成都地區(qū)3家馬術(shù)俱樂部馬匹的腸道寄生蟲檢測(cè)

沈青義，王 一，何 清，曹隨忠

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，甘肅 臨洮 730500 ； 2.甘肅省定西市臨洮農(nóng)業(yè)學(xué)校，甘肅 臨洮 730500 ；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130)

馬產(chǎn)業(yè)是現(xiàn)代畜牧業(yè)的重要組成部分，當(dāng)今世界強(qiáng)國(guó)也是馬業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家，馬匹質(zhì)量、賽馬規(guī)模和馬術(shù)水平是國(guó)力強(qiáng)盛的標(biāo)志[1]。我國(guó)馬的主要產(chǎn)地集中在內(nèi)蒙古、西北、西南和東北地區(qū)[2]，在發(fā)展中國(guó)家，超過85%的馬屬動(dòng)物用于交通運(yùn)輸和農(nóng)業(yè)方面[3]，在國(guó)內(nèi)，馬多為農(nóng)戶、牧民散養(yǎng)役用或北京、上海、廣東、江浙等發(fā)達(dá)地區(qū)馬術(shù)俱樂部養(yǎng)殖。消化道寄生蟲是各類馬發(fā)病和致死的重要因素[4]，寄生在馬消化道的寄生蟲種類很多，主要包括圓線蟲、馬副蛔蟲、馬尖尾線蟲(馬蟯蟲)、韋氏類圓線蟲、安氏網(wǎng)尾線蟲(肺線蟲)、葉狀裸頭絳蟲、魯氏艾美耳球蟲等[5]。圓線蟲和馬副蛔蟲不僅影響馬匹消化道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，寄生于馬小腸的幼蟲在肝、肺中的移行造成腸壁、肝肺毛細(xì)血管和肺泡壁的損傷，引起肝細(xì)胞變性、肺出血及炎癥；成蟲可引起卡他性腸炎、出血，嚴(yán)重時(shí)發(fā)生腸阻塞、腸破裂。國(guó)內(nèi)的研究顯示，馬消化道寄生蟲病感染比例高達(dá)85%左右，馬圓線蟲感染率最高，消化道寄生蟲種類較多，感染強(qiáng)度大，且多為混合感染[6]。因此，對(duì)馬進(jìn)行消化道寄生蟲感染情況的調(diào)查，對(duì)指導(dǎo)驅(qū)蟲用藥具有重要意義。

本試驗(yàn)采用病原學(xué)檢查的方法，對(duì)賽馬糞樣進(jìn)行處理，通過漂浮法檢測(cè)其中的蟲卵蟲體，通過斯陶爾氏法進(jìn)行蟲卵計(jì)數(shù)反映感染強(qiáng)度，力求在對(duì)賽馬個(gè)體影響最小的情況下對(duì)其寄生蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查研究，為馬術(shù)俱樂部制定驅(qū)蟲計(jì)劃提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 采集成都馬術(shù)俱樂部A(2018年1月12日采樣，32份)、馬術(shù)俱樂部B(2018年1月19日采樣，38份)和馬術(shù)俱樂部C(2018年1月24日采樣，31份)的馬匹新鮮糞樣共101份，糞樣帶回實(shí)驗(yàn)室放置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?樣品保存時(shí)間不超過1周)。采樣馬匹信息統(tǒng)計(jì)見表1。

1.1.2 試劑與主要儀器材料 0.1 mol/L NaOH溶液、飽和食鹽水。光學(xué)顯微鏡(CX21FS1，OLYMPUS)、普通離心機(jī)(TD-4Z臺(tái)式低速離心機(jī)，四川蜀科儀器有限公司)、天平(恒佳牌JYT-2架盤天平，常熟市佳衡天平儀器有限公司)等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 飽和鹽水漂浮法 取5 g新鮮糞便于燒杯中，加入10倍的飽和食鹽水充分混合，用糞篩(直徑5 cm，80目)將糞液過濾至平底管中，將要溢出為止，垂直覆以蓋玻片使之與液體接觸，靜置15 min后，快速取出蓋玻片30°角覆于載玻片之上。制片成功后根據(jù)蟲卵大小、形狀、顏色、卵殼和內(nèi)容物的典型特征迅速鏡檢(防止糞液結(jié)晶)并做好記錄。

表1 采樣馬匹信息統(tǒng)計(jì)

1.2.2 斯陶爾氏法 參考文獻(xiàn)[7]中“動(dòng)物蠕蟲學(xué)糞便檢查技術(shù)”進(jìn)行檢測(cè)：稱取8 g糞便于三角燒瓶中，加入0.1 mol/L NaOH溶液至75 mL處，然后加入10多個(gè)玻璃小球，充分震蕩，使呈細(xì)致均勻的糞懸液，用吸管吸取0.15 mL置2～3張載玻片上，分別計(jì)數(shù)后，加起來的總蟲卵數(shù)乘以62.5，即為糞樣每克蟲卵數(shù)(EPG)。

2 結(jié)果

2.1 寄生蟲檢出情況 對(duì)采集于俱樂部A、俱樂部B與俱樂部C的馬糞便樣品進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果如表2所示，所有俱樂部的馬匹圓線蟲檢出率皆高于馬副蛔蟲檢出率，俱樂部A的蟲卵陽性率和圓線蟲檢出率最高，皆為93.75%(30/32)，但整體圓線蟲感染強(qiáng)度較低，EPG為108個(gè)。俱樂部B的蟲卵陽性率和圓線蟲檢出率最低，皆為68.42%(26/38)，但整體圓線蟲感染強(qiáng)度較高，EPG為409個(gè)。相對(duì)于前2個(gè)俱樂部，俱樂部C的糞樣主要采集自幼馬，其馬匹蟲卵陽性率較高為87.10%(27/31)，圓線蟲檢出率也較高為83.87%(26/31)，圓線蟲整體感染強(qiáng)度最強(qiáng)，EPG為411個(gè)。圓線蟲和馬副蛔蟲混合感染份數(shù)占總檢測(cè)份數(shù)的14.85%，感染馬副蛔蟲的馬匹多同時(shí)感染有圓線蟲。

2.2 不同年齡段賽馬寄生蟲感染率及EPG 對(duì)賽馬寄生蟲感染率按照年齡分段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表3，圓線蟲在各年齡段的賽馬均有分布，0～3歲幼齡馬的圓線蟲感染率最高，達(dá)到100%，感染率隨著年齡增加而降低，但仍在70%以上。馬副蛔蟲主要分布在幼齡馬，感染率達(dá)到83.33%，11～18歲的馬匹未檢出馬副蛔蟲。

對(duì)賽馬寄生蟲EPG按照年齡分段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果(見表3)顯示，圓線蟲最高EPG和平均EPG均隨年齡增加而降低，說明感染強(qiáng)度隨年齡增加而降低。馬副蛔蟲主要在幼齡馬中檢出，成年馬中檢出的EPG也低于幼齡馬的平均值。

表2 不同俱樂部馬匹寄生蟲感染率及EPG

表3 不同年齡段賽馬寄生蟲感染率和EPG (n=60)

3 討論

3.1 腸道寄生蟲感染情況 本次試驗(yàn)采自A、B和C三個(gè)馬術(shù)俱樂部的101份糞樣，共檢出圓線蟲和馬副蛔蟲2種寄生蟲蟲卵，其感染率分別為81.19%、15.84%。感染率與李東方等[8]對(duì)西藏部分地區(qū)馬屬動(dòng)物的調(diào)查結(jié)果相似，其圓線蟲、馬副蛔蟲感染率分別為82.88%、12.61%，另外還檢出球蟲、阿米巴原蟲、鞭蟲、結(jié)腸小袋纖毛蟲等寄生蟲。圖爾蓀·薩迪爾[9]在新疆部分地區(qū)馬糞樣中檢出的馬圓線蟲和馬副蛔蟲感染率分別為87.89%、9.47%，另外還檢出毛細(xì)線蟲、細(xì)頸線蟲、球蟲等寄生蟲。但是，阮正祥等[10]檢出黔西馬的圓線蟲、馬副蛔蟲感染率分別為62.59%、10.53%，感染率相對(duì)較低。Yoshihara等[11]在日本東京通過對(duì)450匹賽馬進(jìn)行剖檢，結(jié)果顯示，大型圓形線蟲、馬副蛔蟲感染率分別為31.8%、14.4%。馬蟯蟲、葉狀裸頭絳蟲和胃蠅蛆感染率分別為0.4%、33.1%和9.3%。Slivinska等[12]對(duì)波蘭4個(gè)地區(qū)的9個(gè)農(nóng)場(chǎng)中124匹馬寄生蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果顯示，馬副蛔蟲、馬蟯蟲、蠅柔線蟲、葉狀裸頭絳蟲、馬胃蠅蛆感染率分別為27.4%、38.7%、16.9%、42.7%、46.8%。綜上所述，雖然不同種類的消化道寄生蟲感染率存在著較大的差異，但主要以圓線蟲和馬副蛔蟲感染為主。

3.2 3家馬術(shù)俱樂部馬匹寄生蟲感染情況差異分析 3家馬術(shù)俱樂部馬匹的寄生蟲感染率和感染強(qiáng)度呈現(xiàn)明顯差異，俱樂部B圓線蟲感染率最低(68.42%)，俱樂部A圓線蟲感染率最高(93.75%)，但感染強(qiáng)度(EPG為108個(gè))最低，而俱樂部C圓線蟲和馬副蛔蟲感染率均較高，檢出寄生蟲的馬匹EPG也較高。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，3個(gè)馬術(shù)俱樂部馬廄衛(wèi)生條件不同，但均在春秋各驅(qū)蟲1次。俱樂部A的馬廄墊料為稻殼，每天多次清除被糞尿污染的墊料，驅(qū)蟲口服國(guó)產(chǎn)阿維菌素片；俱樂部C的馬廄墊料為鋸末，被糞尿污染的墊料清潔不及時(shí)，比較潮濕，馬房中有明顯的氨味，驅(qū)蟲使用的是抗蟲靈(雙羥萘酸噻嘧啶)；而俱樂部B的馬廄墊料也為稻殼，每天多次清除被糞尿污染的墊料，驅(qū)蟲則采用輪換使用阿苯達(dá)唑和進(jìn)口伊維菌素口服制劑。由此可見，除去飼養(yǎng)環(huán)境因素，驅(qū)蟲時(shí)輪換用藥對(duì)于降低群體寄生蟲感染率有明顯效果。馬副蛔蟲成蟲蟲體在幼齡馬中較常見，成年馬體內(nèi)罕見[5]，所以馬副蛔蟲感染率與受檢群體幼齡馬所占比例有關(guān)。

3.3 圓線蟲感染情況隨馬匹年齡變化 從不同年齡段賽馬寄生蟲感染率及EPG分類統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，圓線蟲在各年齡段的賽馬均有分布，0～3歲幼齡馬的圓線蟲感染率最高，達(dá)到100%，感染率隨著年齡增加而降低至82.05%(4～10歲)、73.33%(11～18歲)。感染率變化與王美玲[2]調(diào)查結(jié)果相似，其調(diào)查顯示，0～2歲馬匹感染率高達(dá)93.26%，隨著年齡的增長(zhǎng)感染率降至82.65%。圓線蟲EPG隨著年齡增加由615個(gè)降至176個(gè)，吳樹清[13]的調(diào)查結(jié)果也反映了EPG隨年齡增加減少的現(xiàn)象。寄生蟲宿主存在帶蟲免疫現(xiàn)象，體內(nèi)帶蟲的宿主擁有一定的抵抗此寄生蟲再次感染的能力，保持少量寄生蟲感染狀態(tài)[14]。幼齡馬的免疫功能相對(duì)于成年馬還不夠完善，對(duì)寄生蟲感染的抵抗力不強(qiáng)，所以感染強(qiáng)度普遍較高。

3.4 圓線蟲高感染率與蟲種耐藥性 結(jié)合本試驗(yàn)結(jié)果和國(guó)內(nèi)其他研究情況可見，圓線蟲在多地均為優(yōu)勢(shì)蟲種，其感染率一般在80%以上。雖然大部分馬場(chǎng)和馬術(shù)俱樂部都會(huì)定期對(duì)馬匹進(jìn)行驅(qū)蟲，但是還是無法有效降低其感染率。究其原因，推測(cè)可能與部分蟲種的耐藥性有關(guān)。目前注冊(cè)的用于馬的驅(qū)蠕蟲藥僅有4種：苯并咪唑類、四氫咪啶(噻咪啶)、阿維菌素和莫西菌素[15]。國(guó)外研究表明，苯并咪唑耐藥性在盅口線蟲(小圓線蟲)中廣泛存在，高達(dá)被檢樣品的80%。莫西菌素對(duì)馬副蛔蟲的幼蟲有較優(yōu)良的驅(qū)殺效果，且優(yōu)于伊維菌素，對(duì)盅口線蟲成蟲、幼蟲有很高驅(qū)殺作用。但同為大環(huán)內(nèi)酯類驅(qū)蟲抗生素，莫西菌素與伊維菌素存在交叉耐藥性[16]，其耐藥性沒有其他藥物普遍。為避免因頻繁用藥和長(zhǎng)期亞劑量用藥促成耐藥性產(chǎn)生，近年來，國(guó)外寄生蟲控制策略發(fā)生了重大變化，推崇用基于監(jiān)測(cè)和選擇性治療的方案取代傳統(tǒng)驅(qū)蟲方法，尤其是在歐洲和美國(guó)[4,17]，但國(guó)內(nèi)還是多采用全群計(jì)劃性驅(qū)蟲的傳統(tǒng)方法。

綜上，圓線蟲在各年齡段的賽馬均有分布，其感染率和感染強(qiáng)度隨著年齡增加而降低。檢出馬副蛔蟲的多為幼齡馬，且多處于圓線蟲和馬副蛔蟲混合感染的狀態(tài)。不同馬術(shù)俱樂部的寄生蟲感染率和感染強(qiáng)度因養(yǎng)殖環(huán)境不同呈現(xiàn)出明顯差別。