緊密連接蛋白-1介導(dǎo)E-cadherin促進(jìn)前列腺癌發(fā)生進(jìn)展機(jī)制研究

張春霆，盧 蓉，張昌文，陳業(yè)剛

前列腺癌已經(jīng)成為危害我國男性健康的疾病之一[1]，但發(fā)病原因不明?；虮磉_(dá)異常和免疫機(jī)制在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用[2]，研究發(fā)現(xiàn)，緊密連接蛋白(Claudin)功能改變與多種腫瘤密切相關(guān)[3]，前列腺癌轉(zhuǎn)移中以骨轉(zhuǎn)移最多，E-鈣黏蛋白(E-cadherin)異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移相關(guān)[4]，但Claudin-1和E-cadherin在前列腺癌組織中的表達(dá)及其與前列腺癌的關(guān)系未見報(bào)道。本文對Claudin-1和E-cadherin在前列腺癌組織中的表達(dá)及臨床病理特征進(jìn)行研究，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2004年1月—2017年12月浙江省金華市人民醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的前列腺癌標(biāo)本72例。年齡51～82歲，平均年齡65.5歲，所有病例再次經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為前列腺癌，前列腺癌患者術(shù)前無輔助放療、化療和內(nèi)分泌治療。其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例，骨轉(zhuǎn)移6例。所有患者經(jīng)病理診斷證實(shí)；腫瘤TNM分期：I～Ⅱ期38例，Ⅲ期～Ⅳ期34例。另取前列腺增生組織42例，患者平均年齡與前列腺癌患者相仿，一般資料比較未見明顯差異。

1.2 試劑與方法 Claudin-1和E-cadherin免疫組織化學(xué)檢測試劑及DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物有限公司。采用免疫組化SP法，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。主要步驟：微波抗原修復(fù)，過氧化氫清除內(nèi)源性過氧化物酶活性，正常兔血清阻斷非特異性染色，依次加一抗(1:100稀釋)、生物素標(biāo)記的二抗和酶標(biāo)鏈霉親和素，37 ℃孵育20 min，DAB顯色。用PBS液替代一抗作對照。

1.3 結(jié)果判定 Claudin-1和E-cadherin定位于細(xì)胞膜，呈現(xiàn)藍(lán)褐色。高倍鏡(×400)下對染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行測定：每份切片記分=染色細(xì)胞分?jǐn)?shù)×染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)。所得分?jǐn)?shù)＜2分為陰性，≥2分為陽性。按照5個(gè)400倍視野下染色細(xì)胞計(jì)數(shù)所占比例分為5級，＜5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分。50%～75%為3分，≥75%為4分。按照染色強(qiáng)度分為3級，弱染色為1分，中度染色為2分，強(qiáng)染色為3分。所有結(jié)果均進(jìn)行雙盲讀片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)采用SPSS 18.00統(tǒng)計(jì)軟件處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，Claudin-1和E-cadherin蛋白表達(dá)相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Claudin-1和E-cadherin蛋白在前列腺增生和前列腺癌中的表達(dá) Claudin-1和E-cadherin主要表達(dá)在細(xì)胞膜，在細(xì)胞漿和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)較少（圖1）。

圖1 Claudin-1在前列腺增生和前列腺癌中的表達(dá)及E-cadherin在前列腺癌中的表達(dá)（免疫組織化學(xué)sp法，×400）

2.2 Claudin-1和E-cadherin蛋白表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系 Claudin-1在前列腺癌中高表達(dá)，陽性表達(dá)率63.89%（46/72），Claudin-1異常表達(dá)與前列腺癌Gleason評分、組織類型、TNM分期有關(guān)，與年齡、PSA無關(guān)。E-cadherin在前列腺癌中低表達(dá)，陽性表達(dá)率13.89%（10/72），E-cadherin表達(dá)與年齡、Gleason評分、組織類型、臨床分期有關(guān)，與PSA無關(guān)（表1）。

表1 E-cadherin 和Claudin-1在前列腺癌中的表達(dá)與前列腺患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 Claudin-1和E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性分析Spearman等級相關(guān)分析顯示，前列腺癌Claudin-1表達(dá)與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r= - 0.68，P＜0.05，表2）。

表2 Claudin-1和E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

多種基因參與了前列腺癌進(jìn)展，隨著緊密連接蛋白與前列腺癌關(guān)系研究的深入，其異常表達(dá)參與前列腺癌進(jìn)展逐漸顯現(xiàn)。Claudin是緊密連接蛋白的骨架蛋白，在維持細(xì)胞極性和滲透性、黏膜屏障功能和細(xì)胞信號傳導(dǎo)中有重要的作用[5]。而E-cadherin細(xì)胞黏附和維持上皮細(xì)胞完整性方面也起重要作用[6-7]；當(dāng)E-cadherin表達(dá)降低時(shí)，腫瘤細(xì)胞更傾向于侵襲、轉(zhuǎn)移的特性。

Claudin作為緊密連接的關(guān)鍵蛋白，表達(dá)具有組織特異性，即使在相同組織中，也可能呈現(xiàn)不同Claudin蛋白表達(dá)，在前列腺癌中，盡管Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和 Claudin-4均異常表達(dá)，多數(shù)報(bào)道Claudin-1和Claudin-4呈增高表達(dá)，Claudin-2、Claudin-3則呈現(xiàn)降低表達(dá)[8-9]，Miwa等[10]用免疫組化的方法比較前列腺癌與非癌性組織中Claudin-1的表達(dá)，結(jié)果顯示Claudin-1在前列腺癌中高表達(dá)，與Gleason評分相關(guān)，說明Claudin-1異常表達(dá)與前列腺癌分化程度有關(guān)。Seo等[11]對48例前列腺癌中Claudin-1表達(dá)情況研究結(jié)果表明，Claudin-1在前列腺癌中的表達(dá)率為54%，Claudin-1異常表達(dá)與Gleason評分≥7和PSA大小相關(guān)，而與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及局部侵犯，T分期及生化復(fù)發(fā)無關(guān)。本研究對72例前列腺癌進(jìn)行研究，結(jié)果顯示Claudin-1陽性表達(dá)率為63.89%，高于良性前列腺增生的33.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Claudin-1表達(dá)與患者年齡、PSA無關(guān)，與Gleason評分和臨床分期有關(guān)，此結(jié)果與Seo等[11]結(jié)果略有不同是因?yàn)樗x病例病理特征不同有關(guān)；本研究還對E-cadherin表達(dá)狀況進(jìn)行了研究，E-cadherin在前列腺癌下降表達(dá)，陽性表達(dá)率13.89%，E-cadherin下降表達(dá)與患者年齡、Gleason評分、臨床分期有關(guān)，與PSA無關(guān)，Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示Claudin-1和E-cadherin呈負(fù)相關(guān)，但它們在前列腺癌中的確切作用機(jī)制不詳；有研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌中Claudin-1表達(dá)增高，引起β-catenin／Tef信號通路上調(diào)，促進(jìn)E-cadherin表達(dá)下降，Claudin-1增高E-cadherin下降共同作用，引起緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)和功能破壞，細(xì)胞黏附力下降，更容易脫離原發(fā)灶，促進(jìn)腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移[12]。

E-cadherin丟失或功能缺失在腫瘤細(xì)胞獲得侵襲力中起關(guān)鍵作用，E-cadherin表達(dá)下調(diào)與腫瘤細(xì)胞低分化和預(yù)后不佳有關(guān)[13-14]，有研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin在前列腺癌中是DNA關(guān)鍵的SPl轉(zhuǎn)錄因子通過甲基化調(diào)節(jié)組蛋白酶H3乙酰化作用，使E-cadherin表達(dá)水平下調(diào)[15]。筆者也發(fā)現(xiàn)其表達(dá)下降與前列腺癌Gleason分級、臨床分期有關(guān)。

綜上，Claudin-l和E-cadherin在前列腺癌中異常表達(dá)可能相互促進(jìn)，Claudin-1和E-cadherin作為前列腺癌研究中重要的指標(biāo)，闡明它們在前列腺癌作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。