野生紅菇子實(shí)體提取液的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用*

劉 楠

（河南中醫(yī)藥大學(xué)體育教研部學(xué)院，河南 鄭州 450046）

紅菇（Russula vinosa Lindblad）其內(nèi)所含營(yíng)養(yǎng)較高，味道非常鮮美，具備較好的滋陰、補(bǔ)血、清涼解毒的作用且能夠食用。我國(guó)歷史上很早就將紅菇入藥，例如變綠紅菇能夠發(fā)揮散內(nèi)熱、明目、瀉肝火的效果[1]；而革質(zhì)紅菇、全綠紅菇具備抗風(fēng)濕的臨床作用；一些紅菇因?yàn)榫邆淞己玫囊志钚?，可以用于抗感染治療[2]。

野生紅菇的發(fā)生和植物群落之間的關(guān)聯(lián)性較大，并且往往生長(zhǎng)區(qū)域是針葉林、闊葉林及混交林，但一些紅菇只會(huì)在特定樹木林區(qū)生長(zhǎng)[3]。比如，福建閩北松林區(qū)域會(huì)生長(zhǎng)煙色紅菇，而落葉林及混交林區(qū)域往往會(huì)生長(zhǎng)紅色紅菇。大部分的紅菇能夠和其他植物共生，例如鱗蓋紅菇能夠和冷杉、松、栗、云杉、黃杉、樺、椎、鵝耳枷等形成共生關(guān)系[4]。紅菇是一種典型的外生根菌，其分布及生長(zhǎng)情況可以體現(xiàn)宿主種類、基質(zhì)土壤營(yíng)養(yǎng)情況、溫度、pH、水分等，這些都會(huì)對(duì)其生長(zhǎng)及分布產(chǎn)生極大的影響[5]。通常來(lái)說(shuō)，溫帶冷灰壤、紅壤、山地紅棕壤中有機(jī)質(zhì)含量相對(duì)較高，而若是土壤具備良好的保水性及透氣性，生長(zhǎng)紅菇的幾率相對(duì)較高[6]。紅菇生長(zhǎng)需要偏酸性的環(huán)境，pH以4.2～6.5為宜，紅菇最適宜生長(zhǎng)溫度范圍是25℃～27℃，而適宜濕度范圍是80%～100%，土壤含水量也應(yīng)超過(guò)40%[7]。借助不同技術(shù)獲得紅菇子實(shí)體干品的提取液，分析紅菇子提取液的抗疲勞效果。

1 材料及方法

1.1 試驗(yàn)材料

雄性昆明小鼠，購(gòu)于鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，4周齡，重量為19.5 g～20.0 g。紅菇子實(shí)體干品，采自容縣浪水鄉(xiāng)的山嶺上，紅菇喜歡長(zhǎng)在樹根下。

1.2 關(guān)鍵試劑及儀器

1.2.1 試劑

蔥酮、CHCl3、濃H2SO4、乙酸、75%乙醇、檸檬酸三鈉、SOD試劑，南京建成科技有限公司生產(chǎn)，上述試劑的等級(jí)均為分析純。

1.2.2 儀器及器具

小鼠游泳水池（50 cm×50 cm×40 cm）、電磁爐、電子天平（型號(hào)YP 102 N），購(gòu)自上海精密科學(xué)有限公司；高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，型號(hào)是FW 100型，購(gòu)自天津市泰斯特儀器有限公司；石英秒表、加樣器、玻璃組織勻漿器、數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋，型號(hào)為HH-S2型雙孔，購(gòu)自江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠；全自動(dòng)生化分析儀（借用玉林第二人民醫(yī)院）、全自動(dòng)細(xì)胞分析儀、L420臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)，購(gòu)自長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；抗凝管（借用玉林市第二人民醫(yī)院）、721型可見(jiàn)分光光度計(jì)，購(gòu)自上海精密科學(xué)儀器廠。

1.3 試驗(yàn)小鼠分組與處理

以適應(yīng)性培養(yǎng)的方式培養(yǎng)40只昆明小鼠，培養(yǎng)時(shí)間為1周，如此能夠讓小鼠在試驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)下來(lái)。動(dòng)物房中進(jìn)行嚴(yán)格的溫濕度控制，濕度及室溫分別控制是43%～67%、16℃～23℃，并且根據(jù)自然規(guī)律進(jìn)行照明時(shí)間的控制。在第6天把昆明雄性小鼠放在水池內(nèi)，并且在小鼠的尾部綁上重量為小鼠重量5%的錫紙，讓小鼠進(jìn)行游泳運(yùn)動(dòng)，水池深度為40 cm，水溫范圍（25±1）℃，將游泳時(shí)長(zhǎng)低于300 s的小鼠排除，最終結(jié)果顯示4只小鼠的游泳時(shí)長(zhǎng)低于300 s，將剩下36只小鼠分成對(duì)照組（12只）、高劑量組（12只）、低劑量組（12只）[8]。對(duì)照組采用0.5 mL蒸餾水灌胃處理，高劑量組、低劑量組采用0.5 mL相應(yīng)濃度提取液的灌胃處理。灌胃頻次是1次/d，灌胃時(shí)間是早上9∶00～10∶00，以常規(guī)飼料讓小鼠自由進(jìn)食，并且換水頻次為2 d換水1次。

1.4 紅菇子實(shí)體提取液的制備（水浴浸提法）

在80℃環(huán)境下進(jìn)行菇體的烘干粉碎，并且根據(jù)料液比1∶20的方式，在90℃環(huán)境下進(jìn)行4 h的水浴處理，以4 000 r·min-1進(jìn)行15 min的離心處理，之后以提取液中的上清液進(jìn)行后續(xù)操作，以水浴蒸發(fā)方式完成濃縮處理，并因此獲得對(duì)應(yīng)濃度的紅菇子實(shí)體提取液（100 mg·kg-1、200 mg·kg-1）。

1.5 負(fù)重游泳力竭時(shí)間

對(duì)小鼠采取21 d灌胃處理，在第21天灌胃0.5 h后，每組選擇小鼠6只，都依照小鼠重量的5%進(jìn)行荷重處理，旨在將小鼠放置在25℃～27℃的水池中，讓小鼠進(jìn)行游泳運(yùn)動(dòng)，1個(gè)水池中同時(shí)游泳小鼠為4只。分析小鼠各自游泳的具體情況，將小鼠由入水到力竭，10 s內(nèi)小鼠不浮出水池表面的時(shí)長(zhǎng)詳細(xì)記錄下來(lái)，這段時(shí)間就是游泳力竭的實(shí)際時(shí)長(zhǎng)[9]。

1.6 對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠外周血象及血清內(nèi)乳酸脫氫酶等參數(shù)的影響試驗(yàn)

在第21天灌胃處理0.5 h后，每組選擇6只小鼠，將小鼠放置在30℃的水池內(nèi)，并且讓小鼠進(jìn)行90 s的游泳運(yùn)動(dòng)。若是小鼠力竭，就可以將小白鼠眼球拔出并且進(jìn)行眼部血液的采集，在較短的時(shí)間內(nèi)將全血存儲(chǔ)到收集管中，并且以離心的方式獲得血清，針對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)?？紤]到研究數(shù)據(jù)應(yīng)該具備可比性，并且為了降低系統(tǒng)誤差，借助全自動(dòng)生化分析儀對(duì)乳酸脫氫酶含量水平進(jìn)行檢測(cè)，詳細(xì)記錄相關(guān)指標(biāo)值，并且展開(kāi)t檢驗(yàn)。

1.7 肝糖原含量的測(cè)量

在第21天灌胃處理0.5 h后，每組選擇6只小鼠，將水池溫度控制在30℃，讓小鼠進(jìn)行90 s的游泳運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行眼球拔除，然后血液采集，以較短的時(shí)間內(nèi)完成解剖操作，得到肝臟，以生理鹽水對(duì)肝臟進(jìn)行漂洗處理，并用濾紙將肝臟上的水分吸干。以萬(wàn)分之一天平進(jìn)行肝臟的稱量，精密稱定1 g，并且添加TCA5%的三氯乙酸8 mL，利用玻璃組織勻漿器完成搗碎處理，隨后采取3 000 r·min-1離心15 min，取上清液，以蔥酮法針對(duì)肝糖原水平進(jìn)行檢測(cè)[10]。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果分析

2.1 提取液對(duì)試驗(yàn)小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)長(zhǎng)的影響

小鼠接受不同劑量紅菇子實(shí)體提取液的灌胃處理后，紅菇提取液對(duì)小鼠負(fù)重游泳至力竭死亡時(shí)間的影響見(jiàn)表1。

表1 紅菇提取液對(duì)小鼠負(fù)重游泳至力竭死亡時(shí)間的影響Tab.1 Effect of Russula vinosa extract on the death time of mice from weight-bearing swimming to exhaustion

如表1所示，當(dāng)?shù)蛣┝拷M體重控制在25.34 g～34.76 g時(shí)，至小鼠游泳力竭的時(shí)間是164.21 min～213.34 min，當(dāng)高劑量組體重控制在29.68 g～35.90 g時(shí)，至小鼠游泳力竭的時(shí)間是142.82 min～192.23 min，高劑量組、低劑量組都出現(xiàn)負(fù)重游泳時(shí)長(zhǎng)顯著提升的結(jié)果，而低劑量組及對(duì)照組間存在明顯差異（P＜0.05），高劑量組和對(duì)照組間的差異不明顯（P＞0.05）[11]。

2.2 提取液對(duì)試驗(yàn)小鼠乳酸脫氫酶及肝糖原含量的影響

小鼠接受不同劑量紅菇提取液灌胃處理后，其乳酸脫氫酶及肝糖原含量水平見(jiàn)表2。

如表2所示，紅菇提取液可使小鼠肝糖原水平得到提升，而高劑量組和對(duì)照組肝糖原含量間的差異更具有極顯著差異（P＜0.01），低劑量組和對(duì)照組間的差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)價(jià)值（P＞0.05）。高劑量組、低劑量組的小鼠乳酸脫氫酶水平都明顯升高（P＜0.05）。

表2 提取液對(duì)試驗(yàn)小鼠乳酸脫氫酶和肝糖原含量的影響Tab.2 Effect of extract on lactate dehydrogenase and liver glycogen content in mice

3 結(jié)論

疲勞的機(jī)制非常復(fù)雜，通常是指機(jī)體生理上的功能不能始終維持在特定水平或是程度，并因此使得運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度受到限制，生理上及心理上產(chǎn)生疲倦的狀態(tài)，工作能力及效率也因此顯著降低[12]。疲勞形成的關(guān)鍵性原因包括能源消耗、代謝堆積[13]。

運(yùn)動(dòng)耐力的強(qiáng)化能夠顯著反映抗疲勞能力的提升，游泳時(shí)長(zhǎng)能夠體現(xiàn)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)疲勞的實(shí)際情況。在紅菇水提液對(duì)小鼠游泳時(shí)長(zhǎng)的實(shí)際影響試驗(yàn)中，低劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)長(zhǎng)顯著延長(zhǎng)（P＜0.05），明顯優(yōu)于對(duì)照，但高劑量組小組的游泳時(shí)長(zhǎng)并無(wú)明顯延長(zhǎng)（P＞0.05）。

紅菇不僅是中國(guó)天然藥物及中草藥領(lǐng)域中的關(guān)鍵物種，也是現(xiàn)今分析及研制抗癌藥劑的關(guān)鍵種[14]。紅菇具備抗癌作用，并且其中含有的菌多糖與蛋白多糖，能夠?qū)贵w水平產(chǎn)生干預(yù)，并因此使得免疫功能得到提升[15]。

糖原含量會(huì)對(duì)運(yùn)動(dòng)能力產(chǎn)生極大影響，高劑量、低劑量組肝糖原水平都明顯優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.01），這就表示紅菇水提液可以由提升能量物質(zhì)含量的方式，使得機(jī)體獲得足夠的能量，并因此發(fā)揮抗疲勞的效果。

機(jī)體在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，若是僅借助氧化的方式，能量供應(yīng)達(dá)不到相應(yīng)的要求。所以在無(wú)氧條件下，肌肉通過(guò)糖原酵解的方式不但能夠獲得能量，還能夠形成乳酸，而乳酸在肌肉內(nèi)若是大量堆積，就極為容易形成疲勞感，乳酸脫氫酶對(duì)乳酸代謝非常關(guān)鍵，在很大程度上影響糖原無(wú)氧代謝通道[16]。所以能夠借助乳酸脫氫酶對(duì)抗疲勞功能性食物進(jìn)行評(píng)估。肌肉內(nèi)的乳酸若能在較短時(shí)間內(nèi)到血液中去，并且導(dǎo)致血乳酸水平提升，如此肌乳酸和血乳酸水平處于平衡狀態(tài)[17]。這個(gè)步驟共進(jìn)行5 s～15 s的時(shí)間，而相對(duì)于對(duì)照組而言，高、低劑量組的乳酸脫氫酶水平明顯較低，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)研究?jī)r(jià)值（P＜0.05），這就表示紅菇水提液可以對(duì)肌乳酸的形成發(fā)揮抑制效果，進(jìn)而緩解疲勞。

針對(duì)連續(xù)性灌胃小鼠的血乳酸脫氫酶水平、浮水時(shí)長(zhǎng)、肝糖原水平等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)后可知，紅菇水提液能夠使得小鼠疲勞得到緩解，具備抗疲勞效果。