肉制品中瘦肉精的檢測(cè)技術(shù)研究

陳明星 李靜

摘 要：瘦肉精是一類能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制肥肉生長(zhǎng)的動(dòng)物用藥。不法分子為了促進(jìn)家畜生長(zhǎng)和提高瘦肉率將瘦肉精添加于飼料中，食用了含瘦肉精的動(dòng)物組織會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用。作者綜述了瘦肉精的危害以及肉制品中瘦肉精檢測(cè)方法研究的進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：瘦肉精;檢測(cè);氣相色譜;免疫

瘦肉精，學(xué)名鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，簡(jiǎn)稱CL），其化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)與腎上腺素相似，是一種β-興奮劑。臨床上用于治療支氣管哮喘和痙攣等，養(yǎng)殖業(yè)上主要用于提高動(dòng)物的胴體瘦肉率，國(guó)外也用于減肥。但是CL具有很高的殘留性，可引起急性中毒和慢性中毒。世界各國(guó)嚴(yán)禁CL用于禽畜的養(yǎng)殖，但因利潤(rùn)驅(qū)使，仍存在非法使用情況，嚴(yán)重威脅人類的健康。

由于瘦肉精主要?dú)埩粲趧?dòng)物內(nèi)臟中，而西方國(guó)家一般不消費(fèi)動(dòng)物內(nèi)臟，在合理控制添加量的前提下，其殘留量及其對(duì)人體的影響有限，故而在美國(guó)、加拿大、新西蘭及我國(guó)香港等地區(qū)，瘦肉精這類物質(zhì)的使用是合法的。在我國(guó)大陸地區(qū)，從國(guó)民的飲食習(xí)慣和我國(guó)具體國(guó)情出發(fā)，中國(guó)農(nóng)業(yè)部早在 1997 年 3 月就發(fā)布了農(nóng)牧發(fā) [1997] 3 號(hào)令嚴(yán)禁 β- 腎上腺素能激動(dòng)劑在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用，而香港地區(qū)對(duì)克倫特羅的最大殘留量規(guī)定為小于10 μg/kg（2001.146號(hào)法律公告）

1 瘦肉精的檢測(cè)方法

1.1 高效液相色譜法

Fredy Morales-Trejo采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)牛肝臟中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行測(cè)定，檢出限為 0.42 ng/g，相對(duì)偏差<4.74%，該法快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性高，可操作性強(qiáng)，可用于動(dòng)物肝臟中克倫特羅殘留的測(cè)定。Pilar Gonzalez Gigosos采用高效液相色譜法對(duì)動(dòng)物視網(wǎng)膜中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行了檢測(cè)，檢出限為0.5 ng/g，該法準(zhǔn)確、快速。

1.2 氣相色譜法

吳銀良等用有機(jī)混合溶劑來提取動(dòng)物肝組織樣品，條件是堿性環(huán)境，提取液先濃縮，然后用乙酸乙酯溶解，再用稀HCl反萃取，達(dá)到除去脂肪的目的，調(diào)節(jié)pH值之后用SCX固相萃取柱來凈化，洗脫液先用氮?dú)獯蹈桑儆秒p三甲基硅基三氟乙酰氨衍生，采用外標(biāo)法來定量，選擇離子模式進(jìn)行測(cè)定。鹽酸克倫特羅的檢出限是0.30g/kg，添加濃度1.0～5.0ng/kg，回收率77.4%～88.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.1%～5.1%，衍生物的峰面積與被測(cè)物的濃度在 0.003～1.00mg/L 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性回歸系數(shù)大于0.999。

1.3 膠體金免疫法

姜艷彬等以膠體金標(biāo)記鹽酸克倫特羅單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)性膜層析技術(shù)制成了豬尿液中鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)的快速檢測(cè)試紙，它能快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)出豬尿中的鹽酸克倫特羅，如待測(cè)尿樣中無鹽酸克倫特羅，金標(biāo)抗體便能與固相載體結(jié)合，形成紅色帶，如待測(cè)尿樣中含鹽酸克倫特羅，它與金標(biāo)抗體一樣可以和固相載體結(jié)合，占去了金標(biāo)抗體和固相載體結(jié)合的可能性，導(dǎo)致金標(biāo)抗體和固相載體結(jié)合量大大減少，形成不了紅色帶;經(jīng)試驗(yàn)制成了可檢測(cè)出豬尿樣中鹽酸克倫特羅濃度為2ng/mL的試紙條，可在8min內(nèi)完成測(cè)試，肉眼便可判斷，試紙條使用不需任何的儀器設(shè)備，能在現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)和篩選，靈敏度滿足臨床使用要求。

1.4 酶聯(lián)免疫法

ELISA法檢測(cè)“瘦肉精”是目前國(guó)內(nèi)普遍使用的檢測(cè)方法之一。其原理是利用抗原抗體反應(yīng)：加入特定的“瘦肉精”抗體之后，它會(huì)與捕獲抗體結(jié)合，如果樣品中有 -興奮劑，將與特定“瘦肉精”的酶連接物相互競(jìng)爭(zhēng)捕獲抗體的連接位點(diǎn)，在洗板過程中，沒有連接的酶連接物會(huì)被除去，加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣品溶液、酶連接物之后，經(jīng)過孵育、洗板，將底物（發(fā)色劑）轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色的產(chǎn)物，加入終止液后，顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。顯示的顏色越淺，“瘦肉精”含量越高，測(cè)量在450nm 處進(jìn)行，樣品中-興奮劑的濃度與吸光度成反比。

1.5 綜合化學(xué)法

根據(jù)“瘦肉精”的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)進(jìn)行綜合鑒別主要是參照國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)方法。由于“瘦肉精”溶于水、乙醇，可以用水對(duì)其進(jìn)行提取?！笆萑饩笨梢燥@示芳香第一胺類、氯化物的鑒別反應(yīng)，用分光光度計(jì)檢測(cè)，最大吸收波長(zhǎng)244～295nm。綜合分析能定性確定肉制品中是否存在“瘦肉精”類物質(zhì)，它不需要昂貴的試劑、儀器，操作簡(jiǎn)單，沒有復(fù)雜處理過程，是基層動(dòng)物檢疫工作者初查“瘦肉精”類物質(zhì)殘留的有效方法，但靈敏度和最低檢測(cè)限不是很理想。

2 展望

當(dāng)前，造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國(guó)內(nèi)外檢測(cè)方法、手段還不完善，還沒有建立宰前（毛、尿液）監(jiān)測(cè)體系和準(zhǔn)確、迅速、方便、精確的檢測(cè)方法，從成本現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)設(shè)備簡(jiǎn)便基層同步篩選法檢測(cè)（試紙條法、試劑盒法）優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、成本低，適合在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行大量樣品的快速篩查，但結(jié)果受環(huán)境、溫度等因素影響大，容易出現(xiàn)“假陽性”，因此試紙條法和試劑盒法檢測(cè)結(jié)果不能直接作為執(zhí)法依據(jù)。確證法檢測(cè)采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀等大型高精尖儀器設(shè)備，優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、準(zhǔn)確性好，結(jié)果可作為執(zhí)法依據(jù)，但此類儀器設(shè)備非常昂貴，環(huán)境要求極高，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，不適用于基層和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。因此，國(guó)內(nèi)外檢測(cè)鹽酸克倫特羅等“瘦肉精”藥物通行做法是“先篩選后確證”，以確證法的結(jié)果作為監(jiān)管執(zhí)法的依據(jù)，這樣既節(jié)約了成本，又不會(huì)誤判。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：陳明星，男，漢族，副教授，碩士學(xué)位，研究方向：食品科學(xué)。