EB病毒抗體篩查對體檢人群早期鼻咽癌的診斷價(jià)值▲

李 衛(wèi) 黃定貴 瞿申紅 何 祺 張 伶 賴麗平 劉 斐

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院1 健康管理中心，2 耳鼻咽喉頭頸科，3 科研實(shí)驗(yàn)中心，南寧市 530021，電子郵箱：354547070@qq.com)

鼻咽癌是常見的頭頸部惡性腫瘤，高發(fā)于中國南部的廣西、廣東、海南、福建等地[1-2]。EB病毒與鼻咽癌密切相關(guān)，其感染鼻咽上皮細(xì)胞易導(dǎo)致鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展[3-4]。早期鼻咽癌療效較好[5]，為盡快確診早癌，科學(xué)家們應(yīng)用一系列檢測技術(shù)篩查高發(fā)地區(qū)EB病毒感染人群，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)因操作簡便、結(jié)果較準(zhǔn)確得到廣泛應(yīng)用。EB病毒血清學(xué)指標(biāo)包括R反式激活因子(R transactivator，Rta)-IgG、早期抗原(early antigen，EA)-IgA、病毒衣殼抗原(viral capsid antigen，VCA)-IgA以及EB病毒核抗原1 IgA/IgG[6-8]。根據(jù)實(shí)際工作情況，在查閱文獻(xiàn)[9-11]的基礎(chǔ)上，本研究采用ELISA法檢測廣西體檢人群血清Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的表達(dá)水平，篩查EB病毒攜帶者，進(jìn)而通過病理活檢及影像學(xué)檢查確診早期鼻咽癌，旨在探討Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA篩查對體檢人群早期鼻咽癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 體檢資料 收集2017年4月至2019年5月在我院健康管理中心同時(shí)檢測Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的22 651例體檢者的資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：無抽吸性血絲痰、鼻塞、鼻衄、涕血、耳鳴、耳悶耳塞感、聽力下降、頭痛、面麻、視朦、復(fù)視、舌歪、張口困難及吞咽困難等明顯鼻部相關(guān)癥狀；排除有以上所述癥狀之一者。其中男性13 414例，女性9 237例，年齡13～100(45.2±13.3)歲。按年齡進(jìn)行分組，以10歲為組距分為9組，各組例數(shù)及性別分布見表1。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核同意，所有研究對象均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

表1 各組基本資料(n)

1.2 方法

1.2.1 ELISA檢測：抽取體檢者空腹靜脈血3～4 mL，常溫下3 000 r/min離心10 min分離血清，嚴(yán)格按同昕生物技術(shù)(北京)有限公司的ELISA試劑盒(Rta-IgG試劑盒生產(chǎn)批號：201710001、201808005、201811005、201902001；EA-IgA試劑盒生產(chǎn)批號：201707003、201805003、201808003；VCA-IgA試劑盒生產(chǎn)批號：201707001、201805001、201808001、201905001)說明書進(jìn)行操作，采用Freedom EVO ELISA型全自動(dòng)酶免工作站(瑞士TECAN公司)，在450/630 nm波長下檢測Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的吸光度值。以樣本吸光度與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度的比值(S/CO值)作為半定量判斷結(jié)果，Rta-IgG和VCA-IgA的S/CO值均以1.0為陽性臨界值，EA-IgA的S/CO值以1.1為陽性臨界值，S/CO值大于陽性臨界值則判斷為陽性。初步根據(jù)EB病毒抗體情況對EB病毒血清學(xué)陽性者進(jìn)行分層：3項(xiàng)檢測指標(biāo)均陽性為高危組，其中2項(xiàng)指標(biāo)陽性為中危組，僅1項(xiàng)指標(biāo)陽性為低危組。

1.2.2 病理活檢及影像學(xué)檢查：對所有體檢者進(jìn)行間接鼻咽鏡檢查，體檢中心聯(lián)合院級鼻咽癌研究所對以上3組EB病毒血清學(xué)檢測陽性者進(jìn)行隨訪，每3個(gè)月隨訪一次，若隨訪兩次仍無確診，改為6個(gè)月復(fù)查一次。EB病毒血清學(xué)檢測陽性的體檢人群若自覺有抽吸性血絲痰、鼻塞、鼻衄、涕血、耳鳴、耳悶耳塞感、聽力下降、頭痛、面麻、視朦、復(fù)視、舌歪、張口困難及吞咽困難等癥狀，與我院隨訪人員及時(shí)溝通后，到耳鼻咽喉頭頸科行高清電子鼻咽喉鏡檢查，發(fā)現(xiàn)鼻咽部新生物，由該科醫(yī)生判斷為可疑病灶。對可疑病灶進(jìn)行病理活檢，同時(shí)采用MAGNETOM Skyra型醫(yī)用磁共振成像設(shè)備(德國西門子股份公司，3.0T磁共振成像)行磁共振鼻咽顱底頸部平掃+增強(qiáng)以確診。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(x±s)表示，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA陽性檢出率的比較 22 651例體檢者中，Rta-IgG陽性檢出率為1.71%(388/22 651)，EA-IgA陽性檢出率為1.60%(363/22 651)，VCA-IgA陽性檢出率為4.96%(1 124/22 651)。三者陽性檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=615.074，P<0.001)。

2.2 不同性別體檢者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA陽性檢出率的比較 不同性別體檢者的Rta-IgG陽性檢出率、EA-IgA陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而女性的VCA-IgA陽性檢出率高于男性(P<0.05)。見表2。

表2 不同性別體檢者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的陽性檢出率的比較[n(%)]

2.3 不同年齡組體檢者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的陽性檢出率的比較 不同年齡組體檢者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的陽性檢出率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，60歲以后以上3種血清學(xué)指標(biāo)的陽性檢出率均明顯升高。見表3。

表3 不同年齡組體檢者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA陽性率的比較[n(%)]

2.4 不同年齡組不同性別體檢者VCA-IgA陽性率的比較 31～40歲、51～60歲和61～70歲年齡組女性的VCA-IgA陽性檢出率均高于男性(均P<0.05)，見表4。

表4 各年齡組不同性別體檢者VCA-IgA的陽性檢出率的比較[% (n/N)]

2.5 感染EB病毒體檢者血清學(xué)三聯(lián)檢的陽性分布情況 共檢出1 631例EB病毒陽性體檢者(Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA這3項(xiàng)指標(biāo)中至少有一項(xiàng)為陽性)，總陽性率為7.20%(1 631/22 651)，其中男性陽性檢出率為6.62%(888/13 414)，低于女性陽性檢出率的8.04%(743/9 237)(χ2=16.595，P<0.001)。在3種單項(xiàng)指標(biāo)陽性中，VCA-IgA的檢出陽性率較高(56.65%，924/1 631)；在不同組合指標(biāo)陽性中，Rta-IgG+VCA-IgA的檢出陽性率較高(7.91%，129/1 631)。見表5。

表5 不同性別體檢者血清學(xué)三聯(lián)檢的陽性分布情況

2.6 EB病毒陽性體檢者鼻咽癌確診情況 1 631例EB病毒陽性體檢者中，高危組12例(0.74%)，中危組220例(13.49%)，低危組1 399例(85.78%)。通過密切追蹤隨訪至2019年12月31日，從高、中、低危組人群中分別追蹤到18例、25例、3例可疑病灶者，進(jìn)行病理活檢和影像學(xué)檢查，最終確診鼻咽癌26例。其中男性20例，女性6例；高危組11例，中危組15例，低危組0例，分別占各組人群的91.67%(11/12)、6.82%(15/220)和0%(0/1 349)；按2010版國際抗癌聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)劃分，T1N0M0(Ⅰ期)15例，T2N0M0或T1N1M0(Ⅱ期)共6例，T3N2M0(Ⅲ期)3例，T4N2M0或T3N3M0(Ⅳ期)共2例。

3 討 論

利用血清學(xué)指標(biāo)檢測鼻咽癌高發(fā)地區(qū)人群EB病毒感染狀況，可有效地篩查出患癌高危群體，而高危人群經(jīng)影像學(xué)及病理活檢確診，有利于及時(shí)發(fā)現(xiàn)和治療早癌，提高患者生存率和生活質(zhì)量[12]。BamH1片段R左向第一讀碼框?yàn)榱⒓丛缙诨?，可編碼Rta蛋白，激活EB病毒進(jìn)入裂解期[13]。研究顯示，與鼻炎組織及健康志愿者血漿比較，Rta及其IgG抗體分別在鼻咽癌組織及鼻咽癌患者血漿中特異表達(dá)[14]。EA和VCA分別是EB病毒裂解早期和晚期的標(biāo)志物[15-16]。聯(lián)合檢測Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA，有利于監(jiān)測DNA復(fù)制活躍狀態(tài)，提高篩查早期鼻咽癌的準(zhǔn)確性，避免漏檢[17]。本院健康管理中心面向廣西各地開展健康體檢服務(wù)，通過廣泛篩查11～100歲體檢人群血清學(xué)指標(biāo)，評估近段時(shí)間全省患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)。

本研究通過聯(lián)合檢測Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA，從廣西22 651例體檢人群中篩查出EB病毒陽性1 631例，其中男性888例，女性743例。其中，VCA-IgA陽性檢出率較高(4.96%)，但均低于廣東省中山市的陽性檢出率(5.84%)[18]和福建省福州地區(qū)的陽性檢出率(10.4%)[19]。本研究結(jié)果還顯示，女性的VCA-IgA陽性檢出率高于男性(P<0.05)，但不同性別的EA-IgA與Rta-IgA陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這與針對福州地區(qū)的研究中，各指標(biāo)在不同性別中未見差異有所不同[19]。本研究結(jié)果還顯示，在31～40歲、51～60歲和61～70歲年齡組間不同性別的VCA-IgA陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；且在單項(xiàng)指標(biāo)中VCA-IgA陽性檢出率較高，為56.65%(924/1 631)，提示通過檢測VCA-IgA易于篩檢出中老年人群中的EB病毒血清學(xué)檢測陽性者。上述結(jié)果表明，聯(lián)合應(yīng)用Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA這3個(gè)指標(biāo)可有效地篩選出各個(gè)年齡別EB病毒陽性人群，避免單一指標(biāo)篩查造成的漏檢；VCA-IgA相對其他兩個(gè)指標(biāo)更加靈敏，其陽性檢出率在不同性別老年者中明顯增高，說明這部分人群有必要在體檢中進(jìn)行EB病毒篩查；VCA-IgA聯(lián)合Rta-IgG篩檢的雙陽性率在不同組合指標(biāo)陽性中占比較高，提示該部分EB病毒陽性人群罹患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)增大，而三陽性率提示患癌風(fēng)險(xiǎn)更大。這提示，對Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA雙陽性及三陽性體檢人群進(jìn)行更為密切的隨訪觀察，有利于發(fā)現(xiàn)早期鼻咽癌患者。

進(jìn)一步借鑒廣東省中山市腫瘤研究所成熟的鼻咽癌風(fēng)險(xiǎn)評估方案[12，20]，結(jié)合本院體檢者及鼻咽癌患者的EB病毒抗體陽性結(jié)果，劃分三個(gè)患癌風(fēng)險(xiǎn)組，經(jīng)病理活檢和影像學(xué)檢查，高危組確診鼻咽癌11例，中危組發(fā)現(xiàn)鼻咽癌15例，其中高危組確診早癌7例(6例Ⅰ期，1例Ⅱ期)，中危組確診早癌14例(9例Ⅰ期，5例Ⅱ期)；12例Rta-IgG和VCA-IgA雙陽性者中，有10例早癌(7例Ⅰ期，3例Ⅱ期)。但VCA-IgA陽性例數(shù)在體檢人群中占比較高，不排除有假陽性結(jié)果[6]，因此，VCA-IgA聯(lián)合Rta-IgG檢測能較準(zhǔn)確地評估患癌風(fēng)險(xiǎn)，以及時(shí)采取相應(yīng)的隨訪策略追蹤。

值得注意的是，按不同性別統(tǒng)計(jì)，女性EB病毒陽性率(8.04%)高于男性(6.62%)(P<0.05)，且在31～40歲、51～60歲和61～70歲年齡組中女性VCA-IgA陽性率亦高于男性(P<0.05)，因此，盡管目前發(fā)現(xiàn)的26例鼻咽癌患者中只有6例為女性，今后仍應(yīng)定期監(jiān)測該群體的EB病毒血清學(xué)變化。

綜上所述，聯(lián)合檢測Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA可從體檢者中有效篩查出EB病毒陽性人群，其中具有雙陽性或三陽性人群的患癌風(fēng)險(xiǎn)較高，隨著體檢人群范圍的擴(kuò)大，EB病毒血清學(xué)檢測陽性體檢者的人數(shù)不斷增多，將其分為不同風(fēng)險(xiǎn)組進(jìn)行評估、隨訪，及時(shí)提醒中、高危體檢人群到鼻咽喉頭頸科進(jìn)行深入檢查，有助于診斷和治療早期鼻咽癌，提高患者生存質(zhì)量，也可為制定鼻咽癌高發(fā)地區(qū)的防治策略提供參考。