絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1、核因子κB 在前列腺癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系

郝昌軍，胡婷婷

鞍鋼集團(tuán)公司總醫(yī)院1泌尿外科，2腫瘤科，遼寧 鞍山 114003

前列腺癌嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量，長(zhǎng)期吸煙的患者，前列腺癌的發(fā)病率明顯升高[1-2]。在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中存在腫瘤調(diào)控相關(guān)蛋白的改變，在前列腺癌的診療過程中發(fā)揮作用。人絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1（serine and arginine rich splicing factor 1，SRSF1）可刺激腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常轉(zhuǎn)錄和腫瘤細(xì)胞核DNA的分裂[3]。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是腫瘤基因增殖調(diào)控因子，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞紡錘體的分裂，能夠加劇腫瘤細(xì)胞的分化調(diào)控異常[4]。研究顯示，前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率可明顯升高[5]，但對(duì)SRSF1的研究較少。本研究旨在探討SRSF1、NF-κB蛋白在前列腺癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年9月至2018年9月鞍鋼集團(tuán)公司總醫(yī)院收治的前列腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合《NCCN前列腺癌臨床實(shí)踐指南亞洲共識(shí)（V2.2013版）》[6]中的關(guān)于前列腺癌及前列腺良性增生的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)；③手術(shù)前均未接受放化療、激素相關(guān)治療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他部位腫瘤轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的前列腺癌；②合并泌尿系統(tǒng)其他部位、直腸、腹腔等其他部位或器官的惡性腫瘤；③伴有自身免疫系統(tǒng)疾病、類風(fēng)濕性疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入70例前列腺癌患者和70例前列腺良性增生患者。前列腺癌患者年齡51～82歲，平均年齡為（65.6±6.1）歲，TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期27例，Ⅲ期24例，Ⅳ期3例；前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）水平：≥10.0 ng/ml 44例，＜10.0 ng/ml 26例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，無淋巴細(xì)胞專業(yè)36例；Gleason評(píng)分：≤7分35例，＞7分35例。前列腺良性增生患者年齡47～80歲，平均年齡（64.8±5.8）歲。兩組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。取前列腺癌患者的前列腺癌組織，前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織。

1.2 免疫組化法檢測(cè)SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達(dá)情況

取前列腺癌組織和前列腺良性增生組織石蠟切片，3%過氧化氫孵育20 min，蛋白封閉后，加入一抗（稀釋濃度為1∶500）5 ml，37 ℃孵育2 h，加入生物素?zé)晒鈽?biāo)記的二抗（稀釋濃度為1∶2000）3 ml，37℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min。加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的鏈霉卵白素，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，自來水沖洗，復(fù)染，封片。

1.3 結(jié)果判定

SRSF1蛋白定位于細(xì)胞膜，NF-κB蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色、棕黃色、褐色顆粒為陽性表達(dá)。根據(jù)細(xì)胞的著色程度進(jìn)行評(píng)分：未著色為0分，淡黃色染色為1分，棕黃色染色為2分，褐色或黑色染色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分：陽性細(xì)胞所占比例≤10%為1分，陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分，陽性細(xì)胞所占比例為51%～75%為3分，陽性細(xì)胞所占比例＞75%為4分。著色程度評(píng)分與陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組織和前列腺良性增生組織中SRSF1、NF-κB 蛋白陽性表達(dá)率的比較

前列腺癌組織中SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率均高于前列腺良性增生組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 列腺癌組織和前列腺良性增生組織中SRSF1、NF-κB蛋白陽性表達(dá)率的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織SRSF1、NF-κB蛋白陽性表達(dá)率的比較

不同PSA水平前列腺癌患者前列腺癌組織中SRSF1蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、Gleason評(píng)分前列腺癌患者前列腺癌組織中SRSF1蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同PSA水平、Gleason評(píng)分前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達(dá)情況

3 討論

前列腺移行上皮細(xì)胞的異常病變，可導(dǎo)致泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)上升，在長(zhǎng)期吸煙或高齡男性人群中，前列腺癌的發(fā)病率逐年上升[7]。前列腺癌能夠明顯降低患者的生活質(zhì)量，并降低前列腺癌患者3年及5年生存率[8-9]。通過評(píng)估前列腺癌患者的臨床特征，能夠在前列腺癌的診療及預(yù)后隨訪方面發(fā)揮作用。雖然PSA等指標(biāo)能夠在前列腺癌的病情評(píng)估中發(fā)揮作用，但臨床價(jià)值不甚滿意，其對(duì)前列腺癌病情評(píng)估的靈敏度不足45%[10-11]。轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子或核相關(guān)因子，能夠在前列腺移行上皮細(xì)胞的病變過程中發(fā)揮作用。本研究通過對(duì)前列腺癌患者前列腺癌組織中SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達(dá)情況，闡述前列腺癌的疾病進(jìn)展機(jī)制，同時(shí)還能夠?yàn)榕R床上前列腺癌的臨床病理特征的評(píng)估提供依據(jù)。

SRSF1是蛋白修飾調(diào)控因子，其蛋白4級(jí)空間結(jié)構(gòu)上含有多個(gè)絲氨酸及精氨酸結(jié)構(gòu)，能夠在蛋白構(gòu)象的修飾的過程中發(fā)揮作用。SRSF1蛋白具有對(duì)腫瘤細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)第二信使的激活作用，能夠明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞核DNA的分裂，增加腫瘤細(xì)胞非對(duì)稱分裂的風(fēng)險(xiǎn)[12]；NF-κB蛋白是核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，具有為此腫瘤細(xì)胞干性的作用，可阻礙腫瘤細(xì)胞核的分化成熟。NF-κB蛋白還能夠影響腫瘤細(xì)胞的黏附和浸潤(rùn)能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化[13]。部分研究者探討了NF-κB蛋白在前列腺癌患者中的表達(dá)情況[14]，但對(duì)NF-κB蛋白與前列腺癌臨床特征的關(guān)系研究不足。

本研究結(jié)果顯示，前列腺癌組織中SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率均高于前列腺良性增生組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明SRSF1、NF-κB蛋白在前列腺癌患者中的表達(dá)水平較高，這主要是因?yàn)镾RSF1、NF-κB蛋白表達(dá)陽性率升高，能夠加劇腫瘤細(xì)胞核周圍轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子的激活程度，最終促進(jìn)腫瘤細(xì)胞膜的調(diào)控失常。研究發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌患者前列腺癌組織中，SRSF1蛋白的陽性表達(dá)率可超過50%，在合并明顯腹腔轉(zhuǎn)移的患者中，SRSF1蛋白的陽性表達(dá)率可翻倍上升[15]。在探討SRSF1、NF-κB蛋白的表達(dá)與前列腺癌患者臨床特征的關(guān)系過程中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Gleason評(píng)分＞7分的前列腺癌患者中，SRSF1蛋白的陽性表達(dá)率較高，表明SRSF1蛋白的表達(dá)能夠明顯影響前列腺癌臨床病理特征的進(jìn)展，這主要由于SRSF1蛋白能夠提高前列腺移行上皮細(xì)胞對(duì)局部淋巴結(jié)內(nèi)皮組織的黏附能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異型性的惡化，最終促進(jìn)組織學(xué)分級(jí)及Gleason評(píng)分的惡化。本研究結(jié)果顯示，不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這主要是由于NF-κB蛋白能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，提高了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)能力，最終促進(jìn)了前列腺癌臨床病理特征的進(jìn)展。但并未發(fā)現(xiàn)NF-κB蛋白在不同Gleason評(píng)分中的表達(dá)差異，提示NF-κB蛋白并不會(huì)影響到腫瘤細(xì)胞的分化成熟過程。

綜上所述，前列腺癌組織中的SRSF1、NF-κB蛋白表達(dá)水平和陽性表達(dá)率均較高，SRSF1蛋白的表達(dá)可能與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和Gleason評(píng)分，NF-κB蛋白的表達(dá)可能與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。