丹皮炭飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

蘇 靜，胡云飛，劉蘇情

(1 國(guó)家中藥材產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，安徽 亳州 236800；2 亳州學(xué)院，安徽 亳州 236800；3 亳州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，安徽 亳州 236800)

丹皮炭為毛茛科植物牡丹PacoeoniaSuffttuticosaAndr.的干燥根皮的炮制加工品[1]。選擇栽培3～5年的牡丹，于秋季或春初采挖，洗凈泥土，除去細(xì)根和泥沙，剝?nèi)「ぃ瑫窀苫蚬稳ゴ制?，除去木心，曬干。前者?xí)稱連丹皮，后者習(xí)稱刮丹皮。取凈牡丹皮片(連丹皮、刮丹皮均可)，置熱鍋內(nèi)，用中火炒至外部焦黑色，內(nèi)部黃褐色，噴淋清水少許，滅盡火星，取出，及時(shí)攤晾，涼透。牡丹皮在《中國(guó)藥典》2015年版內(nèi)收載，而其炮制品丹皮炭在《中國(guó)藥典》2015年版未收載[2]。目前對(duì)于丹皮炭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究報(bào)道多不全面，且專屬性不強(qiáng)[3-5]。本文擬通過性狀觀察法、顯微觀察法、TLC法、UPLC法對(duì)丹皮炭的鑒別、浸出物及含量測(cè)定等進(jìn)行分析，進(jìn)而制定方法可行、結(jié)果可靠的丹皮炭飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料和試劑

1.1 儀 器

XP205電子天平，瑞士mettler-toledo公司；S180H型超聲波清洗機(jī)，德國(guó)Elma公司；FD115型熱風(fēng)循環(huán)烘箱，德國(guó)Binder公司；SX2-4-10G型箱式電阻爐，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；DM750顯微鏡，德國(guó)Leica公司；Linomat 5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀，瑞士CAMAG公司；TLC Visualizer薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)，瑞士CAMAG公司。

1.2 試 藥

表1 丹皮炭樣品來(lái)源

分別從成都荷花池、安徽亳州、阜陽(yáng)、銅陵等地收集共10批丹皮炭中藥飲片，均經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)周建理教授鑒定為毛茛科植物牡丹PacoeoniaSuffttuticosaAndr.的干燥根皮的炒制加工品，見表1。丹皮酚對(duì)照品(批號(hào)110708-201908，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度99.8%)，丙酮(色譜純)，水(超純水)，所用其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 性 狀

本品為圓形或半圓形的薄片，表面黑褐色，內(nèi)部褐色。質(zhì)堅(jiān)脆。氣芳香，味苦、澀。如圖1所示。

圖1 丹皮炭飲片性狀圖

2.2 顯微鑒別

本品粉末深黑色。淀粉粒數(shù)量眾多，單粒類圓形或多角形，直徑3～16 μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、裂縫狀或飛鳥狀；復(fù)粒由2～6分粒組成?？梢姴菟徕}簇晶，直徑9～45 μm。有時(shí)含晶細(xì)胞連接，簇晶排列成行，或一個(gè)細(xì)胞含數(shù)個(gè)簇晶。結(jié)果見圖2。

圖2 丹皮炭橫切面顯微圖

2.3 TLC鑒別-丹皮酚法

取丹皮酚對(duì)照品(批號(hào)110708-200506，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度99.8%)，加丙酮制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液S。展開槽：5 cm×20 cm×10 cm，薄層板：硅膠G板(TLC Silica gel 60)(規(guī)格：20 cm×10 cm來(lái)源：Merck批號(hào)：HX68412026)展開劑：環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4∶1∶0.1)點(diǎn)樣量10 μL，展距：8.6 cm，檢視方式：取出，晾干，噴以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

圖3 丹皮炭薄層圖

2.4 浸出物測(cè)定

按照醇溶性浸出物測(cè)定法(中國(guó)藥典2015年版通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定。結(jié)果：10批樣品的浸出物為10.4%～14.7%。

表2 丹皮炭浸出物結(jié)果

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件

色譜柱：UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm，美國(guó)Waters公司)；流動(dòng)相為0.1%醋酸(A)-乙腈(B)梯度洗脫(0～10 min，5%～30% B；10～12 min，30%～50% B；12.1～15.0 min，30% B；15.0～15.8 min，5% B)，流速0.4 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，進(jìn)樣量2 μL，柱溫30 ℃。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取丹皮酚約2.5 mg，置同一10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.5.3 供試品溶液的制備

精密稱取取1.0 g粉末(過四號(hào)篩)，精密加甲醇50 mL，溫度60 ℃下超聲處理(功率400 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，補(bǔ)重，過濾，續(xù)濾液即得。

2.5.4 線性方程繪制

精密量取混合對(duì)照品溶液1、2、3、4、5 mL置50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。各取2 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。丹皮酚回歸方程為Y=41.015X-14.234，r=0.997。結(jié)果：丹皮酚在濃度5～25 μg/mL范圍圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取標(biāo)樣(濃度約為20 μg/mL)2 μL重復(fù)進(jìn)樣，計(jì)算峰面積RSD為0.6%，結(jié)果表明精密度良好。

2.5.6 穩(wěn)定性情況試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、18 h進(jìn)樣，考察其峰面積RSD為1.1%，表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液，制備6份供試品溶液，分別測(cè)定含量結(jié)果，其RSD為1.7%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.8 加標(biāo)回收率考察

精密稱取已知含量樣品6份，每份0.5 g。分別加入丹皮酚對(duì)照品適量，制備檢測(cè)。丹皮酚平均回收率為96.1%，RSD為1.71%。

2.5.9 含量測(cè)定結(jié)果

表3 丹皮炭含量測(cè)定結(jié)果

圖4 HPLC圖譜

3 結(jié) 論

中藥療效取決于其化學(xué)成分(群)的特征，中藥質(zhì)量依賴于其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性[6-9]。通過對(duì)10批丹皮炭的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，初步擬定，浸出物不得少于9.0%。對(duì)10批樣品均作了粉末顯微特征研究，本品粉末深黑色。淀粉粒數(shù)量眾多，單粒類圓形或多角形，直徑3～16 μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、裂縫狀或飛鳥狀；復(fù)粒由2～6分粒組成?？梢姴菟徕}簇晶，直徑9～45 μm。有時(shí)含晶細(xì)胞連接，簇晶排列成行，或一個(gè)細(xì)胞含數(shù)個(gè)簇晶。從而標(biāo)準(zhǔn)中把粉末的顯微特征作為主要鑒別點(diǎn)。

TLC條件選擇在環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4∶1∶0.1)，點(diǎn)樣量10 μL，噴以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱的條件下，樣品分離度高，斑點(diǎn)清晰。

HPLC實(shí)驗(yàn)探討，提取條件考察了溶劑、溫度等影響因素，確定了提取條件以及色譜分離條件，初步擬定丹皮酚不得少于0.06%。但由于不同樣品隨著炮制程度及樣品來(lái)源的不同。加之丹皮炭炮制后相較于牡丹皮藥性已發(fā)生顯著變化，更加偏于止血，因而是否作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)值得進(jìn)一步探索，但為丹皮炭的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)[10-11]。

本次研究丹皮炭飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)包括性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別、浸出物及丹皮酚的含量測(cè)定等內(nèi)容，建立方法簡(jiǎn)單、可行，重復(fù)性好，可使用于控制丹皮炭飲片質(zhì)量。