A群C群腦膜炎球菌多糖疫苗在廣東省2～6歲兒童的免疫原性和免疫持久性研究*

范仁鋒， 湯妍， 蘇家立， 夏艷輝， 黃竹航， 李苑， 曾培宇， 張吉?jiǎng)P△

1廣東省生物制品與藥物研究所(廣東廣州 510440)； 2高州市疾病預(yù)防控制中心(廣東茂名 525000)

流行性腦脊髓膜炎(epidemic cerebrospinal meningitis)簡(jiǎn)稱(chēng)流腦，是由腦膜炎奈瑟菌引起的經(jīng)呼吸道傳播的一種化膿性腦膜炎[1]。流腦的發(fā)病率有明顯的年齡分布特征，一般易發(fā)于低年齡段兒童。15歲以下的少年兒童發(fā)病占75%以上，主要以5歲以下兒童高發(fā)。流腦迄今仍是全世界一個(gè)主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，其病死率高達(dá)10%～15%，且有高達(dá)20%的治愈患者會(huì)出現(xiàn)長(zhǎng)期的后遺癥[2-3]。接種疫苗是控制流腦的有效手段。我國(guó)既往流行的流腦菌株以A群為主，近年來(lái)，C群流腦發(fā)病率逐步上升，在局部地區(qū)流行或爆發(fā)[4]。因此加強(qiáng)2-6歲兒童A群、C群的流腦預(yù)防很有必要。廣東省疾病預(yù)防控制中心和廣東省生物制品與藥物研究所于2013年9月至2016年6月在廣東省高州市對(duì)2～6歲兒童進(jìn)行了A群C群腦膜炎球菌多糖疫苗(MPV-AC)免疫原性和免疫持久性研究，為疫苗的使用，預(yù)防流腦流行提供參考，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇廣東省高州市作為研究現(xiàn)場(chǎng)。以研究對(duì)象監(jiān)護(hù)人知情同意、自愿參與為原則。研究對(duì)象為2～6歲的健康兒童，符合臨床研究入選和排除標(biāo)準(zhǔn)。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)2～6歲健康兒童；(2)經(jīng)查問(wèn)病史、體檢和臨床判定無(wú)接種禁忌證者；(3)受試者監(jiān)護(hù)人能遵守臨床試驗(yàn)方案的要求；(4)腋下體溫≤37.0 ℃。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)對(duì)疫苗的成分過(guò)敏者；(2)癲癇、腦部疾患及有過(guò)敏史者、腎臟病、心臟病、活動(dòng)性結(jié)核患者及HIV感染者；(3)急性傳染病及發(fā)熱者；(4)在入選前7 d內(nèi)接受過(guò)免疫球蛋白注射者。

該項(xiàng)目通過(guò)廣東省疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究倫理審查委員會(huì)審查批準(zhǔn)，獲得倫理批件(批件號(hào)：2013V002-F01)。

1.2 疫苗及免疫程序 本研究用疫苗為某制藥公司生產(chǎn)的MPV-AC，經(jīng)中國(guó)食品藥品檢定研究院檢定符合要求并獲得批簽發(fā)(批簽中檢20131402)。該疫苗為凍干劑型，規(guī)格為100 μg/瓶，含A群、C群腦膜炎球菌多糖各50 μg，批號(hào)：201212023，有效期至2014.12.23。符合條件的對(duì)象于上臂外側(cè)三角肌附著處皮下注射1劑疫苗，劑量為0.5 mL/劑。

1.3 血清采集及檢測(cè) 分別于免疫前、免疫后1個(gè)月、免疫后2年各采集靜脈血3.0 mL，分離血清置-20 ℃以下保存；采用世界衛(wèi)生組織推薦的腦膜炎球菌抗體血清殺菌力試驗(yàn)測(cè)定免疫前后血清抗體效價(jià)，A群、C群腦膜炎球菌血清殺菌力抗體檢測(cè)由中國(guó)食品藥品檢定研究院負(fù)責(zé)；血清起始稀釋度為1∶2。

1.4 結(jié)果判斷 抗體滴度為陰性或未檢出的即<1∶2按1∶1計(jì)算，血清抗體滴度<1∶8為陰性，血清抗體滴度≥1∶8為陽(yáng)性。免疫前抗體陰性，免疫后抗體陽(yáng)性，或免疫前抗體陽(yáng)性，免疫后抗體滴度≥4倍增長(zhǎng)為抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)。計(jì)算各個(gè)采樣時(shí)間受試者血清抗體的滴度頻數(shù)分布、免疫前后抗體幾何平均滴度(GMT)和免疫后陽(yáng)性率/陽(yáng)轉(zhuǎn)率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用EpiData3.1軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)并錄入，采用SPSS 13統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?？贵w滴度經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后用配對(duì)t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05(雙側(cè))，P≤0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對(duì)象的基本情況 本研究共有578例受試者簽署了知情同意書(shū)并接種疫苗，其中529例受試者依從性良好，并于免疫前、免疫后1個(gè)月采集了血清，男269人，女260人，男女性別比例為1.04∶1，受試者平均年齡為(3.342±1.241)歲，受試者人口學(xué)基線(xiàn)數(shù)據(jù)均符合方案的要求。404例受試者采集了免疫后2年血清，共計(jì)125人脫落，脫落率為21.63%(125/578)。

2.2 受試者血清抗體滴度分布情況分析 受試者免疫前血清經(jīng)2倍稀釋后，A群、C群抗體滴度分布范圍均為1∶1～1∶512，A群、C群抗體陰性的受試者分別占84.31%(446/529)和94.51%(500/529)。

受試者免疫后1個(gè)月，A群、C群抗體滴度分布范圍為1∶1～1∶4096，A群、C群抗體陰性的受試者A群、C群分別占9.64%(51/529)和7.75%(41/529)。

受試者免疫后2年，A群、C群抗體滴度分布范圍為1∶1～1∶2 048，A群、C群抗體陰性的受試者A群、C群分別占80.44%(325/404)和79.46%(321/404)。詳見(jiàn)表1。

2.3 受試者免疫前后抗體GMT評(píng)價(jià) 受試者免疫前、免疫后1個(gè)月、免疫后2年的A群抗體GMT分別為1∶1.691、1∶103.249和1∶2.149；免疫后1個(gè)月抗體GMT與免疫前比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=43.583，P<0.001)，免疫后2年抗體GMT與免疫后1個(gè)月、免疫前比均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=34.445，P<0.001；t=2.470，P=0.014)。

受試者免疫前、免疫后1個(gè)月、免疫后2年的C群抗體GMT分別為1∶1.241、1∶122.905和1:2.366，免疫后1個(gè)月抗體GMT與免疫前比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=52.732，P<0.001)，免疫后2年抗體GMT與免疫后1個(gè)月、免疫前比均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=34.786，P<0.001；t=7.126，P<0.001)。詳見(jiàn)表2、表3。

表1 受試者免疫前后抗體滴度頻數(shù)分布

注：*抗體滴度<1∶2以1∶1計(jì)算

表2 受試者免疫前后抗體GMT變化情況

2.4 受試者免疫前后抗體陽(yáng)性率/陽(yáng)轉(zhuǎn)率分析 受試者免疫前、免疫后1個(gè)月、免疫后2年A群抗體陽(yáng)性率分別為15.69%(83/529)、90.36%(478/529)和19.55%(79/404)，免疫后1個(gè)月抗體陽(yáng)性率與免疫前比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，免疫后2年抗體陽(yáng)性率與免疫后1個(gè)月比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，與免疫前比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.123)。受試者免疫前、免疫后1個(gè)月、免疫后2年C群抗體陽(yáng)性率分別為5.48%(29/529)、92.25%(488/529)、20.54%(83/404)，免疫后1個(gè)月抗體陽(yáng)性率與免疫前比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，免疫后2年抗體陽(yáng)性率與免疫后1個(gè)月比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，與免疫前比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。受試者免疫后1個(gè)月A群、C群抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別為89.60%(474/529)和90.93%(481/529)。詳見(jiàn)表4、表5。

表3 受試者免疫前后抗體GMT組間比較結(jié)果

注：行經(jīng)對(duì)數(shù)變換后的成組t檢驗(yàn)

表4 免疫前后A群、C群抗體陽(yáng)性率/陽(yáng)轉(zhuǎn)率

3 討論

2008年，我國(guó)將MPV-A及MPV-AC納入國(guó)家免疫規(guī)劃，對(duì)適齡兒童進(jìn)行常規(guī)免疫接種[5-6]。隨著大規(guī)模的接種MPV-A及MPV-AC，流腦的發(fā)病率逐年下降，但流腦流行的威脅仍存在。本研究通過(guò)對(duì)MPV-AC免疫原性和免疫持久性研究可以了解疫苗免疫原性和人群免疫狀況，有利于預(yù)防流腦的流行及為采取防治措施提供依據(jù)。

表5 免疫前后A群、C群抗體陽(yáng)性率組間比較結(jié)果

本研究結(jié)果顯示，接種MPV-AC后1個(gè)月，受試者的A群和C群流腦抗體GMT和陽(yáng)性率顯著高于免疫前，A群和C群抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別為89.60%和90.93%，說(shuō)明該年齡段兒童接種疫苗后抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率較高，形成了免疫屏障，兒童接種疫苗后有較好的免疫效果。閆紹宏等[7]選取扎魯特旗5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)不同年齡組人群接種1劑MPV-AC，免疫后4周采用流腦血清抗體殺菌試驗(yàn)測(cè)定疫苗免疫后血清抗體，其中2～5歲組接種MPV-AC后1個(gè)月A群和C群抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別為100%和98.4%；鄭佳等[2]、何莉等[8]、陶紅等[9]、徐鷺等[10]也研究發(fā)現(xiàn)2～17歲兒童和青少年接種1劑MPV-AC，免疫后1個(gè)月A群和C群的陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別為91%～100%和77%～98%，這與本研究的結(jié)果相近。

在免疫持久性方面，本研究受試者免疫后2年A群、C群的抗體陽(yáng)性率分別為19.55%和20.54%。免疫2年后抗體GMT和抗體陽(yáng)性率比免疫后1個(gè)月明顯下降，接近免疫前水平，但A群和C群免疫后2年抗體GMT與免疫前比仍差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。何莉等[7]的研究顯示6～24歲月齡嬰幼兒接種1劑國(guó)產(chǎn)MPV-AC后1年A群和C群陽(yáng)性率分別為24%和20%，5～13歲兒童接種1劑國(guó)產(chǎn)MPV-AC后1年A群和C群陽(yáng)性率分別91%和90%，結(jié)果表明MPV-AC對(duì)5歲以上人群有良好的免疫原性和免疫持久性，且2歲以下幼兒在免疫后殺菌抗體GMT、4倍增長(zhǎng)、免疫持久性均比5～13歲組低。張春曉等[11]也發(fā)現(xiàn)流腦疫苗抗體反應(yīng)與年齡大小有一定的關(guān)系，大年齡組的免疫反應(yīng)明顯比小年齡組的好。流腦多糖疫苗是非依賴(lài)性胸腺抗原，不會(huì)產(chǎn)生免疫記憶，其產(chǎn)生的抗體持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)[11]。本研究免疫后2年A群和C群的抗體較低的原因可能是因?yàn)檠芯咳巳旱钠骄挲g年齡偏小，接種MPV-AC后，免疫保護(hù)時(shí)間較短。

此外，本研究受試者的脫落率為21.63%，脫落的原因主要是受試者外出失訪(fǎng)，脫落人數(shù)對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果可能會(huì)造成一定偏倚。

綜上所述，MPV-AC在廣東省2～6歲兒童中免疫后在短期可以有良好的免疫應(yīng)答，可以預(yù)防流腦的發(fā)生。免疫后2年A群、C群抗體接近免疫前，建議在流腦流行季加強(qiáng)免疫。