三唑類抗真菌藥物泊沙康唑注射液無(wú)菌檢查方法研究

陳青連，姚 振，萬(wàn) 超

（杭州澳亞生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310018）

三唑類抗真菌藥物（如伏立康唑和泊沙康唑）抗真菌譜廣，抗菌效力強(qiáng)［1］，對(duì)念珠菌屬（包括耐氟康唑的克柔念珠菌、光滑念珠菌和白念珠菌耐藥株）具有抗菌作用，對(duì)所有檢測(cè)的曲菌屬真菌均有殺菌作用［2］，屬注射劑類制劑。為確保用藥安全，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定應(yīng)作無(wú)菌檢查，但由于此類藥物抗菌活性很強(qiáng)，因此，如何消除其抑菌性，使檢驗(yàn)順利進(jìn)行，建立方法極重要，也較困難［3］。2015 年版《中國(guó)藥典（四部）》對(duì)無(wú)菌產(chǎn)品控制與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)趨于一致，實(shí)現(xiàn)了與國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）的要求統(tǒng)一協(xié)調(diào)［4］。同時(shí)，2015 年版《中國(guó)藥典》編制大綱強(qiáng)調(diào)，要加強(qiáng)藥品無(wú)菌檢查方法的建立與驗(yàn)證方面的標(biāo)準(zhǔn)研究工作［5］。本研究中對(duì)抗真菌藥物制劑泊沙康唑注射液進(jìn)行了試驗(yàn)研究，主要針對(duì)沖洗液、過(guò)濾膜材質(zhì)、流速、沖洗量、陽(yáng)性對(duì)照菌的選擇及加入順序等全過(guò)程進(jìn)行考察，建立了三唑類抗真菌藥泊沙康唑注射液的無(wú)菌檢查方法，并進(jìn)行了方法適用性驗(yàn)證?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ClassⅡType AIB3 型生化培養(yǎng)箱（廣東泰宏群科學(xué)儀器股份有限公司）；DGB330/DGB220 型一次性全封閉集菌培養(yǎng)器（浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司）；HTY-2000B 型智能集菌儀（杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司）；KB115 E3-1 型低溫生化培養(yǎng)箱（德國(guó)賓得公司），GSP-9270MBE 型隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；XG1.DTE-0.6 型脈動(dòng)真空干燥滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）；尼龍膜（上海興亞凈化材料廠）；混合纖維素脂膜（上海興亞凈化材料廠）；PVDF 膜（上海半島實(shí)業(yè)有限公司凈化器材廠）。

1.2 試藥

泊沙康唑注射液（杭州澳亞生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為19042311，19042511，19042611，規(guī)格為每支16.7 mL ∶300 mg）；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（批號(hào)為190429），0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80，pH 3.8，批號(hào)為190305），均為杭州澳亞生物技術(shù)有限公司自制；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為20190328）；無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)為2A18090803）。

1.3 菌株

金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus［CMCC（B）26 003］，銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa［CMCC（B）10 104］，大腸埃希菌Escherichia coli［CMCC（B）44 102］，枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis［CMCC（B）63 501］，生孢梭菌Clostridium sporogenes［CMCC（B）64 941］，白色念珠菌Candida albicans［CMCC（F）98 001］，黑曲霉Aspergillus niger［CMCC（F）98 003］，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所菌種室，按2015 年版《中國(guó)藥典（四部）》附錄要求將以上7 種驗(yàn)證菌配制成每1 mL 含菌數(shù)小于100 cfu 的菌懸液［6］。

2 方法與結(jié)果

2.1 菌液制備和培養(yǎng)基檢查

2.1.1 菌液制備

分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌和大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30～35 ℃培養(yǎng)18～24 h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25 ℃培養(yǎng)24～48 h。上述培養(yǎng)物用無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液制成每1 mL 含菌數(shù)小于100 cfu的菌懸液。

接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培 養(yǎng) 基 上，20～25 ℃培 養(yǎng)5～7 d，加 入3～5 mL 含0.05%聚山梨酯80 的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后采用適宜方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%聚山梨酯80 的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液制成1 mL 含孢子數(shù)小于100 cfu 的孢子懸液。

菌懸液若在室溫下放置，應(yīng)在2 h 內(nèi)使用；若保存在2～8 ℃可在24 h 內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8 ℃，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。

2.1.2 培養(yǎng)基無(wú)菌性和靈敏度檢查

培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查：取2 種培養(yǎng)基，各5 支，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30～35 ℃環(huán)境下培養(yǎng)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置20～25 ℃環(huán)境下培養(yǎng)，均培養(yǎng)14 d。結(jié)果無(wú)菌生長(zhǎng)，即所用培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查符合驗(yàn)證要求。

培養(yǎng)基靈敏度檢查：取每管裝量為12 mL 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7 支，分別接種小于100 cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單孢菌、生孢梭菌各2 支。另1 支不接種，作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3 d。取每管裝量為9 mL 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7 支，分別接種小于100 cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接種，作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5 d。結(jié)果空白對(duì)照管無(wú)菌生長(zhǎng)，接種菌液的培養(yǎng)基均生長(zhǎng)良好，即所用培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合驗(yàn)證要求。

2.2 無(wú)菌檢查方法建立

2.2.1 沖洗液選擇

取泊沙康唑注射液1 瓶，加入pH 7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液、0.9%氯化鈉注射液、無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80，pH 3.8）和SBECD 溶液（pH 3.5）。5 種沖洗液各20 mL，觀察混合過(guò)程中的性狀變化，初步篩選可使用的沖洗液，結(jié)果pH 7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液，0.9%氯化鈉注射液均析出白色絮狀物；無(wú)菌0.9% 氯化鈉溶液（含0.1% 聚山梨酯80，pH 3.8），SBECD 溶液（pH 3.5）溶液澄清。

由于泊沙康唑注射液pH 為2.0～3.0，pH 7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液和0.9%氯化鈉注射液的pH 接近中性，采用該沖洗液進(jìn)行沖洗時(shí)會(huì)使泊沙康唑注射液樣品析出，導(dǎo)致析出物殘留在膜上，抑制微生物的生長(zhǎng)。馬仕洪等［7］的報(bào)道指出，泊沙康唑注射液無(wú)菌檢查用稀釋液pH 的篩選，pH 在3.45～3.8 范圍內(nèi)微生物生長(zhǎng)良好，故初步選擇pH 3.8的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80）和泊沙康唑注射液處方中的助溶劑輔料磺丁基倍他環(huán)糊精鈉（調(diào)節(jié)pH 至3.5～3.8）作為沖洗液進(jìn)行無(wú)菌檢查方法學(xué)適用性研究。

2.2.2 沖洗量選擇

預(yù)試驗(yàn)方案1：供試品組中，取供試品20 支，每10 支稀釋至500 mL pH 3.8 的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80）中，先用約20 mL pH 3.8 的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80）潤(rùn)濕集菌管，吸取供試品置集菌器中，過(guò)濾，每管先用900 mL pH 3.8 的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80）沖洗，分次沖洗，每次100 mL，再用無(wú)菌0.9% 氯化鈉注射液沖洗，每管的沖洗量為100 mL，分次沖洗，每次100 mL，試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的白色念珠菌、黑曲霉菌各1 mL，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

預(yù)試驗(yàn)方案2：供試品組中，取供試品20 支，每10 支稀釋至500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）中，先用約20 mL SBECD 溶液（pH 3.5）潤(rùn)濕集菌管，吸取供試品置集菌器中，過(guò)濾，每管先用300 mL SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，分次沖洗，每次50 mL（每次需振蕩2 min），再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量為700 mL，分次沖洗，每次100 mL，然后在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的白色念珠菌、黑曲霉菌各1 mL，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

預(yù)試驗(yàn)方案3：供試品組中，取供試品20 支，每10 支稀釋至500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）中，先用約20 mL SBECD 溶液（pH 3.5）潤(rùn)濕集菌管，吸取供試品置集菌器中，過(guò)濾，每管先用500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，分次沖洗，每次50 mL（每次需振蕩2 min），再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量為500 mL，分次沖洗，每次100mL，試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的白色念珠菌、黑曲霉菌各1 mL，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

預(yù)試驗(yàn)方案4：供試品組中，取供試品20 支，每10 支稀釋至500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）中，先用約20 mL SBECD 溶液（pH 3.5）潤(rùn)濕集菌管，吸取供試品置集菌器中，過(guò)濾，每管先用700 mL SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，分次沖洗，每次50 mL（每次需振蕩2 min），再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量為300 mL，分次沖洗，每次100 mL，試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的試驗(yàn)菌（白色念珠菌、黑曲霉菌）各1 mL，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。陽(yáng)性對(duì)照組中，另取濾管，不過(guò)濾供試液。分別向每個(gè)管中加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基100 mL，作為陽(yáng)性對(duì)照。試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的試驗(yàn)菌（白色念珠菌、黑曲霉菌）各1 mL，將含培養(yǎng)基的容器置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。陰性對(duì)照組中，取相應(yīng)方案的稀釋劑、沖洗液，同法操作，然后加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基100 mL，不加對(duì)照菌液，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

結(jié)果分析：結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，方案1 采用無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液（含0.1%聚山梨酯80，pH 3.8）作為沖洗液，白色念珠菌和黑曲霉菌均未生長(zhǎng)；方案2 至方案4 采用不同梯度的SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗液進(jìn)行沖洗，結(jié)果顯示，SBECD 溶液（pH 3.5）用量越大，白色念珠菌和黑曲霉菌生長(zhǎng)情況越好；方案4 為較優(yōu)選方案，但白色念珠菌在供試品中的長(zhǎng)勢(shì)略弱于陽(yáng)性對(duì)照組中菌的長(zhǎng)勢(shì)，故繼續(xù)對(duì)該方法進(jìn)行優(yōu)化。

表1 沖洗量的選擇預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 過(guò)濾膜材質(zhì)選擇

1）高效液相色譜（HPLC）法

鑒于泊沙康唑注射液有強(qiáng)烈的抗真菌作用，無(wú)菌檢查時(shí)如何有效地沖洗掉濾膜上殘留的藥物，從而降低抗真菌活性十分關(guān)鍵。濾膜的成分、結(jié)構(gòu)和性能決定了其應(yīng)用范圍，在2.2.2 項(xiàng)下預(yù)試驗(yàn)方案4 的基礎(chǔ)上，考察不同材質(zhì)濾膜對(duì)泊沙康唑注射液的吸附性差異，結(jié)果尼龍膜、混合纖維素脂膜和PVDF 膜過(guò)濾后膜上的樣品殘留量分別為0.035 7，0.003 5，0.117 5 mg/mL。故選擇殘留量較小的濾膜材質(zhì)進(jìn)行無(wú)菌檢查適用性試驗(yàn)。

2）無(wú)菌檢查方法學(xué)適用性預(yù)試驗(yàn)

同步取混合纖維素脂膜、尼龍膜和PVDF 膜材質(zhì)的集菌器進(jìn)行無(wú)菌檢查方法學(xué)適用性預(yù)試驗(yàn)。

供試品組：取供試品20 支，每10 支稀釋至500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）中，先用約20 mL SBECD 溶液（pH 3.5）潤(rùn)濕集菌管，吸取供試品置集菌器（混合纖維素脂膜、尼龍膜和PVDF 膜）中，過(guò)濾，每管先用700 mL SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，分次沖洗，每次50 mL，再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量為300 mL，分次沖洗，每次100 mL。試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的試驗(yàn)菌（白色念珠菌、黑曲霉菌）各1 mL，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

陽(yáng)性對(duì)照組：另取濾管，不過(guò)濾供試液。然后分別向每個(gè)管中加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基100 mL，作為陽(yáng)性對(duì)照。試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的試驗(yàn)菌（白色念珠菌、黑曲霉菌）各1 mL，將含培養(yǎng)基的容器置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

陰性對(duì)照組：取稀釋劑、沖洗液，同法操作，然后加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基100 mL，不加對(duì)照菌液，置20～25 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

3）結(jié)果分析

結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，不同材質(zhì)的濾膜對(duì)泊沙康唑的吸附程度不一致，其中以混合纖維素脂膜材質(zhì)的濾膜吸附最小，且通過(guò)無(wú)菌檢查方法學(xué)適用性驗(yàn)證預(yù)試驗(yàn)確認(rèn)，采用混合纖維素脂膜的結(jié)果最優(yōu)，因此，選用混合纖維素脂膜材質(zhì)的薄膜過(guò)濾器進(jìn)行正式的方法學(xué)適用性驗(yàn)證。

表2 3 種不同材質(zhì)濾膜對(duì)泊沙康唑注射液方法學(xué)適用性預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

2.3 無(wú)菌檢查方法適用性驗(yàn)證

2.3.1 驗(yàn)證方法

供試品陽(yáng)性對(duì)照組（PPC）：取3 批供試品，每批60 瓶，每10 瓶供試品稀釋至500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）中，每10 瓶供試品接種于1 個(gè)集菌管；先用約20 mL SBECD溶液（pH 3.5）潤(rùn)濕濾筒，再吸取供試品置集菌器中，每管用SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，沖洗量為700 mL，分次沖洗，每次100 mL，再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量300 mL，分次沖洗，每次100 mL。然后分別向每個(gè)管中加入相應(yīng)培養(yǎng)基（培養(yǎng)細(xì)菌的3 管加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌的3 管加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基）100 mL。試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的試驗(yàn)菌各1 mL（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和生孢梭菌，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基加枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉），置規(guī)定溫度（30～35 ℃、20～25 ℃）培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

陽(yáng)性對(duì)照組（PC）：另取濾管，不過(guò)濾供試液。然后分別向每個(gè)管中加入相應(yīng)培養(yǎng)基，作為陽(yáng)性對(duì)照。試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100cfu/mL 的試驗(yàn)菌各1 mL，將含培養(yǎng)基的容器置規(guī)定溫度（30～35 ℃、20～25 ℃）培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

陰性對(duì)照組：另取濾管，不過(guò)濾供試液，每管先用SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，沖洗量為700 mL，分次沖洗，每次100 mL，再用0.9%氯化鈉注射液進(jìn)行沖洗，每管沖洗量為300 mL，分次沖洗，每次100 mL。然后分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基各100 mL，不加對(duì)照菌液，將含培養(yǎng)基的容器置規(guī)定溫度（30～35 ℃、20～25 ℃）培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為不超過(guò)5 d。

沖洗液陽(yáng)性對(duì)照組（PPC）：另取濾管，不過(guò)濾供試液，每管先用SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，沖洗量為700mL，分次沖洗，每次100 mL，再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量為300 mL，分次沖洗，每次100 mL。然后分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基各100 mL，作為沖洗液陽(yáng)性對(duì)照組。試驗(yàn)完成后，在生物安全柜里，往每個(gè)濾管加入小于100 cfu/mL 的試驗(yàn)菌各1 mL，將含培養(yǎng)基的容器置規(guī)定溫度（30～35 ℃、20～25 ℃）培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5 d。

2.3.2 結(jié)果分析

根據(jù)3 批泊沙康唑注射液和沖洗液方法學(xué)適用性試驗(yàn)結(jié)果，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌與黑曲霉供試品與陽(yáng)性對(duì)照組中菌的長(zhǎng)勢(shì)一致。結(jié)果見(jiàn)表3 和表4。取3 批供試品，每批60 瓶，每10 瓶供試品稀釋至500 mL SBECD 溶液（pH 3.5）中，每10 瓶供試品接種于1 個(gè)集菌管；先用約20 mL SBECD 溶液（pH 3.5）潤(rùn)濕濾筒，再吸取供試品置集菌器中，每管用SBECD 溶液（pH 3.5）沖洗，沖洗量為700 mL，分次沖洗，每次100 mL，再用0.9%氯化鈉注射液沖洗，每管沖洗量為300 mL，分次沖洗，每次100 mL。然后分別向每個(gè)管中加入相應(yīng)培養(yǎng)基（培養(yǎng)細(xì)菌的3 管加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌的3 管加入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基）100 mL。根據(jù)檢查結(jié)果，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌與黑曲霉供試品與陽(yáng)性對(duì)照中菌的長(zhǎng)勢(shì)一致，故本品可采用該方法進(jìn)行無(wú)菌檢查。

表3 3 批泊沙康唑注射液無(wú)菌檢查方法適用性試驗(yàn)檢查結(jié)果

表4 沖洗液無(wú)菌檢查方法適用性試驗(yàn)檢查結(jié)果

2.4 無(wú)菌檢查結(jié)果

根據(jù)2.2.4 項(xiàng)下的驗(yàn)證方法，按2015 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則1101 無(wú)菌檢查法薄膜過(guò)濾法對(duì)泊沙康唑注射液3 批樣品進(jìn)行檢測(cè)，培養(yǎng)14 d，均無(wú)菌生長(zhǎng)，產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，三唑類抗真菌藥對(duì)真菌有很強(qiáng)的抑菌作用，對(duì)于這類具有較強(qiáng)抗菌活性的藥物必須首先摸索處理方式來(lái)消除其抑菌作用，然后才能順利進(jìn)行無(wú)菌檢查［8］，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究中采用薄膜過(guò)濾法，對(duì)沖洗液、沖洗量、濾膜的材質(zhì)、沖洗條件等進(jìn)行了篩選和優(yōu)化［9-10］，在研究過(guò)程中還考慮了樣品的過(guò)濾速度和沖洗速度對(duì)沖洗效果的影響。以自制的SBECD 溶液（pH 3.5）作為沖洗液進(jìn)行沖洗，考慮其pH 與樣品本身的pH 相近，防止樣品的析出殘留在濾膜上增加抑菌性［11］，同時(shí)對(duì)沖洗液同步進(jìn)行方法學(xué)適用性驗(yàn)證，確保沖洗液本身無(wú)抑菌性［12］。

在進(jìn)行泊沙康唑注射液無(wú)菌檢查方法學(xué)適用性預(yù)試驗(yàn)時(shí)，以2015 年版《中國(guó)藥典（四部）》規(guī)定的6 種無(wú)菌檢查試驗(yàn)菌株是否能正常生長(zhǎng)為指標(biāo)，通過(guò)一系列的篩選和優(yōu)化，最終建立了適合泊沙康唑注射液無(wú)菌檢查的方法。在驗(yàn)證無(wú)菌檢查方法時(shí)，選擇敏感菌株白色念珠菌作為陽(yáng)性菌［13］。通過(guò)方法學(xué)適用性驗(yàn)證試驗(yàn)證明，該方法可行、結(jié)果可靠，同時(shí)給其他三唑類產(chǎn)品的無(wú)菌檢查提供了參考。