兩代抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑性能評估

陳 莎，高 潔

（陜西友誼醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安 710065）

目前，檢測抗-HCV（丙型肝炎病毒抗體）的主要方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）[1]，試劑主要為間接酶聯(lián)免疫法第三代診斷試劑和雙抗原夾心法第四代診斷試劑。間接酶聯(lián)免疫法第三代診斷試劑檢測結(jié)果存在一定的假陽性[2]，而且檢測抗-HCV的窗口期較長；雙抗原夾心法診斷試劑可有效彌補(bǔ)間接酶聯(lián)免疫法第三代診斷試劑存在的部分缺陷[3]?；诖?，本實(shí)驗(yàn)室通過檢測1 875份血漿標(biāo)本，對第三代、第四代抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑的性能進(jìn)行評估。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

收集2018年6月—12月在本檢驗(yàn)所采用間接ELISA法診斷試劑和雙抗原夾心ELISA法診斷試劑進(jìn)行抗-HCV檢測的血漿樣本1 875份，離心取血清，-70℃凍存。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 兩代抗-HCV ELISA診斷試劑分別用A、B表示，A試劑反應(yīng)原理為間接法，B試劑反應(yīng)原理為雙抗原夾心法。質(zhì)控血清由陜西省臨床檢驗(yàn)中心提供，確證試劑為Chiron RIBA HCV3.0 SIA（美國CHIRON公司），所有試劑均在有效期內(nèi)，其檢測方法、結(jié)果判定均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.2.2 儀器 全自動(dòng)酶免分析儀為深圳愛康公司生產(chǎn)，酶標(biāo)儀、洗板機(jī)為鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)，全自動(dòng)加樣儀為瑞士哈美頓公司生產(chǎn)，所有儀器設(shè)備定期進(jìn)行維護(hù)、校驗(yàn)。

1.3 方法

對1 875份血漿標(biāo)本平行采用間接法和雙抗原夾心法兩代抗-HCV ELISA試劑進(jìn)行檢測，初次檢測結(jié)果為反應(yīng)性時(shí)，使用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)查。采用Chiron RIBA確認(rèn)試劑對兩種試劑中任意一種檢測為陽性或可疑的標(biāo)本進(jìn)行檢測，把RIBA試驗(yàn)結(jié)果為陽性的標(biāo)本再用兩代ELISA試劑檢測，對得到的S/CO進(jìn)行比較。

所有標(biāo)本均按說明書進(jìn)行兩種試劑的檢測，若檢測呈陰性反應(yīng)，即判斷為陰性。若檢測呈初次反應(yīng)性，需用原有試劑對相應(yīng)標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，雙孔均呈無反應(yīng)性則判為陰性；雙孔均呈反應(yīng)性，或有1孔呈反應(yīng)性，則判為陽性。對兩種方法任一試劑檢測為反應(yīng)性的標(biāo)本通過RIBA做進(jìn)一步確證，RIBA確證試驗(yàn)按照試劑說明書操作和判讀。若兩種方法均為陰性或RIBA確證試驗(yàn)結(jié)果為陰性判為真陰性。

標(biāo)本S/CO值≥1判斷為陽性，0.7≤S/CO值＜1判斷為灰區(qū)，陽性和灰區(qū)標(biāo)本結(jié)果均判定為不合格。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

間接法和雙抗原夾心法檢測為陽性或弱陽性的65份標(biāo)本中，RIBA確證試驗(yàn)結(jié)果30例為陽性，32例為陰性，3例為可疑；間接法檢測為陽性，雙抗原夾心法檢測為陰性的33例樣本中，31例確證為陰性，2例確證為可疑；間接法檢測為陰性，雙抗原夾心法檢測為陽性的2例樣本中，1例確證為陰性，1例確證為可疑。目前公認(rèn)的檢測抗-HCV的準(zhǔn)確方法為RIBA，以此為標(biāo)準(zhǔn)，本檢驗(yàn)所間接法和雙抗原夾心法的特異性分別統(tǒng)計(jì)為96.64%（1 812/1 875）和 98.29%（1 843/1 875）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了雙抗原夾心法與RIBA的符合率為93.75%，間接法與RIBA的符合率為47.62%，抗-HCV雙抗原夾心法的特異性比間接法提高了1.65個(gè)百分點(diǎn)，所產(chǎn)生的灰區(qū)和假陽性樣本大幅度減少。另外，間接法只檢測IgG，雙抗原夾心法增加了IgM的檢測，因此窗口期縮短，提高了抗-HCV的檢出率。

2.1 對比ELISA間接法和雙抗原夾心法診斷試劑檢測抗-HCV情況

從間接法和雙抗原夾心法診斷試劑對1 875份標(biāo)本檢測情況的比較來看，雙抗原夾心法診斷試劑的陽性檢出率為1.71%（32/1 875），明顯低于間接法診斷試劑的3.36%（63/1 875），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.03），見表1。

表1 ELISA間接法與雙抗原夾心法診斷試劑檢測抗-HCV結(jié)果對比（例）

2.2 RIBA確證ELISA間接法和雙抗原夾心法檢出的陽性標(biāo)本情況

RIBA檢測結(jié)果陽性的30例樣本，兩代酶聯(lián)免疫試劑均能檢出，但是ELISA間接法試劑假陽性率為96.88%，遠(yuǎn)高于ELISA雙抗原夾心法試劑的3.13%（P＜0.001），見表2。

表2 65份間接和雙抗原夾心ELISA法診斷試劑抗-HCV陽性和弱陽性樣本確證結(jié)果

2.3 比較ELISA間接法和雙抗原夾心法試劑檢測出陽性標(biāo)本的準(zhǔn)確度

間接ELISA法試劑檢出的63份陽性樣本中，有30份確證為真陽性，占陽性樣本檢出量的47.62%；雙抗原夾心ELISA法試劑檢出的32份陽性樣本中，有30份確證為真陽性，占陽性樣本檢出量的93.75%。雙抗原夾心ELISA法試劑的準(zhǔn)確度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于間接ELISA法試劑，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見表3。

表3 間接和雙抗原夾心ELISA法診斷試劑檢測出陽性標(biāo)本的準(zhǔn)確度比較

2.4 對比ELISA間接法和雙抗原夾心法試劑的靈敏度

利用質(zhì)控血清比較兩種試劑，ELISA間接法試劑檢測到4倍稀釋，S/CO值為1.46，雙抗原夾心法試劑檢測到64倍稀釋，S/CO值為1.08，進(jìn)一步比較RIBA確證的30例陽性樣本兩代試劑檢測的S/CO值，雙抗原夾心法診斷試劑檢測的數(shù)據(jù)值明顯高于間接法試劑，表現(xiàn)出更高的靈敏度。

3 討論

3.1 評估抗-HCV ELISA檢測試劑性能的意義

由于目前沒有HCV疫苗，篩查及早期診斷成為控制丙型肝炎發(fā)生和傳播的重要手段。基于丙肝抗體在血液中能長期穩(wěn)定存在的特性，采用ELISA法對抗-HCV進(jìn)行檢測成為主要篩查手段。雙抗原夾心法試劑B是一種檢測抗-HCV的ELISA試劑，本次研究設(shè)計(jì)了對相關(guān)標(biāo)本的平行檢測，旨在通過與間接法ELISA試劑A檢測結(jié)果的比較和分析，對目前市場上第三、第四代抗-HCV ELISA檢測試劑的性能進(jìn)行綜合評估。

當(dāng)前，影響抗-HCV試劑質(zhì)量的主要因素是其包被的丙型肝炎病毒抗原[4]。間接法ELISA檢測試劑（第三代），酶標(biāo)二抗為抗人IgG，由于血清中高濃度非特異性IgG的干擾，會(huì)影響檢測的特異性，從而導(dǎo)致假陽性標(biāo)本增多，增加復(fù)檢率；為減少非特異性干擾，待測標(biāo)本經(jīng)稀釋后，又會(huì)影響檢測敏感性。雙抗原夾心法ELISA檢測試劑（第四代），除包被丙肝抗原外，還加入生物素化丙肝抗原，形成包被抗原-抗體-抗人IgG抗體復(fù)合物，使特異性增強(qiáng)。同時(shí)該試劑借助生物素-親和素系統(tǒng)靈敏度提高，并且雙抗原夾心法加樣量增加，減少了因加樣引起的實(shí)驗(yàn)誤差，也使得檢測的靈敏度大大提高[5-7]。

3.2 雙抗原夾心法ELISA檢測試劑準(zhǔn)確度、靈敏度均高于間接法

從本次研究數(shù)據(jù)來看，間接法ELISA檢測試劑陽性檢出率為3.36%，假陽性率達(dá)96.88%，準(zhǔn)確率為47.62%；而雙抗原夾心法ELISA檢測試劑的陽性率檢出率為1.71%，假陽性率僅為3.13%，準(zhǔn)確度為93.75%。利用質(zhì)控血清比較發(fā)現(xiàn)，雙抗原夾心法ELISA試劑的靈敏度高于間接法ELISA試劑，符合研究[5-7]的結(jié)論，也與趙龍友等[8]的研究結(jié)果——雙抗原夾心法ELISA試劑可以有效提高抗-HCV陽性標(biāo)本的檢出率，并降低假陽性率一致。

3.3 雙抗原夾心法ELISA試劑診斷性能優(yōu)于間接法ELISA試劑

雙抗原夾心法ELISA試劑檢測的是IgM、IgG等總抗體，診斷性能明顯優(yōu)于間接法ELISA試劑，更適用于早期篩查HCV抗體，值得推薦使用。