五味子總木脂素胃漂浮片的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

鄒翔　宮甜　朱室儒　周林　吳雙　尹貽靜　曲中原　李文蘭

中圖分類(lèi)號(hào) R284.1;R944.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2020）11-1336-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.11.09

摘 要 目的：研究五味子總木脂素胃漂浮片的制備工藝，并對(duì)所制片劑進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。方法：在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以羥丙基甲基纖維素（HPMC）K15M比例、NaHCO3比例、微晶纖維素比例為考察因素，以胃漂浮片的起漂時(shí)間、持漂時(shí)間、累積釋放率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交試驗(yàn)，優(yōu)化五味子總木脂素胃漂浮片處方。對(duì)所制五味子總木脂素胃漂浮片的性狀、片重差異、漂浮性能和累積釋放率進(jìn)行檢查;采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法和紫外分光光度法測(cè)定該制劑中五味子醇甲和總木脂素的含量。結(jié)果：五味子總木脂素胃漂浮片最優(yōu)制備處方比例為五味子總木脂素浸膏23%、HPMC K15M 20%、微晶纖維素40%、NaHCO3 15%、十八醇1%、聚乙烯吡咯烷酮1%。所制五味子總木脂素胃漂浮片各項(xiàng)檢查結(jié)果均符合2015年版《中國(guó)藥典》（四部）項(xiàng)下“0101片劑”相關(guān)規(guī)定。薄層色譜鑒別結(jié)果顯示，供試品溶液色譜中與五味子醇甲對(duì)照品、五味子對(duì)照藥材及原藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。含量測(cè)定結(jié)果顯示，五味子總木脂素胃漂浮片中五味子醇甲和總木脂素的平均含量分別為3.187、19.617 mg，初步制定該片劑每片中五味子醇甲含量不得低于2.50 mg、總木脂素含量（以五味子醇甲計(jì)）不得低于15.50 mg的限度。結(jié)論：五味子總木脂素胃漂浮片的制備工藝穩(wěn)定、可行，質(zhì)量可控。

關(guān)鍵詞 五味子總木脂素;胃漂浮片;五味子醇甲;處方優(yōu)化;質(zhì)量評(píng)價(jià);鑒別;含量測(cè)定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the preparation technology of gastric floating tablets of Schisandra chinensis total lignans （SCTL）， and evaluate the quality of prepared tablets. METHODS： Based on single factor test， the orthogonal experiment was conducted to optimize the formulation of SCTL gastric floating tablets with the contents of hydroxypropylmethylcellulose（HPMC） K15M， NaHCO3 and microcrystalline cellulose as the factors， using starting time， holding time and cumulative release rate of gastric floating tablets as evaluation indexes. The properties， weight difference， floatability and accumulative release rate of the prepared SCTL gastric floating tablets were determined. The gastric floating tablets were qualitatively identified by TLC， and the contents of schisandrin A and total lignans were determined by HPLC and UV spectrophotometry. RESULTS： The optimal formulation of SCTL gastric floating tablets was made up of 23% SCTL extract， 20% HPMC K15M， 40% microcrystalline cellulose， 15% sodium bicarbonate， 1% octadecyl alcohol and 1% polyvinylpyrrolidone. The results of detection of this preparation were in line with the related provisions of “0101 tablet” stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia （part Ⅳ）. TLC indicated that the chromatogram of the test sample showed the main spots of same color as the corresponding positions of the chromatogram of schizandrol A control， Schisandra chinensis reference substance and raw material， while the negative control has no interference. Content determination results shows that the average content of schizandrol A and total lignans in SCTL gastric floating tablets is 3.187， 19.617 mg. It was preliminarily formulated that the content limitation of schizandrol A in one tablet should not be less than 2.50 mg， and the content of total lignans （calculated by schizandrol A） should not be less than 15.50 mg. CONCLUSIONS： The preparation technology of SCTL gastric floating tablets is stable， feasible and controllable in quality.

KEYWORDS? ?Schisandra chinensis total lignans; Gastric floating tablets; Schizandrol A; Formulation optimization; Quality evaluation; Indentification; Content determination

五味子為木蘭科植物五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.]的干燥成熟果實(shí)，又稱北五味子[1]。中醫(yī)常用五味子治療久嗽虛喘、遺尿、尿頻、久瀉不止、自汗盜汗、內(nèi)熱消渴、心悸失眠等病癥[2]。五味子含有木脂素類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)等成分[3-4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，五味子木脂素類(lèi)成分具有保肝利膽、鎮(zhèn)靜催眠、抗過(guò)敏、抗衰老、提高機(jī)體免疫力等多種藥理作用，對(duì)消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等相關(guān)疾病均有顯著的治療效果[5-7]。藥動(dòng)學(xué)研究表明，五味子木脂素類(lèi)成分在體內(nèi)半衰期短、吸收代謝速度快、生物利用度偏低，故制成普通制劑時(shí)服用量大、用藥頻繁[8-9]。胃漂浮片是根據(jù)流體動(dòng)力學(xué)原理設(shè)計(jì)的一種新劑型，口服后迅速漂浮于胃液之上，在胃內(nèi)的滯留時(shí)間延長(zhǎng)，能改善吸收、提高生物利用度[10-11]。基于此，本研究擬制備五味子總木脂素胃漂浮片，以期提高五味子總木脂素的生物利用度，為五味子總木脂素新劑型的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

TDP-5型單沖壓片機(jī)（上海天凡藥機(jī)制造廠）;QCY-1940A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海愛(ài)朗儀器有限公司）;KW235DB型數(shù)控超聲波清洗器（天津市科萊恩實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司）;SYKES-50T型閃式提取器（鄭州賽克斯玻璃儀器有限公司）;754N AUTD型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 藥品與試劑

五味子藥材（批號(hào)：20170919）于2017年11月購(gòu)自黑龍江省五常市充河林業(yè)局，經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院曲中原教授鑒定為木蘭科植物五味子[S. chinensis （Turcz.） Baill.]的干燥成熟果實(shí);五味子醇甲對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)：18031905，純度：>98%）;五味子對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：170922-201809）;羥丙甲基纖維素K4M（HPMC K4M，批號(hào)：20170921）、HPMC K15M（批號(hào)：20170818）、HPMC K100M（批號(hào)：20170929）、羥乙基纖維素（批號(hào)：20180402）、微晶纖維素（批號(hào)：20180311）、單甘酯（批號(hào)：20170704）均購(gòu)自天津市天新精細(xì)化工開(kāi)發(fā)中心;胃蛋白酶（美國(guó)Biotopped公司，批號(hào)：20180318）;聚乙烯吡咯烷酮（博愛(ài)新開(kāi)源制藥股份有限公司，批號(hào)：P171030001）;十八醇（湖南爾康制藥股份有限公司，批號(hào)：105220171201）;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用試劑，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 五味子總木脂素浸膏的制備

采用閃式提取法[12]以乙酸乙酯為溶劑進(jìn)行提取。稱取五味子藥材適量，加入5倍體積（mL/g）的乙酸乙酯，提取3次，每次1 min;合并提取液，濃縮制成五味子總木脂素浸膏（得率為15.34%;以五味子醇甲計(jì)，其含量為17.06%），備用。

2.2 五味子中總木脂素的含量測(cè)定

2.2.1 五味子醇甲對(duì)照品溶液的制備 精密稱定五味子醇甲對(duì)照品2.5 mg于25 mL量瓶中，加甲醇適量后超聲（功率：150 W，頻率：40 kHz）處理使溶解，以甲醇定容，制備成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL五味子醇甲對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取 1 片五味子木脂素胃漂浮片置于 900 mL 人工胃液中，待全部溶解后取出 5 mL溶液，置于水浴鍋上蒸干，然后加 10 mL 甲醇復(fù)溶，作為供試品溶液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取五味子醇甲對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得五味子醇甲系列溶液。以甲醇為空白試劑，采用紫外檢測(cè)儀于220 nm處測(cè)定吸光度。以五味子醇甲質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x，? ? mg/mL）、吸光度為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果得標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=101.38x+0.065 7（r=0.999 7），表明五味子醇甲質(zhì)量濃度在0.001～0.01 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4 方法學(xué)考察 （1）精密度試驗(yàn)：取五味子總木脂素胃漂浮片供試品溶液（批號(hào)：20180915，下同），采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于220 nm波長(zhǎng)處連續(xù)測(cè)定 6次。結(jié)果，總木脂素吸光度的RSD 為0.64%（n=6），表明儀器精密度良好。（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取五味子總木脂素胃漂浮片供試品溶液（批號(hào)：20180915，下同），于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h后，采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于220 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果，總木脂素吸光度的RSD為0.76%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。（3）重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批次五味子總木脂素胃漂浮片（批號(hào)：20180915，下同）6片，按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制備 6 份供試品溶液，采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于220 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，總木脂素含量的RSD為0.86%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。（4）加樣回收率試驗(yàn)：取同一批五味子總木脂素胃漂浮片（批號(hào)：20180915，下同）10片（共5 g，每片含總木脂素19.6 mg），研成粉末，混勻，取6份，每份約0.01 g，分別加入0.1 mg/mL五味子醇甲對(duì)照品溶液4 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于220 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，總木脂素的平均回收率為99.21%（RSD=0.75%，n=6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.3 五味子總木脂素胃漂浮片累積釋放率測(cè)定

采用轉(zhuǎn)籃法測(cè)定胃漂浮片中總木脂素的體外累積釋放率[13]。取不同制備工藝的五味子總木脂素胃漂浮片分別置于干燥轉(zhuǎn)籃內(nèi)，再將轉(zhuǎn)籃放入人工胃液中，模擬胃蠕動(dòng)條件設(shè)置恒定溫度（37±0.5） ℃、恒定轉(zhuǎn)速100 r/min、人工胃液體積900 mL。自放入起計(jì)算時(shí)間，在考察的時(shí)間點(diǎn)精密量取5 mL溶液，并用同體積、同溫度、同pH值的空白溶出介質(zhì)進(jìn)行補(bǔ)足。將取樣液揮干，加甲醇10 mL復(fù)溶，過(guò)濾，取續(xù)濾液在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算該時(shí)間點(diǎn)的樣品液中總木脂素濃度，然后根據(jù)公式計(jì)算總木脂素的累積釋放率（Er）[Er=[Ve [∑][n-1][1]ci+V0cn

mdrug] ×100%，式中Er表示藥物累積釋放率，Ve表示測(cè)定用取樣液的體積（5 mL），V0表示人工胃液總體積（900 mL），ci表示第i次取樣時(shí)釋放液中的藥物濃度，cn表示第n次取樣時(shí)釋放液中的藥物濃度，mdrug表示完全釋放的藥物總質(zhì)量]。

2.4 五味子總木脂素胃漂浮片的漂浮性能測(cè)定

以900 mL人工胃液為釋放介質(zhì)，設(shè)置100 r/min 恒速攪拌、釋放溫度保持在（37±0.5） ℃。將胃漂浮片放入溶出杯，記錄起漂時(shí)間和持漂時(shí)間（自放入杯中起至片劑漂浮至液面的時(shí)間為起漂時(shí)間，從起漂起至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的時(shí)間為持漂時(shí)間）。

2.5 單因素試驗(yàn)篩選處方材料種類(lèi)

親水凝膠骨架材料遇胃液后會(huì)形成凝膠層，能夠維持片劑的漂浮性、延長(zhǎng)滯留時(shí)間、控制藥物釋放，故為胃漂浮片的重要載體，其中HPMC最為常用，不同分子量的HPMC吸水膨脹能力不同，對(duì)制劑漂浮性能的影響也不同[14]。另外，處方中添加低密度疏水性物質(zhì)（即低密度輔料）可使漂浮片在水化膨脹前即開(kāi)始漂浮，并防止內(nèi)含的空氣逸出，從而起到維持漂浮、緩慢釋藥、增加載藥量的作用;添加起泡劑也可提高漂浮性能[15]?；诖?，本研究以胃漂浮片的外觀及漂浮性能（參考相關(guān)文獻(xiàn)[13，16]設(shè)定：當(dāng)起漂時(shí)間<20 s、持漂時(shí)間>11 h時(shí)，漂浮性能較好）作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)篩選胃漂浮片親水凝膠骨架材料、低密度輔料和起泡劑的種類(lèi)。

2.5.1 親水性凝膠骨架材料的篩選 固定處方比例為五味子總木脂素浸膏23%、親水性凝膠骨架材料20%、微晶纖維素30%、NaHCO3 15%、淀粉10%、交聯(lián)聚維酮1%、十八醇1%（片重0.5 g，下同），考察HPMC不同型號(hào)（K4M、K15M、K100M）對(duì)胃漂浮片的漂浮性能和外觀的影響。先將五味子總木脂素浸膏溶于無(wú)水乙醇中，分別加入3種不同型號(hào)的HPMC，混勻，揮干乙醇，再與其他輔料混合均勻，過(guò)60目篩3次后混勻，壓片，控制片劑硬度在4～5 kgf。結(jié)果，用K15M型HPMC進(jìn)行制備的五味子總木脂素胃漂浮片的外觀較好、顏色均一，起漂時(shí)間為17 s，持漂時(shí)間>11 h，符合20 s左右起漂的預(yù)定要求，詳見(jiàn)表1。

2.5.2 低密度輔料的篩選 固定處方比例為五味子總木脂素浸膏23%、HPMC K15M 20%、低密度輔料30%、NaHCO3 15%、淀粉10%、交聯(lián)聚維酮1%、十八醇1%，考察單甘酯、羥乙基纖維素、微晶纖維素這3種低密度輔料對(duì)胃漂浮片的漂浮性能和外觀的影響。五味子總木脂素胃漂浮片的制備過(guò)程同“2.5.1”項(xiàng)下“先將五味子……控制片劑硬度在4～5 kgf”操作。結(jié)果，用微晶纖維素進(jìn)行制備的五味子總木脂素胃漂浮片的外觀較好，顏色均一，起漂時(shí)間為19 s，持漂時(shí)間>11 h，詳見(jiàn)表1。

2.5.3 起泡劑的篩選 固定處方比例為五味子總木脂素浸膏 23%、HPMC K15M 20%、微晶纖維素30%、起泡劑15%、淀粉10%、交聯(lián)聚維酮1%、十八醇1%，考察Na2CO3、CaCO3、NaHCO3這3種起泡劑對(duì)五味子總木脂素胃漂浮片的漂浮性能和外觀的影響。五味子總木脂素胃漂浮片的制備過(guò)程同“2.5.1”項(xiàng)下“先將五味子……控制片劑硬度在4～5 kgf”操作。結(jié)果，用Na2CO3進(jìn)行制備的五味子總木脂素胃漂浮片的起漂時(shí)間為11 s，但片劑表面不光滑，所以最終選擇NaHCO3作為起泡劑（所得片劑起漂時(shí)間為24 s，持漂時(shí)間>11 h），詳見(jiàn)表1。

2.6 正交試驗(yàn)優(yōu)化處方工藝

2.6.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇HPMC K15M（A）、NaHCO3（B）、微晶纖維素（C）的處方比例等3個(gè)因素作為考察對(duì)象，結(jié)合預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，每個(gè)因素選定3個(gè)不同水平，分別按“2.5.1”項(xiàng)下“先將五味子……控制片劑硬度在4～5 kgf”操作制備五味子總木脂素胃漂浮片，再以起漂時(shí)間、持漂時(shí)間、2 h和12 h時(shí)的累積釋放率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，并進(jìn)行綜合評(píng)分計(jì)算。參考相關(guān)文獻(xiàn)方法[17]，將最優(yōu)的五味子總木脂素胃漂浮片設(shè)定為藥物在2 h時(shí)的累積釋放率為30%、在12 h時(shí)的累積釋放率為90%、起漂時(shí)間為20 s、持漂時(shí)間為12 h，然后根據(jù)公式計(jì)算綜合評(píng)分：綜合評(píng)分=|a1-30%|×100+|a2-90%|×100+|b-20|+|c-12|，其中a1、a1分別為所制五味子總木脂素胃漂浮片在2、12 h時(shí)的累積釋放率，b、c分別為所制五味子總木脂素胃漂浮片的起漂時(shí)間、持漂時(shí)間。綜合評(píng)分越小，表明五味子總木脂素胃漂浮片的綜合質(zhì)量越好，制備工藝越好。因素與水平見(jiàn)表2，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

由表3、表4可知，各因素對(duì)五味子總木脂素胃漂浮片的影響大小順序?yàn)镃>A>B，且因素A和C的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），由此得出最優(yōu)處方為A2B2C3，即HPMC K15M 20%、NaHCO3 15%、微晶纖維素40%。

2.6.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 按“2.6.1”項(xiàng)下最優(yōu)處方稱取相應(yīng)主藥和輔料，按“2.5.1”項(xiàng)下“先將五味子……控制片劑硬度在4～5 kgf”操作制備3批五味子總木脂素胃漂浮片（批號(hào)：20180915、20180921、20180927），每批隨機(jī)取3片，測(cè)定其起漂時(shí)間、持漂時(shí)間、2 h和12 h時(shí)的累積釋放率。結(jié)果，最優(yōu)處方所制五味子總木脂素胃漂浮片的起漂時(shí)間為19～20 s，持漂時(shí)間均為12 h，2 h累積釋放率為28.54%～31.26%，12 h累積釋放率為92.17%～93.11%，詳見(jiàn)表5。

2.7 五味子總木脂素胃漂浮片的質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.7.1 性狀考察 取“2.6.2”項(xiàng)下制備的3批五味子總木脂素胃漂浮片數(shù)片，放在白色紙張上，在同一自然光源下，用肉眼在距離片劑30 cm高度處觀察。結(jié)果，五味子總木脂素胃漂浮片表面平整光滑，呈扁平藥片狀，顏色為淺黃色且顏色均勻。

2.7.2 片重差異考察 隨機(jī)取“2.6.2”項(xiàng)下制備的3批五味子總木脂素胃漂浮片各20片，精密稱定總質(zhì)量，計(jì)算平均片重;再分別精密稱定每片片重，然后將每片片重與平均片重進(jìn)行比較。結(jié)果，五味子總木脂素胃漂浮片的片重均符合2015版《中國(guó)藥典》（四部）片劑項(xiàng)下規(guī)定的片重差異限度±5.0%[13]。

2.7.3 累積釋放率測(cè)定 隨機(jī)取“2.6.2”項(xiàng)下制備的3批五味子總木脂素胃漂浮片各2片，按 “2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定其在2、4、6、8、10、12 h時(shí)總木脂素的累積釋放率。結(jié)果，3批五味子總木脂素胃漂浮片中總木脂素均緩慢、非恒速地釋放，詳見(jiàn)表6。

2.7.4 漂浮性能檢測(cè) 在進(jìn)行五味子總木脂素胃漂浮片的累積釋放率測(cè)定時(shí)，按“2.4”項(xiàng)下方法記錄片劑的起漂時(shí)間和持漂時(shí)間。結(jié)果，3批五味子總木脂素胃漂浮片的起漂時(shí)間均小于20 s，持漂時(shí)間均大于11 h，表明該片劑具有很好的漂浮能力。

2.8 五味子總木脂素胃漂浮片定性鑒別

2.8.1 五味子對(duì)照藥材溶液及原藥材溶液的制備 取五味子對(duì)照藥材和原藥材粉末各2 g，分別加入10 mL甲醇超聲（功率：150 W，頻率：40 kHz）提取30 min，合并濾液并濃縮后加入甲醇溶解，定容至25 mL量瓶中，即得五味子對(duì)照藥材溶液和原藥材溶液。

2.8.2 五味子總木脂素溶液的制備 取“2.1”項(xiàng)下五味子總木脂素浸膏2 g，加入甲醇溶解，定容至25 mL量瓶中，即得五味子總木脂素溶液。

2.8.3 供試品溶液的制備 取“2.6.2”項(xiàng)下制備的3批五味子總木脂素胃漂浮片，每批各取3片，加入適量水溶解，置于水浴鍋上揮干，再加入適量甲醇復(fù)溶，濾過(guò)，定容至25 mL量瓶中，即得供試品溶液。

2.8.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取陰性對(duì)照品（按最優(yōu)處方和工藝制備的不含五味子總木脂素的樣品），按“2.8.3”項(xiàng)下方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.8.5 薄層色譜鑒別 按2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502[13]進(jìn)行薄層色譜鑒別。取“2.2.1”和“2.8.1”～“2.8.4”項(xiàng)下溶液，分別點(diǎn)適量于同一硅膠薄層板上，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15 ∶ 5 ∶ 1，V/V/V）溶液為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)后，取出，晾干，于254 nm紫外光燈下檢視。結(jié)果，在與五味子醇甲對(duì)照品溶液、五味子對(duì)照藥材及原藥材色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液色譜中顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，詳見(jiàn)圖1。

2.9 五味子總木脂素胃漂浮片中五味子醇甲的含量測(cè)定采用HPLC法進(jìn)行測(cè)定。

2.9.1 色譜條件 色譜柱為SilGreen HPLC Column （250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為甲醇-水，梯度洗脫（0～5 min，75%甲醇;5～10 min，75%甲醇→80%甲醇;10～30 min，80%甲醇;30～35 min，80%甲醇→100%甲醇）;流速為 1.0 mL/min;柱溫為35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm;進(jìn)樣量為10 μL。

2.9.2 溶液的制備 （1）供試品溶液：隨機(jī)取1片五味子總木脂素胃漂浮片，加入適量水溶解，置于水浴鍋上揮干，加甲醇復(fù)溶，定容至25 mL量瓶中，采用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。（2）陰性對(duì)照溶液：按“2.8.4”項(xiàng)下方法制備，采用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照品溶液。

2.9.3 專屬性試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下五味子醇甲對(duì)照品溶液、“2.9.2”項(xiàng)下供試品溶液和陰性對(duì)照溶液適量，按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，供試品溶液的色譜圖中在與五味子醇甲相同出峰時(shí)間出現(xiàn)相應(yīng)色譜峰，分離度好，五味子醇甲的理論板數(shù)>3 000，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，表明方法專屬性良好，詳見(jiàn)圖2。

2.9.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下五味子醇甲對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，用甲醇定容至10 mL量瓶中，得系列對(duì)照品溶液，然后按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。以五味子醇甲的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果，回歸方程為y=398.33x+7.809 1（r=0.999 9），表明五味子醇甲質(zhì)量濃度在0.01～0.1 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.9.5 方法學(xué)考察 （1）精密度試驗(yàn)：取“2.9.2”項(xiàng)下供試品溶液，按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲峰面積的 RSD 為0.90%（n=6），表明儀器精密度良好。（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取“2.9.2”項(xiàng)下供試品溶液，于室溫下放置 0、2、4、6、8、12 h時(shí)，按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲峰面積的RSD 為0.53%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。（3）重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)：20180915）五味子總木脂素胃漂浮片6片，分別按“2.9.2”項(xiàng)下方法制備 6 份供試品溶液，再按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，五味子醇甲含量的RSD為0.76%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。（4）加樣回收率試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)：20180915）五味子總木脂素胃漂浮片10片（5 g，每片約含五味子醇甲3.20 mg），研成粉末，取6份，每份約0.1 g，分別加入0.1 mg/mL五味子醇甲對(duì)照品溶液6 mL，按“2.9.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，五味子醇甲的平均加樣回收率為99.17%（RSD為0.98%，n=6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.9.6 五味子醇甲含量測(cè)定 取“2.6.2”項(xiàng)下制備的3批五味子總木脂素胃漂浮片，每批各取3片，按“2.9.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，然后按“2.9.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，并根據(jù)回歸方程計(jì)算每片五味子總木脂素胃漂浮片中五味子醇甲的含量。結(jié)果，五味子總木脂素胃漂浮片中五味子醇甲的平均含量為每片3.187 mg。按測(cè)定均值的80%確定五味子醇甲的含量下限[18]，建議規(guī)定每片五味子總木脂素胃漂浮片中五味子醇甲的含量不得低于2.50 mg。

2.10 五味子總木脂素胃漂浮片中總木脂素的含量測(cè)定

采用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。取“2.6.2”項(xiàng)下制備的五味子總木脂素胃漂浮片，每批各取3片，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算每片五味子總木脂素胃漂浮片中總木脂素含量。結(jié)果，五味子總木脂素胃漂浮片中總木脂素的平均含量（以五味子醇甲計(jì)）為每片19.617 mg。按測(cè)定均值的80%確定總木脂素的含量下限[18]，建議規(guī)定每片五味子總木脂素胃漂浮片中總木脂素含量（以五味子醇甲計(jì)）不得低于15.50 mg。

3 討論

本研究旨在將提取純化后的五味子總木脂素類(lèi)成分制備成胃漂浮片，提高其穩(wěn)定性，增加在胃腸道的停留時(shí)間和吸收，提高總木脂素的生物利用度，為該類(lèi)成分更好地發(fā)揮藥效作用提供一種劑型支持。本研究?jī)?yōu)化了五味子木脂素胃漂浮片的最優(yōu)處方，并對(duì)其進(jìn)行性狀、片重差異、漂浮性能檢查以及薄層色譜鑒別等。結(jié)果，最優(yōu)處方比例為五味子浸膏23%、HPMC K15M 20%、微晶纖維素40%、NaHCO3 15%、十八醇1%、交聯(lián)聚維酮1%。所制片劑各項(xiàng)檢查結(jié)果均符合要求，并根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果建議規(guī)定每片五味子木脂素胃漂浮片中五味子醇甲含量不得低于2.50 mg、總木脂素含量（以五味子醇甲計(jì)）不得低于15.50 mg的含量限度。五味子的藥用價(jià)值較高，本課題組后續(xù)將深入研究該制劑保肝、斂肺止咳等方面的藥效作用，以期為其后續(xù)臨床開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：66.

[ 2 ] 田代華.實(shí)用中藥詞典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：304-310.

[ 3 ] 沈曉君，劉玉翠，曲曉波，等. HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地五味子中4種木脂素類(lèi)成分的含量[J].中國(guó)藥房，2017，28（3）：387-390.

[ 4 ] WANG X，YU J，LI W，et al. Characteristics and antioxidant activity of lignans in Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera from different locations[J]. Chem Biodivers，2018.DOI：10.1002/cbdv.201800030.

[ 5 ] 金銀萍，侯微，高薇，等.五味子抗氧化活性組分篩選[J].中國(guó)藥房，2016，27（19）：2622-2625.

[ 6 ] 張旻昱，吳宏偉，許利平，等.五味子及其活性成分治療心腦血管疾病藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2018，43（8）：1536-1546.

[ 7 ] 安娜.木脂素類(lèi)化合物藥理作用的研究進(jìn)展[J].科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新，2019（4）：28-29.

[ 8 ] 劉杰，徐劍，郭江濤.五味子活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，25（11）：206-215.

[ 9 ] 孫靖輝，王佳燁，陳建光.五味子木脂素的藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展[J].北華大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2019，20（5）：635-639.

[10] 吳麗穎，曹德英.胃內(nèi)滯留漂浮型給藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（3）：320-324.

[11] GONG L，YU M，SUN Y，et al. Design and optimization of gastric floating sustained-release mini-tablets of alfuzosin hydrochloride based on a factorial design：in vitro/in vivo evaluation[J]. Drug Dev Ind Pharm，2018，44（12）：1990-1999.

[12] 劉雅琳，張浩杰，馮素香，等.五味子中木脂素類(lèi)成分閃式提取工藝研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2019，34（9）：1939-1943.

[13] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S]. 2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：4、57、121.

[14] 周澤乾.羥丙甲纖維素與魔芋葡甘聚糖作為甲硝唑緩釋片輔料研究[D].天津：天津大學(xué)，2006.

[15] 樸洪澤，林文輝，李翠芳，等.輔料因素對(duì)胃漂浮片的制備及漂浮能力的影響[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25（2）：89-95.

[16] 朱艷華，閻雪瑩，王超.博落回總堿胃漂浮片的研制及體外釋放的研究[J].黑龍江醫(yī)藥，2012，25（3）：369-370.

[17] 張偉，宋洪濤，林方清.雷公藤胃漂浮緩釋片的制備和質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中草藥，2009，40（2）：210-214.

[18] 趙婭，馮慧，周珍，等. HPLC法同時(shí)測(cè)定四味姜黃湯散中7種成分的含量[J].中國(guó)藥房，2018，29（1）：29-33.

（收稿日期：2019-12-03 修回日期：2020-03-27）

（編輯：唐曉蓮）