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    豬病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

    2012-04-13 18:24:13王新山東省濟(jì)南市長清區(qū)平安獸醫(yī)站250306邢兆苗山東省濟(jì)南市長清區(qū)歸德獸醫(yī)站
    山東畜牧獸醫(yī) 2012年10期
    關(guān)鍵詞:棉簽方格紙片

    王新 (山東省濟(jì)南市長清區(qū)平安獸醫(yī)站 250306) 邢兆苗 (山東省濟(jì)南市長清區(qū)歸德獸醫(yī)站)

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    豬病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

    王新 (山東省濟(jì)南市長清區(qū)平安獸醫(yī)站 250306) 邢兆苗 (山東省濟(jì)南市長清區(qū)歸德獸醫(yī)站)

    1 豬的血尿診斷

    1.1 尿中的潛血檢查

    腎、膀胱及尿路的出血性疾病以及溶血性疾病,如豬瘟、豬丹毒、新生仔豬溶血病等,在其尿液中均含有血液或血紅蛋白,但若僅有少量,肉眼直接看不到,必須借助化學(xué)方法來測定。常用聯(lián)苯胺測定法。

    1.1.1 原理 血紅蛋白中的鐵,具有過氧化物酶的作用,可分解過氧化氫放出氧,使聯(lián)苯胺氧化呈綠色或藍(lán)色。

    1.1.2 試劑 (1)聯(lián)苯胺冰醋酸飽和液;(2)3%過氧化氫溶液。

    1.1.3 測定方法 取被檢尿液3~5ml,置潔凈試管中煮沸,以破壞其他可能存在的過氧化物酶。冷卻后加入聯(lián)苯胺冰醋酸飽和液數(shù)滴,再加3%過氧化氫溶液數(shù)滴,混合,數(shù)秒鐘后即可呈現(xiàn)反應(yīng)。

    1.1.4 結(jié)果判定 若供檢尿呈綠色或藍(lán)色,為陽性反應(yīng),顏色的深度(綠、藍(lán)綠、藍(lán)色、深藍(lán)),可表示反應(yīng)的強(qiáng)弱。若5min后仍不變色,則為陰性反應(yīng)。

    1.2 糞中的潛血檢查

    糞便中潛血陽性,見于胃潰瘍、胃穿孔及胃腸道的出血性疾病。

    1.2.1 原理與試劑 與尿的潛血檢查相同。

    1.2.2 測定方法 取潔凈棉簽兩根,滴以生理鹽水,一支棉簽上涂糞,另一支作對照,均置酒精燈上加溫片刻,以破壞可能存在的幾種過氧化物酶。待冷,各加1%聯(lián)苯胺冰醋酸溶液及3%過氧化氫液各2滴,觀察顏色出現(xiàn)的快慢及深淺。

    1.2.3 結(jié)果判定 如果涂糞棉簽呈藍(lán)色,而對照棉簽顏色不變,為陽性反應(yīng);假若兩支棉簽均呈藍(lán)色,為假陽性反應(yīng);若兩支棉簽均不變色,為陰性反應(yīng)。檢驗(yàn)結(jié)果,可按以下規(guī)定記錄:加試劑后立即出現(xiàn)深藍(lán)或深綠色者為最強(qiáng)陽性反應(yīng)。加試劑后初現(xiàn)淺藍(lán)色,0.5min內(nèi)漸現(xiàn)深藍(lán)或深綠色者,為強(qiáng)陽性反應(yīng)。

    1.3 糞便的顯微鏡檢查

    本法是借助顯微鏡觀察檢查糞便中的寄生蟲蟲卵和幼蟲,同時(shí)也可了解到被檢豬的消化能力和胃腸道有無炎癥病變。直接涂片法:取潔凈載玻片1片,先滴1大滴生理鹽水(若用50%甘油水溶液更好),再以竹簽挑取被檢糞便少許,與載玻片上的生理鹽水混勻,涂成薄層,即可鏡檢。本法簡便易行,常用于檢查糞便中有無寄生的蠕蟲卵,由于取糞量很少,檢出率較低,所以要求每個(gè)樣品多涂5~6片。若在涂片中同時(shí)見到多量的紅細(xì)胞和白細(xì)胞,則表示腸道有炎癥。

    2 豬的血液常規(guī)檢查

    血液常規(guī)檢查的項(xiàng)目有多種,但是目前用于豬病診斷的項(xiàng)目不多,常用的有血紅蛋白含量測定、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等。必須指出的是,血液常規(guī)檢查僅僅是為臨診診斷提供一些數(shù)據(jù),是一種輔助診斷手段,在操作時(shí)要嚴(yán)格遵循操作規(guī)程和注意事項(xiàng),力求準(zhǔn)確,避免差錯(cuò),同時(shí)應(yīng)與臨診檢查密切結(jié)合,才能得到正確的結(jié)論。

    2.1 血紅蛋白含量測定

    健康豬的血紅蛋白值為10.5g/100ml(變動(dòng)范圍9.5~ 12.0,若是血紅蛋白的含量增多,見于各種原因引起的血液濃縮,如劇烈的腹瀉、嘔吐、出大汗及某些中毒病。血紅蛋白含量降低,見于仔豬貧血及各種慢性消耗性疾病,如慢性豬瘟、仔豬蛔蟲病等

    2.2 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

    紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是將一定量供檢血經(jīng)一定倍數(shù)稀釋后,計(jì)算其一定容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù),并換算為每立方毫米血液的含量,健康豬的紅細(xì)胞數(shù)平均值為600萬/m3(變動(dòng)范圍為500~700萬)。紅細(xì)胞增多,為血液濃縮,如脫水、出大汗、胸膜炎的滲出期等;紅細(xì)胞減少,為各類貧血性的疾病或慢性消耗性的疾病。計(jì)算按下列公式進(jìn)行:每立方毫米血液內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)=x/80×400(小方格總數(shù))×稀釋倍數(shù)×10。x為計(jì)數(shù)5個(gè)中方格(80個(gè)小方格)的紅細(xì)胞數(shù)。如血液稀釋200倍,為計(jì)算方便,也可將計(jì)數(shù)5個(gè)中方格(80個(gè)小方格)內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù),乘以10000,即得每立方毫米血液內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。

    2.3 白細(xì)胞計(jì)數(shù)

    白細(xì)胞計(jì)數(shù),對某些疾病的輔助診斷有重要的意義。多數(shù)細(xì)菌性感染和炎癥,都能使白細(xì)胞增多,如豬丹毒、肺炎、鏈球菌感染等。而一些病毒性的傳染病則能使白細(xì)胞減少,如豬瘟、流行性感冒等;某些嚴(yán)重疾病的后期,機(jī)體高度衰竭時(shí),亦可見白細(xì)胞減少;長期應(yīng)用某種藥物(如氯霉素),也可引起白細(xì)胞減少。健康豬白細(xì)胞的平均值為13000個(gè)m3(變動(dòng)范圍為11000~16000個(gè))。方法:(1)取清潔、干燥的小試管1支,以0.5ml吸管準(zhǔn)確吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml,放入試管中。(2)稀釋血液。以血紅蛋白吸管準(zhǔn)確吸取供檢血液至20m3處,用干棉球擦去管尖外壁所附的血液,立即將被檢血吸入已裝稀釋液的試管底部,并吸取上清液反復(fù)洗凈沾在吸管內(nèi)壁上的血液數(shù)次,然后振搖試管1~2min,使血液與稀釋液充分混合,即可成為20倍稀釋的血液。(3)充液的步驟和操作,同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。(4)計(jì)數(shù)的方法與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同,但白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)用低倍顯微鏡即可,計(jì)數(shù)四角處4個(gè)大方格(每個(gè)大方格包括16個(gè)中方格)內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。

    3 細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和鑒定

    豬的細(xì)菌性疾病種類很多,危害不小,常見的細(xì)菌病有仔豬黃痢、白痢、豬水腫病、副傷寒、豬丹毒、豬肺疫、鏈球菌病等,其中有的疾病可以一目了然(如仔豬黃痢、白痢等),易于診斷,有些疾病則一時(shí)難以確診(如副傷寒、豬接觸傳染性胸膜肺炎等),而更多的細(xì)菌病是并發(fā)或繼發(fā)感染的,為了做到及時(shí)、正確地診斷豬病,規(guī)?;呢i場有必要開展細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和鑒定工作,同時(shí)還可將分離出的細(xì)菌,通過抑菌試驗(yàn)篩選出敏感性強(qiáng)、療效好的抗菌藥物進(jìn)行治療。掌握了細(xì)菌學(xué)的檢查技術(shù),還可開展對豬舍消毒效果的測定,飲用水、飼料中的細(xì)菌學(xué)檢查等項(xiàng)工作。

    化驗(yàn)室開展這項(xiàng)工作,需要一定的設(shè)備和條件,操作人員應(yīng)該具備獸醫(yī)微生物學(xué)的基本知識(shí)和實(shí)驗(yàn)室的操作技術(shù)、要求做到正確、熟練,其內(nèi)容包括病料的采集,細(xì)菌的分離培養(yǎng),形態(tài)觀察,生化試驗(yàn)和動(dòng)物接種試驗(yàn)等。

    4 藥物敏感試驗(yàn)

    抗菌藥物在諸病防治上已得到了廣泛的使用,但是對某種抗菌藥物長期或不合理地使用,可引起這些細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。如果盲目地濫用抗菌藥物,不僅造成藥物的浪費(fèi),同時(shí)也延誤了治療時(shí)機(jī)。藥物敏感試驗(yàn),是一項(xiàng)藥物體外抗菌作用的測定技術(shù),通過本試驗(yàn),可選用最敏感的藥物進(jìn)行臨珍治療,同時(shí)也可根據(jù)這一原理,測定抗菌藥物的質(zhì)量,以防偽劣假冒產(chǎn)品的過期失效藥物進(jìn)入豬場。常用的藥敏感試驗(yàn)的方法有紙片法等三種,具體介紹一種:紙片法。各種抗菌藥物的紙片,市場有售,是一種直徑6mm的圓形小紙片,要注意密封保存,藏于陰暗干燥處,切勿受潮。注意有效期,一般不超6個(gè)月。

    4.1 試驗(yàn)材料

    經(jīng)分離和鑒定后的純培養(yǎng)菌株,營養(yǎng)肉湯,瓊脂平皿,棉拭子,鑷子,酒精燈,藥敏紙片若干。

    4.2 試驗(yàn)步驟

    將測定菌株接種到營養(yǎng)肉湯中,置37~c條件下培養(yǎng)12h,取出備用。用無菌棉蘸取上述菌液,均勻涂于瓊脂平皿上。待培養(yǎng)基表面稍干后,用無菌鑷子分別取所需的藥敏紙片均勻貼在培養(yǎng)基的表面,輕輕壓平。將培養(yǎng)皿置37℃溫箱12~18h后,測量各種藥敏紙片抑菌圈直徑的大小。

    (2012–06–21)

    S858.28

    B

    1007-1733(2012)10-0048-02

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