發(fā)內(nèi)繁殖，無翅成蟲幾乎一直生活在宿主體表毛內(nèi)(Bequaert，1953)。當(dāng)成蠅從宿主體表脫落后僅能存活7 d，但它們會努力爬上其他物體的高處來尋找新的合適的宿主。

2.3.4醫(yī)學(xué)重要性 頸利虱蠅對宿主的侵害主要是造成失血、瘙癢、抓撓以及因此可能產(chǎn)生的斑禿、脫毛、甚至繼發(fā)感染，最終損害宿主的皮毛質(zhì)量和健康(Dehioetal.2004，Madslienetal.，2011)。被頸利虱蠅叮咬后，人和犬類也會出現(xiàn)長期持續(xù)的皮膚炎癥，如瘙癢、丘疹，癥狀較頑固，可持續(xù)2周至12個(gè)月(Rantanenetal.，1982)。

近年來不時(shí)有報(bào)道從頸利虱蠅體內(nèi)檢出各種病原體，如在頸利虱蠅的中腸曾檢出巴爾通體Bartonellaschoenbuchensis，表明該細(xì)菌能夠在頸利虱蠅體內(nèi)增殖，該蠅極可能是一種潛在的病媒生物(Dehioetal.，2004；Matsumotoetal.，2008；Szewczyketal.，2017)，美國報(bào)道從頸利虱蠅體內(nèi)檢出了伯氏疏螺旋體Borreliaburgdorferi和嗜吞噬細(xì)胞無形體Anaplasmaphagocytophylum(Víchováetal., 2011；Bussetal.，2016)，二者都是蜱傳疾病的病原體。迄今尚沒有證據(jù)證明頸利虱蠅可將病原體傳播給人類，但是該蠅吸食動物血液并具有蟲媒病原體宿主潛力，這增加了將病原傳播給人類的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是戶外活動的人和其他野生動物。

3 討論

頸利虱蠅在美國是一種入侵物種，大約在19世紀(jì)從歐洲傳入，1907年分別在美國2個(gè)不同的地方賓夕法尼亞州和新罕布什爾州的鹿身上發(fā)現(xiàn)，后逐漸擴(kuò)散至曼徹斯特、紐約、賓夕法尼亞和新罕布什爾州等地(Bequaert，1953，1957；Matsumotoetal.，2018)。最新的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)該蠅新增了康涅狄格州、新澤西州、佛蒙特州和弗吉尼亞州等4個(gè)分布地(Michaeletal.，2019)，該研究也指出由于數(shù)據(jù)主要來源于文獻(xiàn)和各博物館的收藏以及民間狩獵組織而不是來自于全面的調(diào)查，頸利虱蠅的實(shí)際分布可能更廣。

根據(jù)文獻(xiàn)資料記載頸利虱蠅在我國東部、北部(徐保海，2011)有分布，且寄主是牛、馬等，其中指出確切分布地點(diǎn)的是甘肅省(Maa，1969)。我國鹿科動物具有較廣泛的分布地，東部、北部和甘肅等地均有鹿類的分布，頸利虱蠅可能在這些地區(qū)有分布，國外的研究也認(rèn)為頸利虱蠅在鹿科之外的動物體表不能完成整個(gè)繁殖發(fā)育過程(Rantanenetal., 1982)?，F(xiàn)階段國內(nèi)沒有有關(guān)頸利虱蠅的其他記述。

頸利虱蠅在北歐和美國都有較多細(xì)致的研究，從其輸入擴(kuò)散的動態(tài)、對當(dāng)?shù)芈箍苿游锏那秩緺顩r到該蠅的生物學(xué)及在動物皮毛內(nèi)的分布以及其可能攜帶和傳播病原體的情況等都有諸多的報(bào)道。然而，該蠅在我國是否確定分布及分布地、對我國鹿科動物的感染情況以及對鹿科動物養(yǎng)殖業(yè)有何影響等均無報(bào)道，這也表明我國相關(guān)物種的本底調(diào)查相當(dāng)匱乏。雖然迄今還沒有頸利虱蠅作為人類疾病傳播媒介的確切證據(jù)，但是在該蠅體內(nèi)檢測出了多種病原體，并且在北美它們跟萊姆病的傳播蜱媒同時(shí)寄生于白尾鹿體表，在其體內(nèi)也檢出了蜱傳疾病病原體，這都增加了該蠅是病媒生物的潛力?？紤]到該蠅在北歐和美國的輸入和定殖情況，結(jié)合本次的截獲，我們有理由相信該種在我國存在極高的輸入風(fēng)險(xiǎn)。加強(qiáng)本底調(diào)查，全面掌握本底物種的物種組成和種群資料，對于盡早發(fā)現(xiàn)輸入性物種和及時(shí)做出有效控制措施具有十分重要的意義。同時(shí)，為保護(hù)國內(nèi)鹿科動物養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)和應(yīng)對潛在的虱蠅傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，口岸部門應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對相關(guān)進(jìn)境動物皮張的檢疫監(jiān)管，保衛(wèi)國門衛(wèi)生安全。