有核紅細胞計數(shù)在不同全自動血細胞分析儀中的應用及評價

孟 欣，王苗苗，王 剛，王曉琴，張 寧

(西安交通大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，陜西西安 710061)

有核紅細胞(NRBC)是由于骨髓中未完全成熟紅細胞因為各種原因而出現(xiàn)在外周血液中。新生兒外周血中可檢測到數(shù)量不等的NRBC，隨著年齡的增長在外周血中迅速消失[1]。健康成人外周血中一般無NRBC，若出現(xiàn)則提示一種病理狀態(tài)，例如血液系統(tǒng)惡性腫瘤、機體缺氧、急性大量失血、增生性貧血、骨髓損傷、骨髓纖維化、感染等[2-3]。因此，外周血中NRBC準確識別并精確計數(shù)對疾病判斷有重要的意義。但是，由于NRBC含有細胞核，與淋巴細胞形態(tài)學特點相似，經(jīng)典庫爾特原理血細胞分析儀計數(shù)會將有核紅細胞計入白細胞造成白細胞計數(shù)(WBC)假性升高。新一代自動化血細胞分析儀通過WNR或WNB等通道，利用熒光染色流式細胞原理對細胞核進行精確辨別，不需要額外試劑和附加成本，從而準確識別和計數(shù)NRBC，對疾病診斷和鑒別診斷具有重要的臨床價值；同時，其可以對WBC進行自動校正，避免NRBC干擾導致WBC和白細胞分類異常。不同品牌、型號的血細胞分析儀對NRBC的識別和校正能力是否有差異，以及在何種條件下需要通過人工復檢血涂片對NRBC精準識別和計數(shù)是需要關注的問題。在臨床實踐中發(fā)現(xiàn)，不同品牌相關型號的血細胞分析儀NRBC計數(shù)有差異，同時與人工顯微鏡推片鏡檢也有不同程度的偏差。本研究對本院使用的兩種系統(tǒng)血細胞分析儀NRBC計數(shù)進行評價并驗證，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院門診、住院患者血液標本共計13 156份，采用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝全血，并進行分析和推片。13 156例患者中，男7 175例，女5 981例，年齡(42.22±20.20)歲。標本采集后4 h內(nèi)完成儀器檢測分析，其中208例患者標本經(jīng)推片鏡檢后確認NRBC陽性。

1.2方法 采用Sysmex XN-9000全自動血細胞分析儀(簡稱XN-9000)和Mindray BC-6800 Plus全自動血細胞分析儀(簡稱BC-6800 Plus)及配套校準品、質(zhì)控品和試劑。嚴格按照科室標準操作程序(SOP)規(guī)定進行儀器校準，并進行精密度、攜帶污染率及線性等性能驗證。Sysmex SP-10全自動推片染片機使用BASO瑞氏染液，推片鏡檢采用奧林巴斯CX-21光學顯微鏡。NRBC分別使用以下2種計數(shù)方法。(1)儀器法：XN-9000 和 BC-6800 Plus均按科室SOP操作，嚴格執(zhí)行每日室內(nèi)質(zhì)控并確保結果在控。XN-9000和BC-6800 Plus模式選擇： CBC + DIFF 模式，儀器自動計數(shù)NRBC/100WBC，計算NRBC#，并報告校正后WBC。(2)顯微鏡計數(shù)法：所有收集的標本均使用Sysmex SP-10 全自動推片染片機推片染色完成后，由2名形態(tài)學檢驗經(jīng)驗豐富的檢驗人員使用顯微鏡計數(shù)瑞氏染色血片中200個白細胞時所見到的NRBC數(shù)量，換算成NRBC占有核細胞的百分比(即NRBC%)作為NRBC計數(shù)參考方法(白細胞數(shù)量少時可計數(shù)≤100 WBC)。(3)WBC校正：根據(jù)推片顯微鏡計數(shù)的NRBC%，校正兩個儀器的WBC。統(tǒng)計兩個儀器檢測的NRBC/100WBC、NRBC#、人工換算后的儀器NRBC%，以及WBC校正前、后的總數(shù)。 根據(jù)NRBC推片鏡檢結果高、中、低將其分為3組，觀察隨著NRBC結果的變化，XN-9000和BC-6800 Plus全自動血細胞分析儀WBC儀器校正、人工校正及NRBC結果的差異。

2 結 果

2.1兩種血細胞分析儀檢測NRBC的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值 以推片顯微鏡鏡檢計數(shù)法為NRBC檢測“金標準”，XN-9000全自動血細胞分析儀NRBC計數(shù)的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為93.75%、99.70%、83.33%、99.90%(表1)，BC-6800 Plus全自動血細胞分析儀NRBC計數(shù)的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為79.81%、99.92%、93.79%、99.68%(表2)。

表1 XN-9000檢測NRBC結果(n)

表2 BC-6800 Plus檢測NRBC結果(n)

2.2XN-9000檢測與推片鏡檢NRBC計數(shù)結果的相關性和一致性比較 以推片鏡檢計數(shù)NRBC陽性的208份標本分析XN-9000與推片鏡檢NRBC結果相關性，結果顯示呈正相關，XN-9000檢測值(Y)對推片鏡檢(X) NRBC的直線回歸方程為Y=0.659X+0.408，r=0.966，P<0.05，見圖1。Bland-Altman偏移散點圖分析顯示，XN-9000和推片鏡檢NRBC結果一致性界限95%CI為-6.94～9.69，偏差為1.36，偏差SD為4.24，3.37%(7/208)的點在一致性界限95%CI之外。隨著NRBC均值的增大，散點的分布呈現(xiàn)分散狀態(tài)，說明兩種方法當NRBC結果較大時差異較大，見圖2。

圖1 XN-9000與推片鏡檢計數(shù)NRBC相關性

圖2 XN-9000與推片鏡檢計數(shù)NRBC Bland-Altman偏移散點圖

2.3BC-6800 Plus與推片鏡檢計數(shù)NRBC結果相關性和一致性比較分析 以推片鏡檢計數(shù)NRBC陽性的208份標本分析BC-6800 Plus與推片鏡檢NRBC結果相關性，結果顯示呈正相關，BC-6800 Plus檢測值(Y)對推片鏡檢(X) NRBC的直線回歸方程為Y=0.711X+0.301，r=0.963，P<0.05，見圖3。Bland-Altman偏移散點圖分析顯示，BC-6800 Plus和推片鏡檢NRBC結果一致性界限95%CI為-6.40～8.81，偏差為1.21，偏差SD為3.88。隨著NRBC均值的增大，散點的分布呈現(xiàn)分散狀態(tài)，說明當NRBC較大時兩種方法檢測結果差異較大，見圖4。

圖3 BC-6800 Plus與推片鏡檢計數(shù)NRBC 相關性

圖4 BC-6800 Plus與推片鏡檢計數(shù)NRBC Bland-Altman偏移散點圖

2.4兩種血細胞分析儀檢測同一標本各參數(shù)結果比較 XN-9000和BC-6800 Plus全自動血細胞分析儀根據(jù)NRBC計數(shù)結果對WBC結果進行自動校正，觀察兩個系統(tǒng)WBC相關結果的差異。208份標本經(jīng)兩種血細胞分析儀同時檢測發(fā)現(xiàn)，WBC校正前、WBC儀器校正、WBC人工校正結果和NRBC結果差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 XN-9000 和 BC-6800 Plus兩個系統(tǒng)檢測各參數(shù)差異比較

2.5不同水平NRBC標本兩個系統(tǒng)各參數(shù)結果比較 當鏡檢NRBC<10%，WBC、WBC儀器校正結果、WBC人工校正結果、儀器NRBC計數(shù)在2個系統(tǒng)中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。當鏡檢NRBC>10%，WBC、WBC儀器校正結果在2個系統(tǒng)中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而WBC人工校正結果、儀器NRBC計數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 XN-9000 和 BC-6800 Plus兩個系統(tǒng)NRBC不同水平各參數(shù)差異比較

2.6NRBC儀器法與推片鏡檢結果比較 根據(jù)NRBC推片鏡檢結果與儀器計數(shù)結果差值大小，觀察WBC校正前、儀器校正、人工校正及NRBC各參數(shù)結果的差異。XN-9000全自動血細胞分析儀NRBC鏡檢小于儀器結果與鏡檢大于儀器結果比較，WBC、WBC儀器校正結果、WBC人工校正結果、NRBC計數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。BC-6800 Plus全自動血細胞分析儀NRBC鏡檢小于儀器結果與鏡檢大于儀器結果比較，WBC校正前、WBC儀器校正結果差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而WBC人工校正結果、NRBC計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 XN-9000 和 BC-6800 Plus兩個系統(tǒng)NRBC儀器與推片鏡檢結果比較

3 討 論

XN-9000使用Fluorocell WNR 試劑對白細胞、NRBC 的核酸和細胞器進行熒光染色，根據(jù)散射光和側(cè)向熒光強度對有核紅細胞進行區(qū)分，并可將NRBC計數(shù)作為血液分析常規(guī)參數(shù)進行報告[4-5]。BC-6800 Plus則采用熒光染色WNB通道來實現(xiàn)NRBC計數(shù)和WBC[6-7]。

由于NRBC在健康人群外周血中罕見，而且常常被誤認為是白細胞，導致WBC偏差[8]。根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)的建議，要根據(jù)質(zhì)量需求進行推片鏡檢，確保NRBC準確計數(shù)。通常情況下，儀器以NRBC/100WBC結果作為其報告方式，通過校正公式校正WBC：校正后的WBC=校正前WBC×100/(100+NRBC)[9]并計算NRBC絕對計數(shù)。本研究通過對13 156例患者血液標本篩選，推片鏡檢發(fā)現(xiàn)208份標本可見數(shù)量不等NRBC。以推片鏡檢計數(shù)為NRBC檢測“金標準”[10]，XN-9000 NRBC 計數(shù)的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為93.75%、99.70%、83.33%、99.90%。許誠笛等[11]研究顯示，XN-9000檢測NRBC的靈敏度為89.5%，特異度為99.6%，與本研究接近。王也飛等[12]的研究報道XN-1000血液分析儀檢測NRBC的靈敏度為60.0%，特異度為95.7%，與本研究差異較大，分析原因可能是其納入樣本量過少。BC-6800 Plus NRBC 計數(shù)的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為79.81%、99.92%、93.79%、99.68%。XN-9000與推片鏡檢NRBC結果呈正相關(r=0.966，P<0.05)，與朱建鋒等[13]研究結果相似。BC-6800 Plus與推片鏡檢NRBC結果也呈正相關(r=0.963，P<0.05)。結果提示兩個檢測系統(tǒng)均與推片鏡檢的結果相關性良好。

本研究中，Bland-Altman偏移散點圖分析顯示，XN-9000和推片鏡檢NRBC結果一致性界限95%CI為-6.94～9.69，BC-6800 Plus和推片鏡檢NRBC結果一致性界限95%CI為-6.40～8.81，隨著NRBC均值的增大，散點的分布呈現(xiàn)分散狀態(tài)，說明當NRBC數(shù)量變大以后，儀器計數(shù)與推片鏡檢結果差異較大，需要通過手工鏡檢對NRBC進行人工校正，確保檢測結果準確可靠[14]。

推片鏡檢陽性的208份標本經(jīng)XN-9000 和Mindray BC-6800 Plus血細胞分析儀同時檢測，WBC、WBC儀器校正、WBC人工校正結果和NRBC結果差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明兩個不同系統(tǒng)各參數(shù)總體之間檢測能力相當，消除不同系統(tǒng)之間的差異對后續(xù)研究結果的影響。本研究進一步探討了不同水平NRBC計數(shù)時兩個檢測系統(tǒng)的差別，結果顯示當鏡檢NRBC<10%，WBC、WBC儀器校正結果，WBC人工校正結果，儀器NRBC計數(shù)在兩個系統(tǒng)中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明當NRBC較少時，外周血液中的NRBC數(shù)量對WBC儀器計數(shù)影響很小。當鏡檢NRBC>10%，WBC、WBC儀器校正結果在兩個系統(tǒng)中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而WBC人工校正結果、儀器NRBC計數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明當NRBC計數(shù)較高時，外周血中的NRBC數(shù)量對WBC儀器計數(shù)影響較大，需要人工推片鏡檢進行確認。

本研究根據(jù)NRBC推片鏡檢結果與儀器計數(shù)結果差值大小，觀察WBC校正前、儀器校正、人工校正及NRBC各參數(shù)結果的差異。結果顯示，XN-9000 NRBC鏡檢小于儀器結果與鏡檢大于儀器結果比較，WBC、WBC儀器校正結果、WBC人工校正結果、NRBC計數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明在WBC和NRBC低值時，儀器計數(shù)明顯高于人工計數(shù)，可能與儀器計數(shù)細胞數(shù)量多，儀器法的靈敏度相對較高，人工推片鏡檢計數(shù)細胞數(shù)量少有關。同時，由于血涂片上NRBC分布區(qū)域的差異，導致顯微鏡檢查結果容易偏差。另外，當外周血液中出現(xiàn)小淋巴細胞、固縮細胞等，或者其他非特異的因素導致儀器出現(xiàn)假性升高的結果。當WBC和NRBC高值時，人工計數(shù)明顯高于儀器計數(shù)，分析原因系增高的NRBC主要為晚幼紅細胞和較多的中幼紅細胞，而儀器法將中幼紅細胞誤分類為淋巴細胞[15]。顧梅秀等[2]研究認為，XN-9000鏡檢法普遍低于儀器法結果。而本研究結果顯示，當NRBC低值時鏡檢小于儀器結果，當NRBC高值時鏡檢大于儀器結果。BC-6800 Plus全自動血細胞分析儀NRBC鏡檢小于儀器結果與鏡檢大于儀器結果比較，WBC、WBC儀器校正結果差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。BC-6800 Plus計數(shù)NRBC鏡檢大于儀器結果高于鏡檢小于儀器結果，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示無論NRBC計數(shù)高低，人工鏡檢與BC-6800 Plus識別能力相當。

4 結 論

自動化血細胞分析儀快速檢測NRBC能校正其對白細胞計數(shù)的干擾，同時對臨床疾病的鑒別診斷有重要的指導意義，但是當體內(nèi)NRBC數(shù)量偏高時，儀器的識別和自動校正與推片鏡檢結果一致性差，需要通過提高NRBC識別能力確保結果準確、可靠。