4種炮制方法對陳皮中橙皮苷和蕓香柚皮苷含量的影響

丁 琛，鄭艷萍，陳 麗

（1.江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京210029；2.江蘇弘典中藥產(chǎn)業(yè)研究院，江蘇 南京210042）

陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，主產(chǎn)于我國福建、浙江、廣東、廣西、江西、湖南、貴州、云南、四川等地，臨床使用量大，具有理氣降逆、調(diào)中開胃、燥濕化痰功效[1]，用于脘腹脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多的治療[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，陳皮具有增強(qiáng)消炎[3]、提高抗氧化[4]、調(diào)節(jié)心肌興奮度和輕度收縮血管[5－6]等作用。2015年版《中國藥典(一部)》中陳皮的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了橙皮苷的含量測定。二氫黃酮類是陳皮中所含黃酮主要類別之一，其中包括蕓香柚皮苷、橙皮苷等。查閱文獻(xiàn)[7－8]發(fā)現(xiàn)，目前有關(guān)陳皮炮制的研究較少，藥典中也只收錄了切制一法，而古書記載的陳皮炮制方法較多，包括切、醋、蜜、法、姜、鹽、麩炒、土炒等[9]。本研究中選取了常用且較特殊的炮制方法（醋制、麩炒、蜜制、土炒）炮制而成的4種陳皮炮制品，考察其蕓香柚皮苷及橙皮苷的含量變化?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

IC－20AD型高效液相色譜儀（日本島津公司，儀器編號為QC－04）；FA1004N型電子分析天平（精度為十萬分之一），BSA224S型天平（精度為萬分之一），均購自Sedoris；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為200 W，頻率為40 kHz）；XL－10B型密封搖擺式粉碎機(jī)（廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司，容量為500 g）；CKN7630J 30 CM型炒鍋（浙江炊大王炊具有限公司）；YE187AL1168351型移液器（大龍星創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器＜北京＞有限公司）。

1.2 試藥

陳皮（南京海源中藥飲片有限公司，批號為181006，產(chǎn)地浙江），經(jīng)南京海源中藥飲片有限公司丁菲執(zhí)業(yè)中藥師鑒定為正品鑒定，按2015年版《中國藥典(一部)》標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果符合規(guī)定；蕓香柚皮苷對照品（純度≥98%，成都瑞芬思生物科技有限公司，批號為180901）；橙皮苷對照品（純度≥98%，南京森貝伽生物科技有限公司，批號為161231）；水為超純水，乙腈為色譜純，甲酸等試劑均為分析純；陳醋（每100 mL總酸≥4.00 g，山西水塔醋業(yè)股份有限公司）；蜂蜜（山東省歸農(nóng)養(yǎng)蜂股份有限公司，批號為GB 14963）；麥麩（產(chǎn)地浙江金華，晨曦飼料二部）；灶心土（產(chǎn)地河北保定，康德瑞琪旗艦店）；花雕酒（酒精體積分?jǐn)?shù)≥12%，浙江古越龍山紹興股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

醋制陳皮：稱取陳皮藥材100 g，量取陳醋337.5 mL，混勻，燜潤30 min，放入炒鍋，文火（240℃）炒制0.5 h，取出，攤放，篩去碎屑。

麩炒陳皮：分別稱取陳皮藥材100 g、麥麩10 g，將炒鍋加熱至70℃左右，放入麥麩，至麥麩將要冒煙時，立即把陳皮加進(jìn)鍋中，中火（120～150℃）快速拌炒均勻，炒至陳皮表面呈棕黃色后立刻停止，取出晾涼，篩除麥麩及碎屑，備用。

蜜制陳皮：稱取生蜂蜜40 g、煉制蜂蜜20 g、紹興花雕酒10 g、純化水20 g，將除煉制蜂蜜外所有輔料混勻，備用。將上述混勻的輔料和100 g陳皮置燜潤容器中，拌勻，浸潤，燜潤至混合輔料全部被吸收；將燜潤好的陳皮放入炒鍋中，以文火炒至手按感覺硬度為宜，約八分干時，將煉制蜂蜜倒至陳皮上，拌炒，炒至陳皮表面呈蜜樣光澤，觸之不粘手，以握之成團(tuán)、撒手即散為度，取出，攤放，并篩去碎屑。

土炒陳皮：稱取陳皮藥材100 g、灶心土30 g，在加熱至100℃左右的熱鍋中均勻撒入灶心土，不斷轉(zhuǎn)動炒鍋，至其呈流化狀態(tài)，此時鍋溫220℃，將陳皮倒入炒鍋內(nèi)，待陳皮表面被炒成焦黃色時，取出藥材，放涼，篩去灶心土。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：YMC－Pack ODS－A柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈－0.1%甲酸水溶液（25∶75，V／V）；檢測波長：285 nm；流速：0.8 mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。取混合對照品溶液和供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣10μL，各成分色譜峰分離良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 溶液制備

對照品溶液：取蕓香柚皮苷對照品10.180 2 mg，橙皮苷對照品9.851 2 mg，精密稱定，分別置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻，得質(zhì)量濃度分別為1.018 0 mg／mL和0.985 1 mg／mL的蕓香柚皮苷對照品溶液和橙皮苷對照品溶液。精密量取上述對照品溶液各400μL置1 mL容量瓶中，混勻，得質(zhì)量濃度為0.407 2 mg／mL的蕓香柚皮苷和0.394 0 mg／mL的橙皮苷混合對照品溶液，備用。

供試品溶液：稱取炮制后的陳皮藥材100 g，粉碎，過3號篩（50目），取2.0 g粉末，精密稱定，置50 mL錐形瓶中，加入甲醇30 mL，室溫下超聲（功率為200 W，頻率為40 kHz）提取30 min，過濾并用甲醇洗滌濾渣，收集濾液，置50 mL容量瓶中，用甲醇定容，精密移取1 mL續(xù)濾液，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取混合對照品溶液50，100，200，400，800，1 000μL，分別置1 mL容量瓶中，加甲醇定容，配制成不同質(zhì)量濃度的混合對照品溶液。取上述不同質(zhì)量濃度混合對照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，以對照品質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得蕓香柚皮苷和橙皮苷的回歸方程Y蕓＝8 585.9 X蕓＋88 933，R2＝0.999 5（n＝7）；Y橙＝9 542.8 X橙＋37 798，R2＝0.999 2（n＝7）。結(jié)果表明，蕓香柚皮苷和橙皮苷的質(zhì)量濃度線性范圍分別為20.36～407.2μg／mL和19.70～394.0μg／mL。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果蕓香柚皮苷和橙皮苷峰面積的RSD分別為1.16%和0.61%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，2，4，6，8，12，24 h時進(jìn)樣1次，測定峰面積。結(jié)果蕓香柚皮苷和橙皮苷峰面積的RSD分別為1.31%和1.43%(n＝7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取陳皮藥材粉末（過3號篩）6份，精密稱定，依法平行制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果蕓香柚皮苷和橙皮苷峰面積的RSD分別為0.85%和0.46%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取陳皮藥材粉末（過3號篩）6份，每份1.0 g，精密稱定，分別置50 mL錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃度為1.018 0 mg／mL的蕓香柚皮苷對照品溶液150μL和質(zhì)量濃度為0.985 1 mg／mL的橙皮苷對照品溶液700μL，依法平行制備供試品溶液，測定蕓香柚皮苷和橙皮苷的峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.5 樣品含量測定

取4種炮制方法炮制的陳皮樣品適量，依法制備供試品溶液，以蕓香柚皮苷和橙皮苷為對照，于285 nm波長處測定吸光度，以外標(biāo)法計(jì)算蕓香柚皮苷及橙皮苷的含量。結(jié)果見表2。

表2 4種陳皮炮制品含量測定結(jié)果（n＝3）

3 討論

陳皮有多種炮制方法，如麩炒、蜜制、醋制、土炒等[10]。現(xiàn)代研究表明，不同提取部位[3]、不同化學(xué)成分[11]、不同產(chǎn)地[12－13]、不同儲存時間[14]的陳皮藥理作用有差異。本研究中通過對同一批次不同炮制方法制備的陳皮中蕓香柚皮苷和陳皮苷2種成分進(jìn)行分析，探討陳皮古代醫(yī)家炮制使用的機(jī)制，為臨床用藥提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。

本研究結(jié)果表明，4種陳皮炮制品中蕓香柚皮苷含量由高到低依次為麩炒陳皮、蜜制陳皮、醋制陳皮、土炒陳皮，橙皮苷含量由高到低依次為麩炒陳皮、土炒陳皮、蜜制陳皮、醋制陳皮，說明不同炮制方法對陳皮中蕓香柚皮苷和陳皮苷的含量影響較大。4種陳皮炮制品中，蕓香柚皮苷含量范圍為0.68%～2.44%，橙皮苷為4.48%～10.67%。其中，麩炒陳皮的蕓香柚皮苷含量最高，麩炒陳皮和土炒陳皮的橙皮苷含量均較高，與文獻(xiàn)[15]的研究結(jié)果一致。

綜上所述，不同炮制方法對陳皮的橙皮苷和云香柚皮苷的含量影響顯著，麩炒陳皮的橙皮苷和云香柚皮苷含量最高。