刺五加根皮乙醇提取物和短梗五加根皮乙醇提取物對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用及其機(jī)制

芮施 ,趙巖 ,王晶瑤,蔡恩博,祝洪艷,李平亞,劉金平

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院中藥化學(xué)教研室，吉林 長春 130118；2.吉林大學(xué)藥學(xué)院人參創(chuàng)新藥物開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心，吉林 長春 130021）

刺五加（Acanthopanax senticosus）和短梗五加（Acanthopanax sessiliflorus）是廣泛分布于我國東北林區(qū)的2 種五加科五加屬重要珍貴灌木類藥用植物。刺五加的干燥根和根莖或莖被2015 年版《中華人民共和國藥典》收載，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神之功效，是刺五加片等重要中成藥的原料［1-2］?！都质∷幤窐?biāo)準(zhǔn)1977》收載刺五加和短梗五加的干燥根皮為東五加皮，可祛風(fēng)濕，壯筋骨，補(bǔ)肝腎。雖然短梗五加被列入吉林省藥品標(biāo)準(zhǔn)，但目前短梗五加資源仍以新食品原料應(yīng)用為主。民間把短梗五加干燥根與刺五加正品混用做刺五加，但缺少科學(xué)依據(jù)。此外，雖然刺五加分布廣泛，資源豐富，但因其藥用部位的相對不可再生性，藥材質(zhì)量常因生產(chǎn)年限不足，活性物質(zhì)積累有限，部分以刺五加為原料藥的制劑面臨無合格藥材可用的尷尬局面。在鎮(zhèn)靜安神藥效研究方面，部分研究已證實(shí)了刺五加的鎮(zhèn)靜催眠作用［3-10］。相關(guān)研究［11-13］表明：刺五加及短梗五加中均含有大量的苷類物質(zhì)，刺五加苷B 和E 及異嗪皮啶為主要的活性成分。鑒于刺五加原料藥資源的相對不足，刺五加和短梗五加二者較近的親緣關(guān)系、相近的生長環(huán)境和活性成分組成以及國內(nèi)外對短梗五加根鎮(zhèn)靜催眠活性研究報(bào)道較少，本研究對比刺五加根皮和短梗五加根皮乙醇提取物的鎮(zhèn)靜催眠作用，探討短梗五加根皮替代刺五加根皮的可行性，擴(kuò)展刺五加藥源。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器雄性昆明小鼠購自長春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，體質(zhì)量18～22 g，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK（吉）2016-0003；飼養(yǎng)條件：室溫24℃～26℃，濕度55% ±5%，正常自由進(jìn)食飲水，維持正常晝夜節(jié)律。刺五加根皮和短梗五加根皮（8 年生），由吉林省利生源生物制品有限公司提供，秋季挖根，洗凈泥沙，剝皮，曬干；分別取干燥刺五加根皮和短梗五加根皮粉碎，過20 目篩，用10 倍量的95%乙醇超聲提取2 次，每次2 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮，干燥，分別得到受試藥刺五加根皮乙醇提取物（SENR，提取率5.52%）和短梗五加根皮乙醇提取物（SESR，提取率 3.85%）。地西泮（diazepam，DZP）由中國太原振興制藥有限公司提供，小鼠5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）和γ-氨基丁酸（gamma aminobutyric acid，GABA）ELISA 試劑盒購自南京建成有限公司，氟馬西尼（flumazenil，F(xiàn)LU）、5-羥色氨酸（5-hydroxytryptophane，5-HTP）和戊巴比妥鈉購自上海麥克林生化科技有限公司，PBS 緩沖液（pH7.2）購自海克隆生物化學(xué)制品（北京）有限公司。Avanti TM J-3OI 冷凍高速離心機(jī)購自美國BECKMAN 公司，Spectra MAX 190 酶標(biāo)儀購自上海美谷分子儀器有限公司，ABS 320-4N 型分析天平購自上海島韓實(shí)業(yè)有限公司，DY89-1 電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)購自寧波新芝生物科技股份有限公司，ZZ-6 小鼠自主活動(dòng)測試儀購于成都泰盟軟件有限公司。

1.2 自主活動(dòng)儀檢測小鼠自主活動(dòng)次數(shù)選取120 只雄性昆明小鼠，隨機(jī)分為12 組：空白對照組、DZP 組（3 mg·kg－1，灌胃給藥）、不同劑量（4、8、16、32 和64 mg·kg－1）SENR 組和（4、8、16、32 和64 mg·kg－1）SESR 組，每組10 只。各受試藥物均以蒸餾水為溶劑配制成適宜濃度，給藥體積均為0.1 mL·10 g－1；空白對照組大鼠給予等體積的蒸餾水；SENR 組和SESR 組實(shí)驗(yàn)分別給予不同劑量SENR 和SESR，連續(xù)5 d，每天1 次；DZP 組前4 d 給予0.1 mL·10 g－1蒸餾水，最后1 d 灌胃給藥3 mg·kg－1DZP。在最后一次小鼠給藥30 min 后測量自主活動(dòng)情況，將各組小鼠放置于自主活動(dòng)記錄儀中，在適應(yīng)10 min 后進(jìn)行記錄，記錄小鼠5 min 內(nèi)的站立和活動(dòng)次數(shù)。

1.3 亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠發(fā)生率的測定分組及前4 d 處理方法同“1.2”。第5 天給藥前8 h 小鼠禁食不禁水，并在末次給藥30 min 后，腹腔注射亞催眠劑量（28 mg·kg－1）戊巴比妥鈉，觀察并記錄小鼠翻正反射消失情況，在30 min 內(nèi)小鼠翻正反射消失達(dá)到1 min 以上者視為發(fā)生睡眠現(xiàn)象，計(jì)算睡眠發(fā)生率，小鼠睡眠發(fā)生率＝每組小鼠入睡只數(shù)/每組小鼠總只數(shù)×100%。

1.4 催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的測定分組及前4 d 處理方法同“1.2”。第5 天給藥前8 h 小鼠禁食不禁水，在最后一次給藥30 min 后，腹腔注射戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1），觀察小鼠的睡眠情況，以小鼠從腹腔注射戊巴比妥鈉到翻正反射消失的時(shí)間作為睡眠潛伏期，而從翻正反射的消失至恢復(fù)的時(shí)間作為小鼠的睡眠時(shí)間，記錄各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.5 協(xié)同5-HTP 對亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠發(fā)生率的測定將60 只昆明小鼠隨機(jī)分為6 組，每組10 只，分別為空白對照組、5-HTP（2.5 mg·kg－1，腹腔注射）組、SENR（4 mg·kg－1，灌胃給藥）組、SENR（4 mg·kg－1，灌胃給藥）+5-HTP（2.5 mg·kg－1，腹腔注射）組、SESR（4 mg·kg－1，灌胃給藥）組和SESR（4 mg·kg－1，灌胃給藥）+5-HTP（2.5 mg·kg－1，灌胃給藥）組，SENR 和SESR 亞劑量由“1.2～1.4”實(shí)驗(yàn)檢測得出。對各組小鼠連續(xù)灌胃給藥5 d，給藥容積均為0.1 mL·10 g－1，空白對照組和5-HTP 組小鼠每天給予等體積蒸餾水。第5 天給藥前8 h 小鼠禁食不禁水，并在最后一次給藥30 min后，對空白對照組和單獨(dú)給予SENR、SESR 組以外的3 組小鼠腹腔注射5-HTP。15 min后，各組小鼠腹腔注射亞催眠劑量的戊巴比妥鈉（28 mg·kg－1），觀察各組小鼠翻正反射消失情況，記錄睡眠小鼠數(shù)量，計(jì)算小鼠睡眠發(fā)生率。

1.6 協(xié)同5-HTP對催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的測定分組和給藥同“1.5”。小鼠在第5 天給藥前8 h 禁食不禁水，在最后一次給藥30 min 后，對空白對照組、單獨(dú)給予SENR 和單獨(dú)給予SESR 組以外的3 組小鼠腹腔注射5-HTP。靜待15 min 后，6 組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1），觀察各組小鼠的睡眠情況，記錄其睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.7 拮抗FLU 對戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的測定60 只昆明小鼠隨機(jī)分為6 組，每組10只，分別為空白對照組、FLU（8 mg·kg－1，腹腔注射）組、SENR（32 mg·kg－1，灌胃給藥）組、SENR（32 mg·kg－1，灌胃給藥）+FLU（8 mg·kg－1，腹腔注射）組、SESR（32 mg·kg－1，灌胃給藥）組、SESR（32 mg·kg－1，灌胃給藥）+FLU（8 mg·kg－1，腹腔注射）組，SENR 和SESR的催眠劑量由“1.2～1.4”實(shí)驗(yàn)得出。實(shí)驗(yàn)給藥持續(xù)5 d，每天1 次，各組小鼠每次給藥體積為0.1 mL·10 g－1，空白對照組和FLU 組小鼠給予等體積蒸餾水。第5 天給藥前8 h 小鼠禁食不禁水，最后一次給藥30 min 后，對空白對照組、SENR 單獨(dú)給藥組和SESR 單獨(dú)給藥組以外的3 組小鼠腹腔注射FLU（8 mg·kg－1）。靜待15 min 后，6 組小鼠腹腔注射催眠劑量的戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1），觀察各組小鼠的睡眠情況，記錄其睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.8 ELISA 法檢測各組小鼠腦組織中5-HT 和GABA 水平“1.6 和1.7”實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)束后，分離各組小鼠腦組織，稱質(zhì)量，加入9 倍體積的冰冷PBS 緩沖液（pH7.2），勻漿，4℃、1 000 r·min－1離心15 min，取上清液，采用ELISA 試劑盒檢測上清液中5-HT 和GABA 水平。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間均符合正態(tài)分布，以表示。多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)與空白對照組比較，DZP 組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)減少（P＜0.01），不同劑量（8、16、32 和64 mg·kg－1）SENR 組和不同劑量（8、16、32 和64 mg·kg－1）SESR 組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少（P＜0.05 或P＜0.01），見表1。

表1 各組小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)Tab.1 Number of locomotor activities of mice in various groups（n＝10,）

表1 各組小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)Tab.1 Number of locomotor activities of mice in various groups（n＝10,）

*P＜0.05，**P＜0.01vsblank control group.

2.2 亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)各組小鼠睡眠發(fā)生率與空白對照組比較，在亞劑量（28 mg·kg－1）戊巴比妥鈉的誘導(dǎo)下，DZP 組小鼠睡眠發(fā)生率提升到100%，不同劑量（4、8、16、32 和64 mg·kg－1）SENR 組和不同劑量（8、16、32 和64 mg·kg－1）SESR 組小鼠睡眠發(fā)生率升高，且存在一定劑量依賴性，SENR 和SESR 劑量達(dá)到32 mg·kg－1時(shí)小鼠睡眠發(fā)生率達(dá)到最大值。見表2。

2.3 催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間與空白對照組比較，在催眠劑量戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1）誘導(dǎo)下，DZP 小鼠睡眠潛伏期縮短（P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間延長（P＜0.01）；不同劑量（8、16、32 和64 mg·kg－1）SENR 組和不同劑量（8、16、32 和64 mg·kg－1）SESR 組小鼠睡眠潛伏期縮短（P＜0.05 或P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間延長（P＜0.05 或P＜0.01），且存在一定的劑量依賴性，SENR 和SESR 劑量達(dá)到32 mg·kg－1時(shí)與空白對照組比較差異最明顯。見表3。綜合“2.1～2.3”的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇SENR 和SESR 的亞催眠劑量為4 mg·kg－1，催眠劑量為32 mg·kg－1。

表2 亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠的睡眠發(fā)生率Tab.2 Incidence of sleep of mice in sub-hypnotic dose of pentobarbital sodium-induced sleep experiment in various groups(n=10,η/%)

2.4 協(xié)同5-HTP 后亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠發(fā)生率與空白對照組比較，在亞催眠劑量戊巴比妥鈉（28 mg·kg－1）誘導(dǎo)下，5-HTP（2.5 mg·kg－1）組、SENR（4.0 mg·kg－1）組、SESR（4.0 mg·kg－1）組、SENR+5-HTP 組和SESR+5-HTP 組小鼠睡眠發(fā)生率升高（P＜0.01）；分別與單獨(dú)給藥SENR 組和單獨(dú)給藥SESR 組比較，協(xié)同給藥SENR+5-HTP 組和SESR+5-HTP 組小鼠睡眠發(fā)生率升高（P＜0.01）。見表4。

表3 催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間Tab.3 Sleep latencies and sleep time of mice in hypnotic dose of pentobarbital sodium-induced sleep experiment in various groups(n＝10,,t/min)

表3 催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間Tab.3 Sleep latencies and sleep time of mice in hypnotic dose of pentobarbital sodium-induced sleep experiment in various groups(n＝10,,t/min)

*P＜0.05，**P＜0.01vsblank control group.

表4 戊巴比妥鈉誘導(dǎo)5-HTP 協(xié)同給藥小鼠的睡眠指標(biāo)Tab.4 Sleep indexes of mice induced by pentobarbital sodium in combination with 5-HTP in various groups(n＝10,)

表4 戊巴比妥鈉誘導(dǎo)5-HTP 協(xié)同給藥小鼠的睡眠指標(biāo)Tab.4 Sleep indexes of mice induced by pentobarbital sodium in combination with 5-HTP in various groups(n＝10,)

*P＜0.01vsblank control group；ΔP＜0.01vsSENR group；#P＜0.01vsSESR group.

2.5 聯(lián)合5-HTP 后催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間與空白對照組比較，在催眠劑量戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1）誘導(dǎo)下，SENR+5-HTP 組和SESR+5-HTP 組小鼠睡眠潛伏期縮短（P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間延長（P＜0.01）。分別與SENR 組和SESR 組比較，SENR+5-HTP 組和SESR+5-HTP 組小鼠睡眠潛伏期縮短（P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間延長（P＜0.01）。見表4。

2.6 聯(lián)合5-HTP 后催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠腦組織中5-HT 水平與空白對照組比較，在催眠劑量戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1）誘導(dǎo)下，SENR+5-HTP 組和SESR+5-HTP 組小鼠腦組織中5-HT 水平升高（P＜0.01）。分別與SENR 組和SESR 組比較，SENR+5-HTP 組和SESR+5-HTP 組小鼠腦組織中5-HT 水平升高（P＜0.01）。見表4。

2.7 聯(lián)合FLU 后催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間與空白對照組比較，在催眠劑量戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1）誘導(dǎo)下，F(xiàn)LU 組小鼠睡眠潛伏期延長（P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間縮短（P＜0.01）；SENR 組（32 mg·kg－1）和SESR 組（32 mg·kg－1）組小鼠睡眠潛伏期縮短（P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間延長（P＜0.01）。分別與SENR 組和SESR 組比較，SENR+FLU 組和SESR+FLU 組小鼠睡眠潛伏期延長（P＜0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間縮短（P＜0.01）。見表5。

2.8 催眠劑量SENR 和SESR 拮抗FLU 作用下催眠小鼠腦組織中GABA 水平與空白對照組比較，在催眠劑量戊巴比妥鈉（48 mg·kg－1）誘導(dǎo)下，F(xiàn)LU 組小鼠腦組織中GABA 水平降低（P＜0.05），SENR 組（32 mg·kg－1）和SESR 組（32 mg·kg－1）組小鼠腦組織中GABA 水平升高（P＜0.01）。分別與SENR 組和SESR 組比較，SENR+FLU 組和SESR+FLU 組小鼠腦組織中GABA 水平降低（P＜0.05）。見表5。

表5 FLU 聯(lián)合催睡劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠的睡眠指標(biāo)Tab.5 Sleep indexes of mice in hypnotic dose of pentobarbital sodium-induced sleep experiment combined with FLU in various groups(n＝10,)

表5 FLU 聯(lián)合催睡劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠的睡眠指標(biāo)Tab.5 Sleep indexes of mice in hypnotic dose of pentobarbital sodium-induced sleep experiment combined with FLU in various groups(n＝10,)

*P＜0.05，**P＜0.01vsblank control group；ΔP＜0.01vsSENR group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01vsSESR group.

3 討論

由于對刺五加長期過度無序的掠奪式采莖挖根行為，造成藥材質(zhì)量嚴(yán)重下降，部分以刺五加為原料藥的制劑面臨無合格藥材可用的尷尬局面。為了探索以與刺五加親緣關(guān)系和生長環(huán)境最為接近的短梗五加替代刺五加的可行性，本課題組在查閱前期研究文獻(xiàn)和結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)室研究基礎(chǔ)上，對比SENR 和SESR 的鎮(zhèn)靜催眠活性及其初步作用機(jī)制進(jìn)行了對比研究。

在用于評價(jià)鎮(zhèn)靜和催眠活性的藥理學(xué)方法中，自主活性實(shí)驗(yàn)和戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠實(shí)驗(yàn)是2 種最經(jīng)典的睡眠行為評價(jià)方法［14］。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自主活動(dòng)的減少通常被認(rèn)為是鎮(zhèn)靜的標(biāo)志［15］。本研究結(jié)果表明：8～64 mg·kg－1劑量的SENR 和SESR（折合刺五加原藥材145～1 160 mg·kg－1，折合短梗五加原藥材208～1 660 mg·kg－1）均可降低正常小鼠的自主活動(dòng)，表現(xiàn)出鎮(zhèn)靜作用，二者表現(xiàn)出相近的作用趨勢。協(xié)同亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率，以及協(xié)同催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間是評價(jià)藥物催眠作用的重要指標(biāo)［14］。本研究結(jié)果表明：8～64 mg·kg－1SENR 和SESR 可有效提高戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠的睡眠發(fā)生率，縮短睡眠潛伏期，延長睡眠時(shí)間，表明SENR 和SESR 均具有催眠作用，且二者表現(xiàn)出相近的作用效果和作用趨勢，均在32 mg·kg－1劑量下表現(xiàn)出最佳作用效果，折合原藥材分別為刺五加580 mg·kg－1、短梗五加830 mg·kg－1，對于人體（按70 kg 體質(zhì)量計(jì)算）則分別為刺五加4.5 g·d－1、短梗五加6.5 g·d－1。本研究中刺五加根的鎮(zhèn)靜催眠作用研究結(jié)果與以往的研究有所差異，如胡文婷等［16］的研究結(jié)果表明：刺五加可明顯地延長戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時(shí)間，而對小鼠睡眠潛伏期無影響，其原因與藥材提取方法有關(guān)，本研究對象為乙醇提取物，而文獻(xiàn)［4］報(bào)道的為水煎劑。

5-HT 又名血清素，是一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，有助于感受幸福和快樂，改善睡眠，調(diào)節(jié)認(rèn)知、記憶和許多生理過程［4］。5-HTP 在人體內(nèi)可作為5-HT 的前體物質(zhì)，而5-HT 在體內(nèi)可合成褪黑素（MT），進(jìn)而發(fā)揮對睡眠的調(diào)整作用［17］。本研究結(jié)果表明：亞催眠劑量的SENR 和SESR 均能夠協(xié)同5-HTP 明顯地提高亞催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率，縮短催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期和延長睡眠持續(xù)時(shí)間，提高小鼠腦組織中5-HT 水平，表明中樞5-HT 能神經(jīng)系統(tǒng)參與了SENR 和SESR 的催眠作用。有研究［18-19］顯示：刺五加水煎液協(xié)同5-HT 前體物質(zhì)5-HTP 發(fā)揮改善睡眠作用［4］。GABA 是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)之一，是調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性的關(guān)鍵信號分子。GABA 能夠與大腦突觸后神經(jīng)細(xì)胞膜上的GABA 受體（苯二氮卓類受體）和巴比妥受體緊密相連，組成GABA/BZ 復(fù)合體，共同調(diào)節(jié)氯離子（Cl－）通道，當(dāng)GABA/BZ 受體被激活，Cl－通道開放大量Cl－內(nèi)流，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞膜過度極化而不易除極，神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)被抑制；而FLU是GABA/BZ 受體的常用抑制劑［20］。本研究結(jié)果表明：FLU 能夠有效阻斷催眠劑量SENR 和SESR的催眠作用及SENR 和SESR 誘導(dǎo)的腦內(nèi)GABA 水平升高，提示SENR 和SESR 的催眠作用與中樞GABA 能神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。本研究結(jié)果與楊婷婷等［21］和董梅［4］的研究結(jié)果類似，楊婷婷等［21］的研究指出：刺五加有效部位可以增強(qiáng)GABA 的表達(dá)，董梅［4］的研究指出：GABA 能神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)了刺五加的改善睡眠作用，刺五加水煎液通過上調(diào)苯二氮卓類受體、協(xié)同5-HT 前體物質(zhì)5-HTP 發(fā)揮改善睡眠作用。

綜上所述，本研究填補(bǔ)了SESR 鎮(zhèn)靜催眠作用及機(jī)制研究的空白。本研究結(jié)果表明：SENR 和SESR 均具有鎮(zhèn)靜催眠作用，其作用機(jī)制均與其上調(diào)腦組織中5-HT 和GABA 水平有關(guān)；在鎮(zhèn)靜催眠方面，短梗五加根皮可作為刺五加根皮的替代品。本研究結(jié)果也表明：短梗五加根皮和刺五加根皮的鎮(zhèn)靜催眠作用和機(jī)制仍存在一定的差異，將在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行深入研究。