lncRNA MIR31HG對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響及作用機(jī)制研究

彭書(shū)旺，陳露陽(yáng)

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 胃腸甲狀腺血管外科，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，居惡性腫瘤發(fā)病率的第7位，在女性中居第4位，是增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤之一[1-3]。甲狀腺癌術(shù)后預(yù)后較好，但仍有約30%患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，因此探索甲狀腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的機(jī)制具有重要意義[4-5]。MIR31HG 在不同癌癥中作用不同，YANG 等[6]發(fā)現(xiàn)MIR31HG 在胰腺導(dǎo)管癌中發(fā)揮促癌作用。而YAN 等[7]發(fā)現(xiàn)MIR31HG 在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抑癌作用。目前尚未有研究報(bào)道MIR31HG在甲狀腺癌中的作用。本研究擬通過(guò)臨床資料分析及體外實(shí)驗(yàn)研究MIR31HG 在甲狀腺癌中的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

選取2018年8月—2019年4月在湖南省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院行甲狀腺癌根治術(shù)的48例患者的新鮮癌組織及癌旁組織標(biāo)本，男女各24例。人永生化正常甲狀腺細(xì)胞系Nthy-ori 3-1、人甲狀腺乳頭狀癌（papillary carcinoma of thyroid,PTC）細(xì)胞系TPC-1、K1及BCPAP 由湖南省中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)，Trizol RNA 提取試劑、RNA 保護(hù)液及轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000 均購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司，RNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司，qRT-PCR 試劑盒購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司，BCA 法蛋白濃度檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，PTEN 抗體（ab32199）購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，pan-Akt 抗體（#4685）、p-Akt（Ser473）抗體（#4060）購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司，內(nèi)參GAPDH（10494-1-AP）抗體、鼠二抗及兔二抗購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司，RPMI 1640 無(wú)血清培養(yǎng)基及FBS 購(gòu)自以色列Biological Industries公司，lncRNA MIR31HG 小干擾RNA 序列及對(duì)照序列由廣州銳博生物技術(shù)有限公司合成，lncRNA MIR31HG 引物及內(nèi)參Actin 引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 數(shù)據(jù)庫(kù)分析筆者利用GEPIA 在線數(shù)據(jù)庫(kù)（http://gepia.cancer-pku.cn）分析lncRNA MIR31HG 在各種癌癥及甲狀腺癌中的表達(dá)。其數(shù)據(jù)主要來(lái)源于TCGA和GTEx project數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2.2 RNA提取選取患者癌組織及癌旁組織標(biāo)本，并剪成1 mm×1 mm×1 mm 小塊放入RNA 保護(hù)液中防止RNA 降解，標(biāo)本立即放入液氮冷凍保存，選取患者組織標(biāo)本提取RNA，提取前先液氮預(yù)冷研缽，在研缽中將組織磨成粉末，加入Trizol RNA 提取試劑裂解細(xì)胞，參照Trizol 說(shuō)明書(shū)分步提取組織RNA，并測(cè)定RNA濃度，選取OD260/OD280 在1.9～2.1的RNA進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，保證RNA的完整性，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將RNA 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，細(xì)胞樣本RNA提取方法同上，提取的RNA 置于-80℃保存。

1.2.3 qRT-PCR采用常規(guī)Trizol 法分別提取癌組織、癌旁組織樣本和Nthy-ori 3-1、TPC-1、K1及BCPAP 細(xì)胞系總RNA，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，參照qRT-PCR 試劑盒說(shuō)明書(shū)采用qPCR 二步法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性10 s，60℃退火及延伸30 s，共計(jì)40個(gè)循環(huán)。利用β-actin作為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算lncRNA MIR31HG 在不同樣本中的相對(duì)表達(dá)量。lncRNA MIR31HG 正向引物：5'-TATATCAGCATCCACAACCT-3'，長(zhǎng)度20 bp；反向引物：5'-GCCAACCAACAAGCATTA-3'，長(zhǎng)度18 bp；β-actin正向引物：5'-TGCGTGACA TTAAGGAGAA-3'，長(zhǎng)度19 bp；反向引物：5'-AAGGAA GGCTGGAAGAGT-3'，長(zhǎng)度18 bp。將癌旁組織樣本或Nthy-ori 3-1 細(xì)胞系相對(duì)表達(dá)量設(shè)為1，計(jì)算癌組織、TPC-1、K1及BCPAP 中l(wèi)ncRNAMIR31HG表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)將Nthy-ori 3-1、TPC-1、K1及BCPAP 細(xì)胞系培養(yǎng)于含10% FBS、1% 100μg/ml 青霉素及100μg/ml 鏈霉素的RPMI 1640完全培養(yǎng)基中，置于37℃、5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組將TPC-1 細(xì)胞胰酶消化并接種于6孔板內(nèi)，待第2天細(xì)胞融合度為70%～90%，參照Lipofectamine 2000 Transfecon Reagent 說(shuō)明書(shū)，轉(zhuǎn)染3條lncRNA MIR31HG siRNA作為實(shí)驗(yàn)組，分別為siRNA-1、siRNA-2及siRNA-3組。將作為對(duì)照的siRNA-NC組轉(zhuǎn)染24 h后，提取細(xì)胞RNA 樣本，qRT-PCR 驗(yàn)證lncRNA MIR31HG的抑制效率，保證lncRNA MIR31HG 抑制率＞60%，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。lncRNA MIR31HG siRNA-1（序列：5'-UUCAACUUCUCACACAAAGCG-3'，屏蔽序列位置為751～773，共22個(gè)核苷酸）、siRNA-2（序列：5'-UCAACUUCUCACACAAAGCGC-3'，屏蔽序列位置為784～806，共22個(gè)核苷酸）、siRNA-3（序列：5'-AAAAGCAUCCUGAUUUCUCAA-3'，屏蔽序列位置為1 032～1 054，共22個(gè)核苷酸）及相應(yīng)陰性對(duì)照序列3條siRNA 均可以靶向lncRNA MIR31HG的4個(gè)轉(zhuǎn)錄本（Accession Number為NR_027054.2、NR_152877.1、NR_152878.1和NR_152879.1）。

1.2.6 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖能力TPC-1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染lncRNA MIR31HG 小干擾RNA siRNA-1、siRNA-3及陰性對(duì)照序列24 h后，收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)組及siRNA-NC組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，取100μl 接種于96孔板，保證每孔約2 000個(gè)細(xì)胞（5×105個(gè)/ml），分別于培養(yǎng)0、24、48、72及96 h后更換培養(yǎng)基，每孔100μl，向每孔加入10μl MTT 工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，小心吸掉上清，每孔加入100μl 二甲基亞砜37℃孵育10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在570 nm 波長(zhǎng)處利用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔OD值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值并繪制增殖曲線。

1.2.7 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力預(yù)先用Marker筆在6孔板背后每隔0.5 cm 劃一道橫線。培養(yǎng)各組細(xì)胞至對(duì)數(shù)期，按每孔5×105個(gè)/ml 接種入6孔板，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)夜，待第2天細(xì)胞剛好鋪滿，用20μl 槍頭抵住直尺，垂直于橫線進(jìn)行劃痕，PBS洗2次，分別加入無(wú)血清培養(yǎng)基，于100倍鏡下拍照，記錄0 h 劃痕位置及寬度，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，在100倍鏡下選取與0 h 同一位置視野進(jìn)行拍照，測(cè)定細(xì)胞遷移距離，計(jì)算劃痕愈合率，計(jì)算公式：愈合率=（0 h劃痕寬度-24 h 劃痕寬度）/（0 h 劃痕寬度），實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.2.8 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力將生長(zhǎng)于對(duì)數(shù)期的實(shí)驗(yàn)組及siRNA-NC組細(xì)胞用胰酶消化并吹打均勻，1 000 r/min 離心3 min，用不含血清的RPMI 1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)并將細(xì)胞密度調(diào)整至2×104個(gè)/ml，取200μl 細(xì)胞懸液接種于Transwell小室上室，下室加入含10% FBS的完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后用PBS輕洗2遍，甲醇固定細(xì)胞，用棉簽小心擦拭掉上室細(xì)胞，0.1%結(jié)晶紫溶液染色，染色30 min后顯微鏡下100倍視野觀察，分別取左上、左下、右上、右下及中間共5個(gè)視野，計(jì)算穿膜細(xì)胞數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.2.9 Western blotting提取siRNA-1組、siRNA-3組及siRNA-NC組細(xì)胞總RNA及蛋白，用qRT-PCR反應(yīng)驗(yàn)證PTEN及Akt的表達(dá)，重復(fù)3次，每次將siRNA-NC組表達(dá)量設(shè)置為1，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組PTEN及Akt相對(duì)表達(dá)量。Western blotting檢測(cè)蛋白相對(duì)表達(dá)量，BCA 法測(cè)定蛋白濃度，各取40 mg 蛋白加入上樣緩沖液，100℃煮5 min 變性，10% SDS-PAGE 電泳膠上樣，電泳條件：濃縮膠80 V至蛋白Marker分離后，加大電壓到120 V至溴酚藍(lán)跑至膠底；轉(zhuǎn)膜條件：恒壓100 V 轉(zhuǎn)90 min，含5%脫脂奶粉的TBST 工作液室溫封閉1 h，加入一抗，4℃過(guò)夜，TBST洗3遍，5 min/次，二抗室溫孵育1 h，ECL液顯影，并計(jì)算灰度值，每次將siRNA-NC組表達(dá)量設(shè)置為1，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組PTEN、Akt及p-Akt相對(duì)表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，比較用t檢驗(yàn)、單因素方差分析或重量復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同癌組織及癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較

GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)在線分析顯示，宮頸鱗狀細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、頭頸部鱗癌、胰腺癌、甲狀腺癌、膀胱癌及前列腺癌組織與癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），宮頸鱗狀細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、頭頸部鱗癌、胰腺癌及甲狀腺癌組織較癌旁組織高，膀胱癌、前列腺癌組織較癌旁組織低。見(jiàn)表1和圖1。

表1 不同癌組織及癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較 （n=48，±s）

表1 不同癌組織及癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較 （n=48，±s）

類型 宮頸鱗狀細(xì)胞癌 乳頭狀腎細(xì)胞癌 頭頸部鱗癌 胰腺癌 甲狀腺癌 膀胱癌 前列腺癌癌組織 1.433±0.541 1.592±0.644 2.883±0.963 0.997±0.523 2.010±0.880 1.024±0.248 0.081±0.042癌旁組織 0.084±0.036 0.294±0.128 1.314±0.514 0.124±0.051 0.551±0.282 1.875±0.427 0.364±0.127 t值 8.976 15.530 10.670 21.730 29.450 10.424 27.011 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

圖1 不同癌組織及癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較 （n=48，±s）

2.2 PTC組織與癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較

PTC組織與癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量分別為（6.650±0.700）和（2.515±0.221），經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.635，P=0.000），PTC組織較癌旁組織高（見(jiàn)圖2）。以lncRNA MIR31HG 中位表達(dá)量為界，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，各24例，高表達(dá)組與低表達(dá)組患者腫瘤大小、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表2）。

圖2 PTC組織與癌旁組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較

表2 lncRNA MIR31HG 在PTC組織與癌旁組織的相對(duì)表達(dá)量比較 （n=24）

2.3 不同PTC細(xì)胞系lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較

將甲狀腺正常細(xì)胞系Nthy-ori 3-1的lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量設(shè)為（1.00±0.00），PTC細(xì)胞系TPC-1、K1及BCPAP的lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量分別為（2.43±0.08）、（1.74±0.05）和（4.38±0.11），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=431.300，P=0.000），TPC-1、K1及BCPAP較Nthy-ori 3-1高，且TPC-1相對(duì)表達(dá)量最高。見(jiàn)圖3。

圖3 不同PTC細(xì)胞系lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

2.4 lncRNA MIR31HG基因沉默對(duì)TPC-1 細(xì)胞增殖能力的影響

2.4.1 沉默效率驗(yàn)證將siRNA-NC組lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量設(shè)為（1.000±0.000），siRNA-1組、siRNA-2組及siRNA-3組分別為（0.320±0.020）、（0.540±0.021）和（0.280±0.015），經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=330.300，P=0.000），實(shí)驗(yàn)組均較siRNA-NC組下降，其中siRNA-1組與siRNA-3組沉默效率均＞60%（見(jiàn)圖4），因此選取siRNA-1與siRNA-3 小干擾RNA 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

2.4.2 細(xì)胞活力驗(yàn)證siRNA-NC組、siRNA-1組、siRNA-3組0、24、48、72及96 h的OD值比較，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)的OD值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=14 192.911，P=0.000）；②各組OD值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3 661.345，P=0.000）；③各組OD值變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2 374.012，P=0.000）。lncRNA MIR31HG 沉默可明顯降低TPC-1的增殖能力。見(jiàn)表3和圖5。

2.5 lncRNA MIR31HG基因沉默對(duì)TPC-1 細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響

圖4 各組lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

siRNA-NC組、siRNA-1組及siRNA-3組24 h 劃痕愈合率分別為（74.7±0.91）%、（36.1±1.13）%和（20.53±1.60）%，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=442.700，P=0.000）；siRNA-1組與siRNA-3組較siRNA-NC組降低，表明lncRNA MIR31HG 沉默可明顯降低TPC-1 細(xì)胞的遷移能力。見(jiàn)圖6、7。

siRNA-NC組、siRNA-1組及siRNA-3組侵襲至Transwell 小室下室的細(xì)胞數(shù)分別為（423.00±11.93）、（240.00±12.10）和（224.00±9.45）個(gè)，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=97.200，P=0.000）；siRNA-1組、siRNA-3組較siRNA-NC組降低，表明lncRNA MIR31HG沉默可明顯抑制TPC-1 細(xì)胞的侵襲能力。見(jiàn)圖8、9。

表3 各組不同時(shí)間點(diǎn)OD值比較 （±s）

表3 各組不同時(shí)間點(diǎn)OD值比較 （±s）

組別 0 h 24 h 48 h 72 h 96 h siRNA-NC組 0.205±0.003 0.355±0.033 0.643±0.032 1.251±0.033 2.176±0.055 siRNA-1組 0.206±0.005 0.275±0.003 0.453±0.006 0.791±0.005 1.226±0.015 siRNA-3組 0.206±0.002 0.266±0.004 0.404±0.009 0.686±0.007 1.128±0.015

圖5 各組不同時(shí)間點(diǎn)OD值變化趨勢(shì) （±s）

2.6 lncRNA MIR31HG基因沉默對(duì)Akt信號(hào)通路的影響

各組PTEN mRNA、PTEN蛋白及p-Akt蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；siRNA-1組、siRNA-3組PTEN mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量較siRNA-NC組升高，且siRNA-3組最高；siRNA-1組、siRNA-3組p-Akt 蛋白較siRNA-NC組降低，且siRNA-3組最低。各組Akt mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）表明lncRNA MIR31HG 沉默可明顯升高PTEN基因的表達(dá)，從而抑制Akt的磷酸化。見(jiàn)表4和圖10。

圖6 各組細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （×100）

圖7 各組細(xì)胞24 h 劃痕愈合率比較 （±s）

圖8 各組侵襲細(xì)胞數(shù)比較 （±s）

圖9 各組Transwell 小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （×100）

表4 各組PTEN、Akt及p-Akt mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

表4 各組PTEN、Akt及p-Akt mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

注：①與siRNA-NC組比較，P＜0.05；②與siRNA-1組比較，P＜0.05。

組別 PTEN mRNA PTEN 蛋白 Akt mRNA Akt 蛋白 p-Akt 蛋白siRNA-NC組 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 siRNA-1組 2.107±0.047① 2.247±0.035① 1.093±0.038 1.077±0.019 0.510±0.017①siRNA-3組 2.537±0.136①② 2.683±0.081①② 1.017±0.034 1.083±0.035 0.413±0.019①②F值 91.290 295.200 2.909 4.049 460.600 P值 0.000 0.000 0.131 0.077 0.000

圖10 lncRNA MIR31HG基因沉默對(duì)Akt信號(hào)通路的影響

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)多種lncRNA的異常表達(dá)與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[8-10]。雖然lncRNA 沒(méi)有開(kāi)放閱讀框，不能編碼蛋白，但其通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)、翻譯后修飾、蛋白穩(wěn)定性及活性等方式在細(xì)胞功能的調(diào)控上發(fā)揮重要作用。越來(lái)越多的研究表明lncRNA的異常表達(dá)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，lncRNA 通過(guò)吸附miRNA 形成ceRNA，從而調(diào)控基因的表達(dá)是其發(fā)揮作用的主要機(jī)制之一[11-12]。

lncRNA MIR31HG是miR-31的宿主基因，在多種腫瘤中表達(dá)異常，有研究發(fā)現(xiàn)lncRNA MIR31HG 在肺癌中高表達(dá)，并與患者的不良預(yù)后密切相關(guān)[13]。其通過(guò)與miRNA-214 結(jié)合，調(diào)控下游基因表達(dá)，從而調(diào)控非小細(xì)胞肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移[14]。ZHENG 等[15]發(fā)現(xiàn)lncRNA MIR31HG還可以通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)調(diào)控肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移。WANG 等[16]發(fā)現(xiàn)lncRNA MIR31HG 可以通過(guò)激活EGFR/PI3K/Akt信號(hào)通路增加非小細(xì)胞肺癌對(duì)吉非替尼的耐藥性。lncRNA MIR31HG的高表達(dá)在胰腺癌、口腔癌等癌癥中同樣發(fā)揮了促進(jìn)腫瘤增殖、侵襲及遷移的作用[6、17]。然而也有研究發(fā)現(xiàn)在肝癌、胃癌及食管鱗狀細(xì)胞癌中，lncRNA MIR31HG與腫瘤的臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)，其表達(dá)下調(diào)可抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[7，18-19]。lncRNA MIR31HG 在PTC的作用及機(jī)制尚未有報(bào)道。

本研究通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)分析TCGA 病例資料，結(jié)合筆者收集的病例資料發(fā)現(xiàn)，PTC組織lncRNA MIR31HG相對(duì)表達(dá)量較癌旁組織升高，其表達(dá)水平與患者腫瘤大小、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況關(guān)系密切。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中筆者發(fā)現(xiàn)，lncRNA MIR31HG的沉默抑制了TPC-1 細(xì)胞系的增殖及遷移、侵襲能力。

為進(jìn)一步探究lncRNA MIR31HG在PTC發(fā)生、發(fā)展中的作用及機(jī)制，筆者通過(guò)文獻(xiàn)閱讀發(fā)現(xiàn)lncRNA MIR31HG可以激活A(yù)kt 通路[19]。筆者通過(guò)在線數(shù)據(jù)庫(kù)miRDB（www.mirdb.org）及miRBase（www.mirbase.org）等網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)miRNA-575及miRNA-214可以靶向PTEN基因的3'UTR，調(diào)控PTEN基因的表達(dá)。PTEN基因作為抑癌基因，在Akt 去磷酸化、抑制Akt活化及Akt下游通路的激活方面具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)lncRNA MIR31HG 沉默可明顯高PTEN基因的表達(dá)，但對(duì)Akt表達(dá)無(wú)明顯影響，然而沉默lncRNA MIR31HG后p-Akt的表達(dá)明顯下降，表明lncRNA MIR31HG 沉默可能靶向調(diào)控PTEN的表達(dá)，從而抑制Akt 通路的活化。

綜上所述，lncRNA MIR31HG在PTC組織及細(xì)胞系中高表達(dá)，與患者腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，下調(diào)lncRNA MIR31HG可以抑制TPC-1細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力，其機(jī)制可能與lncRNA MIR31HG 通過(guò)吸附miRNA 形成ceRNA 調(diào)控PTEN表達(dá)，從而調(diào)控Akt 通路的活化相關(guān)。lncRNA MIR31HG 可作為PTC 潛在的預(yù)后標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)。