黃芩對小鼠抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究

陳敏 夏壽明

摘 要：采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹法和熱板法，以生理鹽水為空白對照組，地塞米松鈉為陽性對照組，黃芩水煎醇沉液高、中、低劑量（10.0g/kg、5.0g/kg、2.5g/kg）為試驗(yàn)組，腹腔注射后，測定小鼠的耳廓腫脹率以觀察黃芩水煎醇沉液的抗炎作用;以安乃近為陽性對照組，黃芩水煎醇沉液腹腔注射和黃芩水煎液灌胃2個(gè)處理，測定小鼠的痛閾值以觀察黃芩水煎醇沉液的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果表明，黃芩水煎醇沉液可降低小鼠的耳廓腫脹率（P<0.05或P<0.01），高劑量組優(yōu)于陽性對照組（P<0.05）;可提高小鼠的痛閾值（P<0.05或P<0.01），但黃芩水煎液灌胃處理僅高劑量組小鼠的痛閾值提高（P<0.01）。說明黃芩水煎醇沉液具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，呈現(xiàn)量效關(guān)系，且腹腔注射抗炎鎮(zhèn)痛效果強(qiáng)于灌胃。

關(guān)鍵詞：黃芩;水煎醇沉液;抗炎作用;鎮(zhèn)痛作用;小鼠

中圖分類號 R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731（2020）15-0034-03

黃芩，別名子芩、土金茶根、山茶根等，系唇形科黃芩屬多年生草本植物黃芩的干燥根，主治濕溫、暑溫胸悶嘔惡、濕熱痞滿、黃疸、肺熱咳嗽、高熱煩渴、胎動(dòng)不安等，常用來作為利尿劑、緩瀉藥、解熱劑等[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，黃芩的主要有效成分為黃酮類化合物，以黃芩苷的含量最高，其具有抑菌、抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、降血壓、抗癌、治療慢性肝炎等作用[2]。近年來，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出動(dòng)物抗生素減量及替代計(jì)劃，并組織科研力量對中草藥、益生素等抗生素替代物進(jìn)行攻關(guān)研究，未來中草藥必將在畜禽生產(chǎn)替代抗生素等方面得到廣泛的應(yīng)用。為此，本試驗(yàn)開展了黃芩水煎醇沉液對小鼠的抗炎、鎮(zhèn)痛作用的初步研究，為其在獸醫(yī)臨床應(yīng)用提供用藥選擇。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄兼用，由安徽科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 藥材及試劑 黃芩，由安徽科技學(xué)院中藥園提供;無水乙醇、二甲苯、生理鹽水、地塞米松鈉注射液、安乃近注射液等。

1.1.3 主要儀器 RB-200智能熱板儀，成都泰盟科技有限公司;TDL-80-ZB型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;YP-6000型電子天平，上海精科電子廠;SENCO?R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海申生科技有限公司;SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司;直徑為8mm的不銹鋼沖子等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 黃芩水煎醇沉液的制備 稱取黃芩400g放入不銹鋼鍋中，用水浸泡30min，煎煮3次，時(shí)間分別為60min、30min、20min，合并3次濾液，調(diào)pH至7.5，加熱濃縮至400mL，離心10min（3800r/min），取上清液加蒸餾水定容至400mL，即得含生藥1g/mL黃芩水煎液。取黃芩水煎液200mL，加入無水乙醇300mL，使乙醇含量為60%，4℃下靜置12h，離心10min（3800r/min），用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收乙醇，加蒸餾水定容至200mL，再加入800mL的無水乙醇，使乙醇的含量為80%，4℃下靜置12h，離心10min（3800r/min），回收乙醇，加蒸餾水定容至200mL，即得含生藥1g/mL的黃芩水煎醇沉液，裝瓶消毒，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 抗炎試驗(yàn) 采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹法，取小鼠50只，稱其體重，隨機(jī)分為5組，每組10只。試驗(yàn)組（高、中、低劑量）腹腔注射黃芩水煎醇沉液10.0g/kg、5.0g/kg、2.5g/kg，陽性對照組腹腔注射地塞米松鈉0.01g/kg，空白對照組腹腔注射等量生理鹽水。每日1次，連續(xù)給藥6d。末次給藥30min后，用二甲苯50μL均勻涂布在小鼠右耳背腹兩側(cè)，60min后將小鼠處死，剪下左右兩耳，用直徑為8mm的不銹鋼沖子，在兩耳同一部位打下圓形耳片組織塊稱重，計(jì)算小鼠耳廓的腫脹率、腫脹抑制率[3]。計(jì)算公式為：腫脹率（%）=（致炎后的右耳片質(zhì)量-對照的左耳片質(zhì)量）/對照的左耳片質(zhì)量×100;腫脹抑制率（%）=（對照組平均腫脹率-用藥組的平均腫脹率）/對照組平均腫脹率×100。

1.2.3 鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 采用熱板法測定小鼠的鎮(zhèn)痛反應(yīng)[4]，當(dāng)小鼠受熱刺激（55.0±0.5）℃后，而產(chǎn)生的疼痛反應(yīng)（即舔后足），以出現(xiàn)舔后足的時(shí)間計(jì)為該鼠的痛閾值（s）;凡痛閾值小于5s或大于60s或在熱板儀上經(jīng)常跳躍者均棄之不用。試驗(yàn)分黃芩水煎醇沉液腹腔注射和黃芩水煎液灌胃給藥2個(gè)處理，每個(gè)處理均篩選出合格小鼠40只，稱其體重，隨機(jī)分為4組，每組10只。黃芩水煎醇沉液腹腔注射、黃芩水煎液灌胃給藥處理的劑量和方法同“1.2.2”，陽性對照組腹腔注射和灌胃安乃近0.1g/kg。給藥前分別測出每只小鼠的正常痛閾值，取2次平均值作為該小鼠給藥前痛閾值，給藥30min后測定其痛閾值的變化。痛閾增值（s）=給藥后痛閾值（s）-給藥前痛閾值（s），痛閾提高率=痛閾增值（s）/給藥前痛閾值（s）×100。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)所得各組數(shù)據(jù)以[x]±SD表示，組間采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 腹腔注射黃芩水煎醇沉液對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹的影響 從表1可以看出，與空白對照組比較，高、中、低劑量組的小鼠耳廓腫脹率明顯下降，其中低劑量組小鼠耳廓腫脹率與給藥前比較差異顯著（P<0.05），高、中劑量組的小鼠耳廓腫脹率與給藥前比較差異極顯著（P<0.01）;與陽性對照組比較，低、中劑量組小鼠耳廓腫脹率有所下降，但差異不顯著;大劑量組小鼠耳廓腫脹率下降明顯，差異顯著（P<0.05）。腫脹抑制率隨劑量增加而提高。

2.2 腹腔注射黃芩水煎醇沉液對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響 從表2可以看出，與給藥前比較，給藥后試驗(yàn)組的小鼠痛閾值明顯提高，其中低劑量差異顯著（P<0.05）;高、中劑量組差異極顯著（P<0.01）。與陽性對照組比較，僅高劑量組的痛閾增值明顯提高，差異顯著（P<0.05）。痛閾提高率隨劑量增加而提高。

2.3 灌胃黃芩水煎液對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響 從表3可以看出，與給藥前比較，給藥后試驗(yàn)組的小鼠痛閾值有所提高，僅高劑量組痛閾值差異極顯著（P<0.01）;與陽性對照組比較，小鼠的痛閾增值有所提高，但差異不顯著。痛閾提高率隨劑量增加而提高。

3 結(jié)論與討論

炎癥是機(jī)體損傷所產(chǎn)生的防御反應(yīng)，主要由血管與細(xì)胞的應(yīng)答構(gòu)成，其本質(zhì)是清除與消滅引起損傷的各種致炎因子和促進(jìn)損傷的修復(fù)。二甲苯具有較強(qiáng)的化學(xué)刺激性，可使組織中肥大細(xì)胞等釋放組織胺、5-羥色胺等血管活性胺類，引起局部組織中微血管擴(kuò)張和通透性升高;在炎癥過程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞自身的損傷可使組織液外滲，引起水腫[5]。黃芩的抗炎作用與炎癥因子前列腺素（PG）E2的產(chǎn)生和釋放受抑制有關(guān)，其抗炎機(jī)制為黃芩素通過抑制前列腺素E2、12-羥基二十四碳四烯酸、白三烯的生物合成而影響花生四烯酸代謝達(dá)到抗炎目的[6]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芩水煎醇沉液對炎癥過程中的腫脹具有明顯的抑制作用，給藥組小鼠耳廓腫脹程度明顯低于生理鹽水組和地塞米松組，其抗炎效果與劑量呈正相關(guān)。

痛覺是動(dòng)物機(jī)體對傷害性和疾病的一種信號，從而引起一系列的防御性和保護(hù)性反應(yīng)。各種傷害性刺激首先引起組織釋放一些致痛物質(zhì)，如K+、H+、組織胺、5-羥色胺、緩激肽、前列腺素等，作用于游離的神經(jīng)末梢，產(chǎn)生痛覺沖動(dòng)，上傳至中樞引起痛覺。本試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芩對小鼠有一定的鎮(zhèn)痛作用，腹腔注射的作用強(qiáng)于灌胃，且黃芩水煎醇沉液對小鼠的鎮(zhèn)痛作用存在劑量依賴關(guān)系，隨著劑量的增大，鎮(zhèn)痛作用逐漸增強(qiáng)。

參考文獻(xiàn)

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[3]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)出版社，2003：123-124.

[4]馮保明，戚南山，寧康健.銀杏葉對小鼠抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2008，3：9-11.

[5]宋繼謁.病理學(xué)（第二版）.北京：科學(xué)出版社，2000：54.

[6]王瑋，吳瑩瑤，盧巖，等.野黃芩苷抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，32（6）：503-504.

（責(zé)編：張宏民）