不同月份晉北地區(qū)沙棘葉總黃酮含量比較分析

劉 榮,翟貴喜,賈艷紅

(1.山西省岢嵐縣王家岔鄉(xiāng)綜合服務(wù)中心，山西 岢嵐 036300；2.山西山陽生物藥業(yè)有限公司，山西 岢嵐 036300；3.山西省岢嵐縣林業(yè)局，山西 岢嵐 036300)

沙棘(HippophaerhamnoidesL.)胡頹子科沙棘屬植物，又名醋溜、酸刺，在西藏被稱作“達(dá)日布”。在我國主要分布于西北、華北、東北及西南等地區(qū)，是我國三北防護(hù)林的先鋒樹種，屬藥食同源植物。沙棘富含多酚類化合物、維生素、脂類化合物、萜類、甾體類化合物、多糖類化合物、蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸類化合物等活性成分。而多酚類化合物中，又以黃酮類化合物為主，主要成分是山奈酚、槲皮素、異鼠李素和楊梅素4種苷元及其苷類。研究表明，沙棘黃酮的藥理作用包括抗血栓形成、降血脂、抗動脈粥樣硬化、降血壓、降血糖、增強(qiáng)免疫功能、抗腫瘤、抗菌、抗輻射等。沙棘黃酮廣泛存在于沙棘的果實(shí)、籽和沙棘葉中，特別是沙棘葉中黃酮類遠(yuǎn)大于其它部位。山西是我國沙棘資源最豐富的省區(qū)之一，野生沙棘林總面積40×104km2以上，以晉北沙棘為主。筆者對不同月份晉北沙棘葉總黃酮含量進(jìn)行了比較分析，以期為深入研究及科學(xué)有效利用沙棘資源提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 試驗(yàn)材料

2019年5月至9月在山西省忻州市岢嵐縣神堂坪鄉(xiāng)野生沙棘林采集沙棘葉，共采8批(5月中旬、5月下旬、6月中旬、6月下旬、7月中旬、7月下旬、8月中旬、9月中旬)。70 ℃干燥后粉碎過40目篩置于干燥器中備用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自中國食品藥品檢定研究院(批號100080-201610)。

無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等試劑購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 試驗(yàn)儀器

723N可見分光光度計，上海佑科儀器儀表有限公司；FA1004N電子分析天平，上海箐海儀器有限公司；WP-UP-LH-10型實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)，四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司；HWS-24電熱恒溫水浴鍋，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上?，槴\實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；還有粉碎機(jī)、干燥器、容量瓶(50 mL，10 mL)、錐形瓶、移液管、比色管(10 mL，25 mL)、燒杯、玻璃棒等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取120 ℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品40 mg，用70%乙醇溶解并定容至100 mL，制得儲備液，濃度為0.4 mg/mL.分別吸取0.0 mL,0.2 mL,0.4 mL,0.6 mL,0.8 mL,1.0 mL,1.2 mL,1.4 mL標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL比色管中，加5%亞硝酸鈉1.0 mL，混勻放置6 min.加入10%硝酸鋁1.0 mL，混勻放置6 min.加入4%氫氧化鈉4 mL，再加入70%乙醇水溶液定容至刻度，搖勻，放置15 min.以相應(yīng)的試劑為空白對照，在確定最大波長510 nm處測定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值(亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法)。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2 樣品處理

分別取8份干燥粉碎后的沙棘葉粉各10.000 g于8個250 mL具塞錐形瓶中，瓶子編號1～8.加入95%乙醇150 mL，在70 ℃水浴中加熱提取45 min，冷卻至室溫，過濾，錐形瓶、濾渣以及濾紙用少量95%的乙醇洗滌至濾液無色。最后用95%的乙醇定容到100 mL容量瓶中，再取5 mL定容到50 mL容量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 樣品測定

取供試品溶液3 mL于25 mL比色管中，分別加5%亞硝酸鈉1.0 mL，混勻放置6 min.加入10%硝酸鋁1.0 mL，混勻放置6 min.再加入4%氫氧化鈉4 mL，70%乙醇水溶液定容至刻度，搖勻，放置15 min,在510 nm下測定吸光度。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線公式分別計算出各供試品溶液的濃度，每個樣品重復(fù)測定3次。

式中：ω——總黃酮含量，%；

c——樣液中總黃酮濃度，mg/mL；

V——樣液體積，mL；

n——稀釋倍數(shù);

m——沙棘葉粉質(zhì)量，g.

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

測定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，結(jié)果見表1.根據(jù)表1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1.

由圖1可知，蘆丁在0.008 mg/mL～0.056 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=10.146 0x+0.007 9(R2=0.999 2).

表1 蘆丁濃度與吸光度關(guān)系

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 不同采摘期沙棘葉總黃酮含量比較

不同采摘期沙棘葉總黃酮含量測定結(jié)果，見第28頁表2.并對測定結(jié)果進(jìn)行比較，見圖2.

圖2 不同時期沙棘葉總黃酮含量變化

表2 不同采摘期沙棘葉總黃酮含量測定

從表2和圖2可知，晉北沙棘在不同月份沙棘葉總黃酮含量有明顯差異。5月中下旬到6月中旬呈現(xiàn)增長趨勢，6月下旬略有下降，7月下旬開始驟降，9月中旬達(dá)到最低。結(jié)合植物生長環(huán)境條件變化分析，總黃酮是植物生長代謝過程中的代謝產(chǎn)物，受外界環(huán)境光照、水分等影響，以及內(nèi)部植物發(fā)育階段酶的調(diào)節(jié)和遺傳機(jī)制的控制，不同發(fā)育階段總黃酮含量不同。5月份是沙棘葉生長旺盛階段，總黃酮含量增長迅速。6月中旬沙棘葉初步長成，總黃酮合成量達(dá)到最高，之后生長發(fā)育慢慢變緩，總黃酮含量開始下降。到9月份時生長發(fā)育基本停止，總黃酮合成量達(dá)到最低。

4 結(jié)論

筆者以岢嵐縣沙棘葉為試材，對不同月份以及旬期的沙棘葉總黃酮含量做了測定及對比分析，發(fā)現(xiàn)晉北沙棘葉總黃酮含量在6月中旬最高?？紤]6月下旬沙棘葉已基本生長成型，不影響后期沙棘果結(jié)果。因此，建議想要充分利用沙棘葉資源，采摘期最好選在6月中下旬。