枸杞的組織培養(yǎng)技術

陳淑華　劉冬梅　冷志巍　葉雅玲

本文對寧杞1號進行了組織培養(yǎng)實驗，實驗結果顯示，適合枸杞的初代分生培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1 +IAA0.5苗的質(zhì)量最好;用MS+6-BA0.1+NAA0.01+IAA0.2繼代效果最好;生根培養(yǎng)基 1/2MS+NAA0.01+IAA0.3為最佳，生根率達到90%以上。

枸杞（lycuon? chinense）又名枸杞子、紅果子，茄科多年生落葉灌木，高0.8-2米，多分枝。我國各地均有栽培，主要分布于甘肅、青海等地。果實甘甜，可直接食用性滋補潤肺。近年來枸杞又發(fā)展為保健飲料和食品的加工原料，枸杞的需求量日益增加。本試驗采用組織培養(yǎng)擴繁，具有原材料節(jié)省、遺傳性穩(wěn)定、繁殖系數(shù)高等優(yōu)點。

一、試驗材料及方法

1、試驗試材

采用結實量大、色澤鮮紅、果肉口感好的枸杞優(yōu)株樹上的嫩莖尖作外植體。

2、配置培養(yǎng)基

試驗采用改良的MS配方為基本培養(yǎng)基，并附加植物激素（8種對比）配好后裝瓶121℃～126℃條件下滅菌15㏕。

3、外植體滅菌與接種

將外植體浸入吐溫浸泡15～25min，自來水沖洗至無泡，移至超凈臺中切成2～3㎝小段，浸入75%酒精3～5s，再用0.1%Hgcl2液浸泡4～10min，并不斷攪動，無菌水清洗4～5次，最后將小段兩端各剪掉一部分，用無菌濾紙吸干表面水分接種，每瓶一塊外植體。

4、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

采用改良的MS﹙大量元素為原來的3/4﹚，誘導叢生芽培養(yǎng)基含蔗糖2.8%，生根培養(yǎng)基含蔗糖1.5%，所有培養(yǎng)基中均含瓊脂0.5% PH6.4。高壓滅菌30min，培養(yǎng)溫度25～28℃，光照周期16/8h，光照強度1500～1600lux，培養(yǎng)室濕度55%～70%。

二、結果和分析

1、不同激素組合對芽誘導的影響

將試材接種于3/4MS培養(yǎng)基，附加蔗糖28mg/L，如表1所示激素配比，5d左右分化愈傷，1周后外植體開始分化。

2、不同激素組合對寧杞1號芽分化階段的影響

將叢生芽在切割成小試材接種于下列幾種培養(yǎng)基中，試驗在不同濃度配比外加激素NAA、與 6-BA時，對寧杞1號繼代增殖的影響。

在未染菌的試材中選出的粗壯的單芽切下，轉(zhuǎn)接到以上8種培養(yǎng)基中，每瓶2株，每種組合接10瓶。

三、結論與討論

1、初代培養(yǎng)

由表1可以看出，在不同的激素組合中，MS+6-BA0.3+IAA0.5的啟動天數(shù)最短，為5d但初代分生玻璃化現(xiàn)象嚴重，苗無法繼續(xù)使用，放棄;6-BA0.3+NAA0.04和6-BA0.3+IAA0.3兩種激素組合啟動天數(shù)為6，但都有玻璃化現(xiàn)象伴隨，苗無法繼代使用，放棄;綜合8種激素組合對比，6-BA0.1+IAA0.5愈傷組織較多，叢生芽粗壯，為最佳的初代分生培養(yǎng)基。

2、繼代增殖

由表2的結果分析得出，枸杞繼代培養(yǎng)中，當6-BA的濃度在0.1mg/L、0.3mg/L同一濃度水平時隨著NAA濃度的增加，叢生芽增加，愈傷組織增多，但NAA達到0.05以后，出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象;當6-BA濃度在0.3mg/L以下時，NAA濃度越大，叢生芽的數(shù)量越多，其中4號培養(yǎng)基中的苗高度小，側芽分生更少;實驗表明，用MS+6-BA0.1+NAA0.01+IAA0.2培養(yǎng)基比較適合枸杞的繼代培養(yǎng)。

3、生根培養(yǎng)

如表所示，用3號培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)只需10天，而且根粗壯，生根率達到90%，2號培養(yǎng)基雖8d出根，但根細弱;而1號培養(yǎng)基15天出根，生根率為75%～85%，綜合試驗，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.01+IAA0.3為最佳培養(yǎng)基。

綜上所述，寧杞1號初代分生培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1+IAA0.5分生率最高，苗的質(zhì)量最好;用MS+6-BA0.1+NAA0.01+IAA0.2繼代效果最好，生根培養(yǎng)基中1/2MS+NAA0.01+IAA0.3培養(yǎng)基為最佳，生根率達到90%以上。

（作者單位：137000 吉林省白城市林業(yè)科學研究院）