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    五邑地區(qū)910例親子鑒定案件突變分析

    2020-06-29 12:38:26麥柏盛
    法制與社會(huì) 2020年16期
    關(guān)鍵詞:突變親子鑒定

    關(guān)鍵詞 五邑地區(qū) 親子鑒定 突變 STR

    作者簡(jiǎn)介:麥柏盛,廣東天地方正司法鑒定中心,研究方向:法醫(yī)物證學(xué)。

    中圖分類(lèi)號(hào):D919 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI:10.19387/j.cnki.1009-0592.2020.06.021

    親權(quán)關(guān)系鑒定在法醫(yī)鑒定實(shí)踐中較為常見(jiàn),如何提高親權(quán)關(guān)系鑒定的科學(xué)性、權(quán)威性對(duì)法醫(yī)鑒定具有重要的意義。常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)因其具有較高的擴(kuò)增成功率,且具有極高的檢測(cè)靈敏度和可重復(fù)利用等優(yōu)勢(shì),在親權(quán)關(guān)系鑒定、個(gè)體差異化識(shí)別以及群體遺傳學(xué)研究等方面用途廣泛。目前,法醫(yī)親權(quán)關(guān)系與群體遺傳學(xué)研究已將常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)作為重要的遺傳標(biāo)記之一,廣泛應(yīng)用于法醫(yī)鑒定實(shí)踐中。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)雖具有較高的擴(kuò)增成功率,但其突變頻發(fā),,如根據(jù)2008年美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)公布的相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示,父源基因突變率在美國(guó)人群中達(dá)到0.007%-0.371%。而國(guó)內(nèi)相關(guān)研究報(bào)告顯示,國(guó)內(nèi)父源基因突變率處于0.008%-0.344%之間,由此可見(jiàn),在法醫(yī)鑒定實(shí)踐中,尤其是親權(quán)關(guān)系鑒定過(guò)程中,在利用常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)作為遺傳標(biāo)記使用過(guò)程中,需要考慮其突變事件發(fā)生率。為更好地研究不同地區(qū)常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變現(xiàn)象和基礎(chǔ)遺傳學(xué)信息,本文以五邑地區(qū)910例親子鑒定案件作為研究對(duì)象,采用Chelex-100法提取樣本的DNA,并用熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒MicroreaderTM21Direct ID System進(jìn)行復(fù)合PCR擴(kuò)增。在此基礎(chǔ)上分析突變等位基因的類(lèi)型以及基因突變發(fā)生情況,以此為親權(quán)關(guān)系等法醫(yī)鑒定實(shí)踐提供參考?,F(xiàn)將具體研究報(bào)告匯報(bào)如下。

    一、資料與方法

    (一)一般資料

    選取五邑地區(qū)910例親子鑒定樣本作為研究對(duì)象,910例樣本均為司法親子鑒定案件中收集獲得,其中895例案件為“支持”案件,單親鑒定有234例,雙親鑒定有661例,男性665例,女性230例,年齡主要分布在18-48歲,平均年齡(32?.1)歲。以上述樣本中的生物取樣為標(biāo)本,具體包括肋軟骨、血斑、帶毛囊毛發(fā)、唾液以及唾液斑等等。

    (二)檢驗(yàn)儀器與試劑

    ABI9700 PCR儀(Applied Biosystems美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)、ABI3130型基因分析儀(Applied Biosystems美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)、MicroreaderTM21Direct ID System(蘇州閱微基因技術(shù)有限公司)、MicroreaderTM 23sp ID System試劑盒作為補(bǔ)充試劑盒等。

    (三)方法

    1.DNA分型檢測(cè)

    按照中華人民共和國(guó)公共安全行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范》(GA/T 383-2014)附錄A中的Chelex-100法提取上述樣本的DNA。取上述樣本的DNA提取產(chǎn)物適量,用熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒MicroreaderTM21Direct ID System(蘇州閱微基因技術(shù)有限公司,位點(diǎn)包括D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、D2S441、vWA、D8S1179、TPOX、Penta E、TH01、D12S391、D2S1338、FGA)進(jìn)行復(fù)合PCR擴(kuò)增(操作步驟按試劑盒說(shuō)明),并設(shè)立陰性及陽(yáng)性對(duì)照。擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用ABI3130型基因分析儀(Applied Biosystems美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)進(jìn)行電泳分離,用Gene Mapper基因座分型軟件對(duì)電泳數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,得到上述樣本的基因分型。

    2.突變基因座判別

    采取平行驗(yàn)證的方法,利用MicroreaderTM 21 Direct ID System試劑盒,使用MicroreaderTM 23sp ID System試劑盒為補(bǔ)充試劑盒以開(kāi)展重復(fù)檢測(cè)對(duì)不符合遺傳規(guī)律的突變事件予以判定。若存在1-2個(gè)不符合遺傳規(guī)律基因座的突變案例,則按照GB/T37223-2018《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》和GA/T965-2011《法庭科學(xué)DNA親子鑒定規(guī)范》中親權(quán)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)方法,并利用不同廠家生產(chǎn)的試劑盒,對(duì)常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),若常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)符合遺傳規(guī)律時(shí),當(dāng)累積親權(quán)指數(shù)>10000時(shí)支持存在親權(quán)關(guān)系。其中突變基因座則認(rèn)為為不符合遺傳規(guī)律的基因座。

    (四)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0 和MicrosoftOf ficeExcel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,采用計(jì)量資料采用( (-)眘)表示,以t檢測(cè)。其中P<0.05代表差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    二、結(jié)果

    910例親子鑒定案例中,鑒定結(jié)論為“支持”的有895例,單親鑒定有234例,雙親鑒定有661例。其中32例案子發(fā)生33個(gè)STR基因位點(diǎn)突變,單親和雙親鑒定分別有11例和21例。其中有1例案子(2018年的第126號(hào))有2個(gè)STR基因位點(diǎn)(D6S1043和D12S391)發(fā)生突變。僅有1例案子(2018年的第221號(hào))為二步突變(D3S1358),其余31例案子均為一步突變。此外,在33例突變事件中,三聯(lián)體父源突變占23例,突變率為69.7%,母源突變占2例,突變率為6.1%;二連體父源突變4例,突變率為12.2%。其中父系與母系來(lái)源突變比例為13.5:1。具體結(jié)果詳見(jiàn)下表1.

    表1:常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變情況分析

    三、討論

    常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)基因座突變發(fā)生率與其多態(tài)性具有緊密的聯(lián)系。常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)多態(tài)性又與其核心重復(fù)單位數(shù)量呈正相關(guān)關(guān)系,因此在親子鑒定法醫(yī)實(shí)踐中,突變率越高,其違反遺傳規(guī)律發(fā)生數(shù)越多,親權(quán)指數(shù)的計(jì)算越發(fā)困難,也就增加了法醫(yī)鑒定的難度。為此,在親子鑒定中需要重視常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變發(fā)生率。通常情況下,常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)基因座突變遵循逐步突變模式,STR突變以1個(gè)核心重復(fù)單位上的增加或減少為主,2個(gè)以上的核心重復(fù)單位的變化不多?;蜃蛔儾綌?shù)的增加意味著常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變概率的降低,本次研究顯示,910例親子鑒定案例中,鑒定結(jié)論為“支持”的有895例,單親鑒定有234例,雙親鑒定有661例。其中32例案子發(fā)生33個(gè)STR基因位點(diǎn)突變,單親和雙親鑒定分別有11例和21例。僅有1例案子(2018年的第126號(hào))有2個(gè)STR基因位點(diǎn)(D6S1043和D12S391)發(fā)生突變。僅有1例案子(2018年的第221號(hào))為二步突變(D3S1358),其余31例案子均為一步突變。此外,在33例突變事件中,三聯(lián)體父源突變占23例,突變率為69.7%,母源突變占2例,突變率為6.1%;二連體父源突變4例,突變率為12.2%。其中父系與母系來(lái)源突變比例為13.5:1。從常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)基因座突變來(lái)源看,精原細(xì)胞演變?yōu)榫舆^(guò)程中DNA的復(fù)制次數(shù)要高于卵子成熟進(jìn)程中的復(fù)制次數(shù),而復(fù)制次數(shù)與滑動(dòng)錯(cuò)配發(fā)生率具有正相關(guān)聯(lián)。在相同檢測(cè)體系下,等位基因長(zhǎng)度越長(zhǎng)意味著常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變率越高,這是由于基因座突變常發(fā)生在復(fù)制滑鏈錯(cuò)配過(guò)程中串聯(lián)排列的正向重復(fù)序列。也即在DNA復(fù)制進(jìn)程中,常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)基因座在模版鏈與新生鏈發(fā)生分離是導(dǎo)致其核心重復(fù)區(qū)域出現(xiàn)堿基錯(cuò)配。

    法醫(yī)鑒定實(shí)踐表明,親子鑒定的準(zhǔn)確性和權(quán)威性受基因突變的影響顯著。親緣關(guān)系的鑒定是基于人類(lèi)的DNA長(zhǎng)度多態(tài)性遺傳標(biāo)記,在遵循孟德?tīng)栠z傳定律假設(shè)前提下,聯(lián)合應(yīng)用確定的親子鑒定結(jié)果。因此,在法醫(yī)鑒定親緣關(guān)系實(shí)踐中,若忽視常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變情況,則極易造成親緣關(guān)系鑒定的失敗。為提高親緣鑒定的準(zhǔn)確性,必須在群體進(jìn)化演變研究中,考慮常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變?cè)谌后w計(jì)算與群體歷史中的遺傳學(xué)問(wèn)題。在不同國(guó)家、地區(qū)以及民族間,常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)基因座突變率的計(jì)算,為親子鑒定的科學(xué)性、權(quán)威性和準(zhǔn)確性提供了堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支持。本研究顯示,通過(guò)獲得五邑地區(qū)人群常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變基礎(chǔ)數(shù)據(jù),如常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)突變點(diǎn)個(gè)數(shù)、三聯(lián)體和二聯(lián)體中父源與母源突變步數(shù)等等,為更加科學(xué)準(zhǔn)確的判定親子關(guān)系,提供了客觀依據(jù)。綜上所述,為提高親緣鑒定的準(zhǔn)確性,在法醫(yī)鑒定實(shí)踐中必須秉持嚴(yán)謹(jǐn)客觀的態(tài)度,通過(guò)重復(fù)檢測(cè)、不同檢測(cè)系統(tǒng)與檢測(cè)試劑多樣式平行檢測(cè)的檢測(cè)上,判定親緣關(guān)系。

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