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    功能性消化不良造模方法的述評(píng)

    2020-06-24 14:06:50范明明張嘉裕張湘龍
    世界中醫(yī)藥 2020年7期
    關(guān)鍵詞:功能性消化不良述評(píng)

    范明明 張嘉裕 張湘龍

    摘要 功能性消化不良(Functional Dyspepsia,F(xiàn)D)是臨床常見胃腸疾病,主要以上腹痛、上腹脹、早飽、噯氣、食欲不振、惡心、嘔吐等為臨床表現(xiàn)。FD癥狀可持續(xù)或反復(fù)發(fā)作,病程可超過(guò)1個(gè)月或在過(guò)去的12個(gè)月中累計(jì)超過(guò)12周。在中醫(yī)學(xué)中常見于胃脘痛、胃痞、吞酸、痞滿、嘈雜等病癥,其病因病機(jī)為長(zhǎng)期飲食不節(jié)、情志不調(diào)導(dǎo)致肝失疏泄,犯胃乘脾,脾胃功能失調(diào),升降失司,胃氣壅塞而出現(xiàn)以胃脘滿悶不舒等臨床癥狀的疾病。在FD的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)及臨床研究中,F(xiàn)D大鼠模型的建立及造模方法的選擇尤為重要,本文通過(guò)查閱近十年相關(guān)文獻(xiàn)資料,發(fā)現(xiàn)不同學(xué)者對(duì)于FD大鼠模型的建立及方法的選擇各異,故將FD造模方法歸納總結(jié)為單因素造模法、雙因素造模法以及多因素造模法,并對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)述評(píng),以期對(duì)相關(guān)領(lǐng)域研究者的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)及臨床研究提供借鑒。

    關(guān)鍵詞 功能性消化不良;動(dòng)物造模;胃腸疾病;大鼠;述評(píng)

    Abstract Functional dyspepsia (FD) is a common disease in clinics.The clinical symptoms are epigastric pain,epigastric distention,early fullness,belching,anorexia,nausea and vomiting etc.FD is chronic and recurrent and symptoms may recur for more than a month or have accumulated for more than 12 weeks in the past 12 months.In traditional Chinese medicine (TCM),it is mainly manifested in the symptoms of gastralgia pain,chronic atrophic gastritis,acidregurgitation,distention and fullness,gastric upset etc.The disease is caused by long-term diet and emotional disorder,which leads to liver dysfunction,stamoch attacking leading to the dysfunction of spleen,spleen and stomach dysfunction,ascending and descending disorder,and gastric stagnation and other clinical symptoms.In the basic experiment and clinical research of FD,the establishment of the FD rat model and the choice of modeling method are particularly important.This paper has found that differences in FD rat model establishment and choice of methods,by consulting relevant literature in the past decade.So FD modeling method is summarized into single-factor modeling method,two-factor modeling method and multi-factor modeling method,and the corresponding review is made to provide reference for basic experiments and clinical research of researchers in related fields.

    Keywords Functional dyspepsia; Animal modeling; Gastrointestinal diseases; Rats; Review

    功能性消化不良是目前臨床上常見的消化系疾病,屬中醫(yī)“痞滿”“胃脘痛”等范疇,主要誘因?yàn)榍橹静粫?、飲食不?jié)等,其中脾虛氣滯為FD病因病機(jī)的中心環(huán)節(jié),其病位在胃,且與肝脾等臟器密切相關(guān)。羅馬IV[1]將FD診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)限仍定為病程超過(guò)6個(gè)月,近3個(gè)月有癥狀發(fā)作,餐后飽脹、早飽、上腹痛、上腹部燒灼感4個(gè)核心癥狀,根據(jù)癥狀與進(jìn)餐關(guān)系,F(xiàn)D患者可分為餐后不適綜合征和上腹痛綜合征2個(gè)亞型。目前,在國(guó)際上,眾多學(xué)者普遍認(rèn)為FD的發(fā)生常因進(jìn)食后胃底容受舒張發(fā)生障礙,胃竇十二指腸運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)紊亂及內(nèi)臟高敏等因素有關(guān),以及心理、環(huán)境、社會(huì)等因素的影響,都會(huì)加重FD患者的臨床癥狀。目前FD的具體發(fā)病機(jī)制尚未明確,故動(dòng)物造模實(shí)驗(yàn)是闡述此疾病發(fā)病機(jī)制的的重中之重。

    1 單因素法

    1.1 不規(guī)則喂養(yǎng)法

    劉富林等[2]采用不規(guī)則喂養(yǎng)的方法,即單日進(jìn)食,逢雙日禁食,不禁水,以打亂大鼠原本正常的飲食規(guī)律,使大鼠的胃電節(jié)律失常,并加以超聲波噪聲刺激來(lái)引起全籠大鼠煩躁不安的情緒,以此建立功能性消化不良的大鼠模型。在中醫(yī)學(xué)中,此法是使大鼠飲食失律,日久則脾胃虛弱,脾氣不運(yùn),出現(xiàn)食量下降,大便稀溏,毛發(fā)不澤等實(shí)驗(yàn)表現(xiàn),相當(dāng)于中醫(yī)學(xué)中脾胃虛弱證型。

    此法經(jīng)病理證實(shí),大鼠除慢性淺表性胃炎外并無(wú)其他明顯器質(zhì)性改變。但不規(guī)則喂養(yǎng)法的病理基礎(chǔ)較傾向于FD患者中胃電節(jié)律失常,無(wú)法建立肝氣郁滯等病理基礎(chǔ),故此法不能完全復(fù)制出FD全部臨床癥狀且不能體現(xiàn)完整的疾病發(fā)生發(fā)展經(jīng)過(guò)。

    1.2 胃酸刺激法

    陳蘇寧等[3]用4 ℃食醋給大鼠10 L/g灌胃,1次/d,連續(xù)10 d后大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少、倦臥少動(dòng)、飲食及飲水量明顯減少等現(xiàn)象,造模成功后隨機(jī)取一只大鼠處死后取胃黏膜觀察,胃黏膜表面無(wú)潰瘍、黏膜損壞等其他器質(zhì)性病變說(shuō)明造模成功。在中醫(yī)學(xué)中,陳蘇寧等長(zhǎng)期用4 ℃食醋給大鼠灌胃,脾臟喜燥而惡濕,長(zhǎng)此以往,大鼠脾氣虛弱,水谷運(yùn)化不利,濕滯脾胃,寒濕傷及脾陽(yáng),故出現(xiàn)飲食及飲水下降,大便稀溏等癥狀。此模型相當(dāng)于中醫(yī)學(xué)中的脾胃虛寒證型。

    此法可成功復(fù)制出噯氣,腹痛等胃酸過(guò)多表現(xiàn),而FD患者也常伴有胃酸增多的表現(xiàn),但與不規(guī)則喂養(yǎng)法同理,此法傾向于復(fù)制FD患者胃電節(jié)律失常的病理基礎(chǔ),考慮因素片面,僅能復(fù)制出FD患者的單一臨床表現(xiàn)。

    1.3 夾尾刺激法

    此法是國(guó)內(nèi)學(xué)者制造功能性消化不良大鼠模型運(yùn)用最多的方法。丁宏等[4]用夾尾激怒法制作功能性消化不良肝郁大鼠模型,即用鼠夾夾大鼠尾巴遠(yuǎn)端1/3處,每次夾尾持續(xù)30 min,4次/d,連續(xù)刺激7 d。在夾尾刺激過(guò)程中,可逐漸引發(fā)大鼠相互間撕打,先后出現(xiàn)進(jìn)食量減少,煩躁、易怒,排泄物臭穢,毛色枯槁,光澤減少,反應(yīng)遲鈍等變化,說(shuō)明肝郁型功能性消化不良模型建立成功。除此之外,白璐[5]、方銀玲等[6]也運(yùn)用夾尾刺激法成功制造了FD大鼠模型。中醫(yī)學(xué)中,在對(duì)大鼠進(jìn)行夾尾刺激的過(guò)程中,大鼠肝氣不舒,肝氣郁滯,肝陽(yáng)克制脾土,致使脾氣虛弱,而出現(xiàn)進(jìn)食量減少,體形漸瘦,毛發(fā)變暗、枯黃、不順,易怒,?;ハ嗨阂?,并有緊張、焦慮狀態(tài)。此模型相當(dāng)于中醫(yī)學(xué)中的肝郁氣滯證型。

    王煜姣等[7]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)高強(qiáng)度夾尾刺激的大鼠,胃黏膜出現(xiàn)糜爛、潰瘍等肉眼改變,而FD判斷標(biāo)準(zhǔn)之一為無(wú)器質(zhì)性改變,此法與FD發(fā)生機(jī)制相悖,故不能正確復(fù)制出FD的臨床癥狀;并且夾尾法較傾向于FD中肝郁癥狀的復(fù)制,考慮因素較片面。但此法的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)操作較方便。

    1.4 束縛應(yīng)激法

    此法與夾尾刺激法相同,都可以建立功能性消化不良肝郁模型,岳利峰等[8]運(yùn)用束縛應(yīng)激法,即每日將大鼠束縛于特制的束縛架上3 h,連續(xù)21 d后大鼠可出現(xiàn)焦慮,進(jìn)食量減少等癥狀。束縛刺激法與夾尾刺激法相同,都是通過(guò)影響大鼠情志,從而形成脾虛癥狀。兩法在造模過(guò)程中都較好操作。

    1.5 嗎啡、阿托品灌胃法

    郝建軍[9],段嘉川等[10]運(yùn)用嗎啡、阿托品建立FD大鼠模型。阿托品是膽堿能神經(jīng)M受體阻滯劑,可舒張胃腸平滑肌,從而減慢胃腸運(yùn)動(dòng);嗎啡與阿托品作用相反,它可以增加胃腸平滑肌張力,進(jìn)而抑制胃腸推進(jìn)。此法造模屬于胃動(dòng)力障礙型FD模型。胃腸動(dòng)力障礙是FD的重要發(fā)病機(jī)制基礎(chǔ),用嗎啡、阿托品法造??梢悦黠@抑制大鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)。

    1.6 碘乙酰胺造模法

    目前碘乙酰胺灌胃法是國(guó)際上比較公認(rèn)的FD造模方法。碘乙酰胺是蛋白組學(xué)中半胱氨酸和組氨酸的烷基化試劑,可抑制蛋白酶活力下降甚至消失而不使蛋白變性,具有誘導(dǎo)細(xì)胞缺氧、黏膜損傷、焦慮和抑郁等作用,可基本模擬功能性消化不良的病理生理機(jī)制[11]。呂林等[12]將SPF級(jí)10只雄性SD大鼠給予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃(0.2 mL/d),連續(xù)灌胃6 d后大鼠出現(xiàn)體質(zhì)明顯下降,消瘦、倦怠、嗜臥、大便稀爛、食欲明顯下降、毛色干枯不容等癥狀。此模型相當(dāng)于中醫(yī)學(xué)中的脾虛證。

    應(yīng)用碘乙酰胺造模法可模擬出FD患者胃敏感性增高的病理表現(xiàn),故此法在國(guó)際上較常使用。

    1.7 耗氣破氣法

    闞甸喜等[13]每日給于大鼠重量比為1∶1∶1的大黃、厚樸、枳實(shí)的濃縮藥液灌胃,2次/d,2 mL/次,連續(xù)6周后處死大鼠并觀察大鼠宏觀表現(xiàn)、胃黏膜上皮細(xì)胞等各種指標(biāo)。大黃瀉內(nèi)腑邪熱實(shí)證,厚樸、枳實(shí)作為耗氣破氣法的主要藥味,主要功用為破氣消積。闞甸喜等長(zhǎng)期采用此法,可損傷體內(nèi)正氣,而形成脾氣虛弱證型。但此法只建立脾氣虛一種證型,考慮因素較片面,缺乏完整性。

    2 雙因素法

    2.1 不規(guī)則喂養(yǎng)法+酸刺激法

    張勇等[14]將模型組大鼠用自行設(shè)計(jì)的不規(guī)則喂養(yǎng)法飼養(yǎng)4周,即單日正常進(jìn)食,逢雙日禁食,以打亂大鼠正常的飲食節(jié)律,讓大鼠自由飲水,每升飲水中加10 mol/L HC1 10 mL,以破壞胃內(nèi)酸堿環(huán)境來(lái)建立大鼠胃電節(jié)律失常模型。由于絕大多數(shù)FD患者都具有以胃動(dòng)過(guò)速、節(jié)律紊亂多見的胃電節(jié)律失常表現(xiàn),故此模型的建立有利于學(xué)界對(duì)于FD的深入研究。但缺乏肝郁證型,考慮因素較片面。

    2.2 不規(guī)則喂養(yǎng)法+夾尾刺激法

    周紅[15]、郭璇等[16]將模型組大鼠予以不規(guī)則喂食和夾尾刺激雙因素法造模,即雙日正常進(jìn)食,逢單日禁食不禁水,連續(xù)2周后,繼續(xù)以上喂養(yǎng)方法的同時(shí),用長(zhǎng)海綿鉗夾大鼠尾巴遠(yuǎn)端1/3處,以不破皮為度,以激怒幼鼠,每次夾尾刺激20 min,每隔3 h刺激1次,3次/d,連續(xù)刺激1周后大鼠出現(xiàn)肝郁脾虛癥狀。在中醫(yī)學(xué)中,此模型為脾虛肝郁證型,改變大鼠正常飲食節(jié)律,導(dǎo)致其脾胃虛弱,脾氣不運(yùn),又因用夾尾法刺激幼鼠發(fā)怒,致其肝郁氣滯,又進(jìn)而克制脾土,故出現(xiàn)飲食不佳,大便稀溏,氣味臭穢刺鼻,性情暴躁,易被激惹等癥狀,表示造模成功。由于FD的發(fā)生不僅是飲食不當(dāng)這一單因素引起,還與患者的情志,精神狀態(tài)等多因素有關(guān),單一的不規(guī)則喂養(yǎng)法或單一的夾尾刺激法都有其不足之處,故兩法聯(lián)合建立FD大鼠模型較單一因素更為完整。

    2.3 碘乙酰胺灌胃+改良小平臺(tái)法

    呂林等[17]采用碘乙酰胺灌胃加改良小平臺(tái)法建立FD大鼠模型,即用0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃(0.2 mL/d),連續(xù)灌胃6 d,再給予改良小平臺(tái)法處理,即將小平臺(tái)站立箱水槽中注水,大鼠可在小平臺(tái)臺(tái)面上正?;顒?dòng),但若大鼠進(jìn)入睡眠狀態(tài),則會(huì)因肌肉舒張而落入水槽中,每日持續(xù)14 h,連續(xù)14 d,建立胃動(dòng)力障礙型FD大鼠模型,14 d后模型組大鼠出現(xiàn)明顯消瘦,倦怠,嗜臥,大便稀爛,毛色枯槁,食欲下降等現(xiàn)象。

    雖然功能性消化不良的發(fā)病機(jī)制尚未明確,但研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)臟高敏感性及胃腸動(dòng)力障礙是FD發(fā)生的主要病理機(jī)制,采用碘乙酰胺灌胃法是使FD動(dòng)物模型產(chǎn)生炎性反應(yīng)致內(nèi)臟敏感性增高,加用改良小平臺(tái)法后,使FD動(dòng)物模型具有胃動(dòng)力障礙特征,成功復(fù)制了多個(gè)FD臨床癥狀。

    2.4 不規(guī)則喂養(yǎng)法+左旋精氨酸法

    孫建輝等[18]采用不規(guī)則喂養(yǎng)法加左旋精氨酸法建立FD幼鼠模型,即給予小鼠足食2 d,禁食1 d,循環(huán)實(shí)施,共15 d,在造模的第11天腹腔注射左旋精氨酸3.7 g/kg,在第12~15天,腹腔注射左旋精氨酸1.85 g/kg,結(jié)束造模后,測(cè)定幼鼠碳末推進(jìn)率、血清中胃泌素和胃動(dòng)素水平等指標(biāo),發(fā)現(xiàn)小鼠碳末推進(jìn)率、血清中胃泌素和胃動(dòng)素水平明顯低于對(duì)照組,符合對(duì)于FD患者的臨床研究結(jié)果。

    3 多因素法

    3.1 慢性束縛+過(guò)度疲勞+飲食失節(jié)法

    吳曉芳[19]、呂瑤等[20]采用復(fù)合病因造模法(慢性束縛刺激+過(guò)度疲勞+飲食造模),連續(xù)21 d,制造FD大鼠模型。根據(jù)造模前后大鼠毛發(fā)、大便、食量、體質(zhì)量等變化情況,可知肝郁脾虛型FD大鼠造模成功。郭璇等在慢性束縛、過(guò)度疲勞、飲食失節(jié)的基礎(chǔ)上,加入了夾尾激怒法建立FD模型,成功建模后實(shí)驗(yàn)大鼠有明顯的胃腸功能減退癥狀以及病理改變。

    3.2 食物剝奪、明暗顛倒及夾尾束縛等9種方法聯(lián)合

    肖政華等[21]采用食物剝奪、明暗顛倒及夾尾束縛等9種方法造模(食物剝奪;飲食剝奪合并空瓶刺激;明暗顛倒;濕籠飼養(yǎng);強(qiáng)迫游泳;倒懸;束縛;超聲波噪聲;夾尾),每天隨機(jī)選取9種刺激中的任意一種,相鄰兩天的刺激不能重復(fù),使動(dòng)物不能預(yù)知刺激的發(fā)生,連續(xù)刺激21 d,可以成功塑造肝郁脾虛型FD大鼠。但采用此法建立FD大鼠模型,實(shí)驗(yàn)操作較為復(fù)雜,且建模穩(wěn)定性較低。

    3.3 大黃煎劑+高脂飼料喂養(yǎng)+束縛及游泳法

    朱潔等[22]應(yīng)用新型造模法建立FD大鼠肝郁脾虛模型,即用濃度為0.5 g/mL的大黃煎劑以及提前置備的高脂飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,再將大鼠束縛于束縛架上,3 h/d,連續(xù)21 d,同時(shí)每日強(qiáng)迫大鼠游泳12 min,持續(xù)3周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示;復(fù)合組造模方法較對(duì)照組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著降低,朱潔等認(rèn)為高脂飲食與大黃煎劑的組合實(shí)現(xiàn)了多種致病因素的結(jié)合,與其他單因素造模組相比,此復(fù)合因素法更為貼合FD的臨床發(fā)病機(jī)制。但此法更傾向于脾虛癥狀的造模方向,由于當(dāng)前社會(huì)生活環(huán)境的影響,F(xiàn)D患者的患病因素也與肝氣郁滯等因素密不可分,故朱潔等認(rèn)為此法忽略了對(duì)于肝郁癥狀的模型建立,有待于進(jìn)一步改善。

    3.4 番瀉葉煎劑+高脂飼料喂養(yǎng)+束縛及游泳法

    劉樂(lè)平等[23]應(yīng)用復(fù)合造模法,即將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后,給予1.5 mL/2次的番瀉葉煎劑灌胃,連續(xù)給藥10 d,并進(jìn)行高脂飲食飼養(yǎng)2周,同時(shí)將大鼠束縛于束縛架上,3 h/d,連續(xù)21 d。另外,強(qiáng)迫實(shí)驗(yàn)大鼠每日游泳12 min,持續(xù)2周。

    此法與胃酸刺激法不同的是,番瀉葉煎劑避免了藥物對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)臟器的損傷,從而較少影響造模結(jié)果。

    3.5 夾尾刺激+飲食不規(guī)律+飲酸法

    普行藝等[24]采用夾尾刺激、飲食不規(guī)律、飲酸聯(lián)合法建立FD大鼠模型,即將大鼠每隔兩天禁食1 d,并且每天用鼠夾夾大鼠尾部末端,每只大鼠1次夾尾10 min,4次/d,造模期間,給予大鼠稀鹽酸水(1 000 mL水中加入10 mol/L的鹽酸10 mL)。建模結(jié)束后,觀察到大鼠具有體質(zhì)量明顯減輕,毛發(fā)枯槁,易怒等宏觀癥狀,符合FD患者臨床癥狀。

    3.6 碘乙酰胺灌胃法+小平臺(tái)站立法+飲食失節(jié)法

    鐘子劭等[25]采用碘乙酰胺灌胃法、小平臺(tái)站立法、飲食失節(jié)聯(lián)合法建立FD幼鼠模型,即給予幼鼠0.1%碘乙酰胺的蔗糖溶液0.2 mL/只灌胃,1次/d,并采用小平臺(tái)站立法,期間進(jìn)食日足量喂食,隔日禁食,造模共14 d。經(jīng)鐘子劭等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),此法可較好模擬中醫(yī)學(xué)肝郁脾虛癥狀。

    3.7 夾尾刺激法+不規(guī)則飲食法+冰生理鹽水灌胃法

    徐派的等[26]使用夾尾刺激法、不規(guī)則飲食法加冰生理鹽水灌胃法建立FD大鼠模型,即采用夾尾法夾大鼠尾部,2次/d,連續(xù)14 d,同時(shí)用冰生理鹽水(-4 ℃ 0.9%Nacl注射液2 mL,2次/d)灌胃,期間打亂大鼠正常飲食(逢單日進(jìn)食,雙日禁食,不禁水)。造模完成后,大鼠出現(xiàn)毛發(fā)枯黃,飲食驟降,易怒等癥狀,且大鼠解剖后,未發(fā)現(xiàn)體內(nèi)有器質(zhì)性病變,提示FD大鼠造模成功。

    3.8 慢性束縛+夾尾刺激法+搖晃+游泳+飲食失節(jié)法

    戴維等[27]使用慢性束縛、夾尾刺激法、搖晃、游泳加飲食失節(jié)法建立FD大鼠模型,即將大鼠放置于束縛盒內(nèi)3 h,夾尾30 min,搖晃飼養(yǎng)箱5 min,游泳10 min,并隔日進(jìn)行喂食,連續(xù)3周。戴維等通過(guò)觀察大鼠精神狀態(tài)、飲食狀況等發(fā)現(xiàn):大鼠出現(xiàn)活躍程度減弱,毛發(fā)不擇,大便稀爛等宏觀癥狀。提示造模成功。

    多因素法建立FD大鼠模型,可以更為具體形象的反映功能性消化不良的臨床癥狀,但是在具體實(shí)驗(yàn)中,多因素法建模存在因素過(guò)多,并且造模流程復(fù)雜,缺乏穩(wěn)定性。

    成功的FD大鼠模型必須符合以下兩點(diǎn)要求:一是大鼠具有消化不良的癥候,即食欲不振或飲食食量明顯減少的臨床表現(xiàn);二是大鼠無(wú)其他器質(zhì)性病變。目前,F(xiàn)D大鼠模型尚處于探索階段,其造模方法還不成熟。在以上列舉的單因素造模方法中,大鼠的實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)與FD患者的臨床表現(xiàn)相差較大,故用單純的單因素造模法,只能復(fù)制出單一FD臨床癥狀。在雙因素與多因素造模方法中,雖比單因素造模法更加具體,但其穩(wěn)定性欠佳。而要制造較成功的FD模型,就必須首先明確FD的發(fā)病機(jī)制,只有在機(jī)制明確的基礎(chǔ)上,才能制作出符合需求的模型。

    參考文獻(xiàn)

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    (2019-10-24收稿 責(zé)任編輯:徐穎)

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