豫南茶樹種質(zhì)資源籽實脂肪含量及脂肪酸組成分析

常亞麗，黃曉兵，蔣雙豐，黃雙杰，孫慕芳，劉威，郭桂義*

豫南茶樹種質(zhì)資源籽實脂肪含量及脂肪酸組成分析

常亞麗1，黃曉兵2，蔣雙豐3*，黃雙杰1，孫慕芳1，劉威1，郭桂義1*

1. 信陽農(nóng)林學院茶學院，河南省豫南茶樹資源綜合開發(fā)重點實驗室，河南省茶葉加工與檢測工程技術(shù)研究中心，河南 信陽 464000；2. 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東 湛江 524000；3. 信陽市農(nóng)業(yè)科學院/河南省茶葉工程技術(shù)中心，河南 信陽 464000

以豫南地區(qū)42份茶樹種質(zhì)資源的茶籽為研究對象，分析了茶籽含仁率及茶籽仁的脂肪含量，范圍分別在33.53%~71.60%、17.77%~38.39%。利用氣-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）檢測了茶籽仁中的脂肪酸組成和含量，共檢測到21種脂肪酸，其中主要成分棕櫚酸、硬脂酸、順-油酸、亞油酸和-亞麻酸的含量分別在2.64%~5.70%、0.21%~1.11%、7.33%~17.29%、0.09%~8.44%和0.01%~0.15%；相關(guān)性分析顯示，順-油酸與十三碳酸、十四碳酸和順-二十碳二烯酸的含量呈極顯著負相關(guān)，亞油酸與反-油酸、順-二十二碳六烯酸含量呈極顯著負相關(guān)；除了水仙7202茶籽仁中的飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸含量比值為3.08∶12.16∶1，其余茶樹種質(zhì)資源茶籽仁中，這三類脂肪酸的比值均約為1∶2.69∶1.37。中黃1號、農(nóng)抗早、迎霜、鄂茶11號、龍井43、中選8號、嶗山3號和黃金葉8個茶樹品種，不僅含仁率和脂肪含量較高，而且茶籽仁脂肪酸的組分和含量豐富、均衡，可初步篩選出來作為豫南地區(qū)葉籽兩用茶園的候選品種。

茶樹；茶籽；脂肪；脂肪酸；組成；含量

茶樹[(L.) O. Kuntze]是多年生木本經(jīng)濟作物，葉片一直以來都是其開發(fā)利用的主要對象；茶樹的種子稱為茶籽，富含15%~35%油脂，提取可得品質(zhì)與橄欖油類似的高級食用油[1]。因茶籽油比大豆油、山茶籽油的脂肪酸組成更均衡，生理活性成分含量更高，越來越多研究人員和消費者開始關(guān)注這一新興木本植物油脂[2]。近年來，國內(nèi)外學者采用氣相色譜法先后對日本、印度、土耳其和中國的茶籽油脂肪酸組成展開分析工作，一致認為茶籽油主要包含油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸和亞麻酸等5種脂肪酸，但因品種、取樣時間、地點和檢測方法不同，各報道數(shù)據(jù)間存在較大差異[3]。本文收集了豫南地區(qū)42份茶樹種質(zhì)資源的茶籽，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）比較了這些茶籽仁中脂肪酸組分和含量的差異，旨在為豫南地區(qū)茶樹種質(zhì)資源茶籽的加工利用提供參考，并結(jié)合茶籽含仁率和脂肪含量，初步篩選出一批適宜在豫南推廣的，含仁率和脂肪含量高，脂肪酸組成均衡的葉籽兩用茶樹品種。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料于2018年11月份完成收集整理工作。由河南省信陽市農(nóng)業(yè)科學院/茶葉工程技術(shù)中心提供樣品33份，靈山茶葉有限公司提供樣品3份，光山縣凈居寺茶場提供樣品3份，仙居鄉(xiāng)杏山茶園、祥云茶業(yè)有限公司和申林茶業(yè)有限公司各提供樣品1份（表1）。此外，由浙江省麗水市蓮都區(qū)農(nóng)業(yè)局提供了浙農(nóng)21號的茶籽，該品種是構(gòu)建當?shù)厝~籽兩用茶園的優(yōu)良候選品種之一。為考察不同栽培管理模式對茶籽性狀的影響，在兩個采樣點均收集了白葉1號茶籽。采用蔭蔽風干方式使樣品干燥至恒重后開展各項指標檢測工作。

1.2 儀器與試劑

Trace1310 ISQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（賽默飛世爾科技公司，美國）。37種脂肪酸混合標準品和內(nèi)標十九烷酸甲酯購于美國Sigma公司，其余試劑如濃鹽酸、甲醇、二氯甲烷等均購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 茶籽含仁率測定

茶籽含仁率測定參考惲卓婷等[4]的方法。

1.3.2 茶籽脂肪含量測定

采用GB 5009.6—2016《食品安全國家標準食品中脂肪的測定》中索氏提取法測定。

1.3.3 茶籽脂肪酸組成測定

采用甲酯化氣相色譜質(zhì)譜法測定茶籽中的脂肪酸組成[5]，具體方法如下：茶籽仁充分粉碎后取0.200?g加入到20?mL帶蓋取樣瓶中，繼續(xù)加入5?mL 5%鹽酸甲醇溶液，10?mL二氯甲烷-甲醇溶液（體積比1∶1），于80℃水浴鍋中水浴1?h。水浴完成后，冷卻至室溫，用甲醇定容至20?mL，作為樣品待測液。取樣品待測液1?mL，加入1?mL內(nèi)標液和1?mL 5%氨水溶液，混合后離心分離。取二氯甲烷相用0.22?μm濾膜過膜后上機測試。采用色譜柱TGA-MAX MS（30?m×0.25?mm×0.25?μm）；升溫程序：50℃保持3?min，以10℃·min-1的速率升溫至160℃，繼續(xù)以2℃·min-1的速率升溫至250℃，保持1?min；進樣口溫度250℃；載氣流速1.0?mL·min-1；分流進樣50∶1；質(zhì)譜條件：離子源溫度200℃，傳輸線溫度250℃，溶劑延遲時間3.00?min，掃描范圍：30~500?amu，離子源：EI源、70?eV。茶籽仁中各脂肪酸的絕對含量按下式計算：

表1 供試樣品及采集地信息

注：白茶1號a茶籽收集于河南省信陽市農(nóng)業(yè)科學院；白茶1號b茶籽采集于光山縣凈居寺附近茶園

Note: Baiye 1asample was supplied by Xinyang Academy of Agricultural Sciences of Henan Province. Baiye 1bsample was supplied from Jingju Temple Tea-making House of Guangshan Country

式中：i，試樣中各脂肪酸的含量；i，試樣測定液中個脂肪酸的峰面積；c19，內(nèi)標液濃度（g·mL-1）；c19，加入內(nèi)標液體積（mL）；i，脂肪酸甲酯的響應因子，每一種脂肪酸甲酯對應一個常量；c19，樣品中加入內(nèi)標的峰面積；，試樣的稱樣質(zhì)量（g）；FAMEi-Fai，每種脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)換為對應脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)（圖1）。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

采用SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析和相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶籽含仁率及脂肪含量比較

調(diào)查顯示，43份茶樹種質(zhì)資源的茶籽含仁率和脂肪含量有明顯差異（表2）。大多數(shù)種質(zhì)資源茶籽的含仁率在50%~70%，白毫早茶籽的含仁率最高，為71.60%；茶農(nóng)98茶籽的含仁率最低，僅為33.53%。如表2所示，共有30份茶籽的籽仁檢測了脂肪含量，平均值為28.13%；29份采集于豫南地區(qū)茶籽籽仁的平均脂肪含量達到了28.19%，高于劉國艷等[6]報道的河南桐柏5份茶籽仁粗脂肪平均值26.50%，本試驗研究結(jié)果更能代表河南省茶籽的脂肪含量水平。在這些材料中，木荷201的脂肪含量較低，為17.77%；含量較高的為中黃1號、農(nóng)抗早、迎霜、鄂茶11號、龍井43和中選8號，均在31.00%以上。

2.2 茶籽脂肪、脂肪酸組成及含量

43份茶籽中脂肪酸的組成和含量存在較大差異（表3）。分析中共檢測到21種脂肪酸組分，迎霜、黃金葉、中茶108、浙農(nóng)21號所含種類最多，有17種；中選8號、黟選1號、TRI-19、豫研-06、陜茶1號所含種類最少，有14種。順-9-十六碳一烯酸、二十一碳酸、順-11,14,17-二十碳三烯酸、順-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸、二十三碳酸僅在1~2份茶籽中檢測到，且含量多在0.01%~0.05%，故略去不做統(tǒng)計。選擇十三碳酸、十四碳酸、十六碳酸（棕櫚酸）、十八碳酸（硬脂酸）、順-9-十八碳一烯酸（順-油酸）、反-9-十八碳一烯酸（反-油酸）、順-9,12-十八碳二烯酸（亞油酸）、順-6,9,12-十八碳三烯酸（-亞麻酸）、順-9,12,15-十八碳三烯酸（-亞麻酸）、二十碳酸（花生酸）、順-11-二十碳一烯酸（花生烯酸）、順-二十碳二烯酸、順-8,11,14-二十碳三烯酸、芥酸、順-13,16-二十二碳二烯酸、順-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸（DHA）等16種在參試茶籽中大量檢測到的組分進行統(tǒng)計分析（表3）和相關(guān)性分析（表4）。

注：脂肪酸組分及其保留時間：丁酸3.39，己酸 7.16，辛酸11.30，癸酸 15.08，十一碳酸16.83，十二碳酸18.49，十三碳酸 20.25，十四碳酸22.58，順-9-十四碳一烯酸 23.64，十五碳酸25.85，順-10-十五碳一烯酸 27.36，十六碳酸30.58，順-9-十六碳一烯酸31.97，十七碳酸37.43，順-10-十七碳一烯酸40.09，十八碳酸39.41，順-9-十八碳一烯酸46.13，反-9-十八碳一烯酸47.56，順-9,12-十八碳二烯酸 50.91，反-9,12-十八碳二烯酸51.34，順-6,9,12-十八碳三烯酸52.72，內(nèi)標物 53.01，順-9,12,15-十八碳三烯酸 54.37，二十碳酸58.58，順-11-二十碳一烯酸59.7，順-11,14-二十碳二烯酸61.82，順-8,11,14-二十碳三烯酸63.22，二十一碳酸63.51，順-5,8,11,14-二十碳四烯酸64.19，順-11,14,17-二十碳三烯酸64.73，順-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸67.14，二十二碳酸67.94，順-13-二十二碳一烯酸68.66，順-13,16-二十二碳二烯酸70.9，二十三碳酸 72.03，二十四碳酸 75.58，順-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸76.28，二十四碳酸 76.61

所有供試材料中茶籽的脂肪酸總量在14.87%~33.12%，飽和脂肪酸（Saturated fatty acid，SFA）含量在2.96%~6.87%，單不飽和脂肪酸（Monounsaturated fatty acid，MUFA）含量7.47%~17.62%，多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acid，PFA）含量1.18%~8.63%。其中，褚群選2號茶籽仁的SFA和MUFA含量最低，水仙7202茶籽仁的PFA含量最低，而中黃1號3個指標含量均最高，總量為33.12%。此外，嶗山3號和鄂茶11號茶籽仁的脂肪酸總量也較高，分別達到了27.52%和30.26%。除了水仙7202，其他樣品飽和脂肪酸SFA、MUFA、PFA含量的平均比值為1∶2.69∶1.37，與江南地區(qū)、湖南岳陽及福建地區(qū)茶籽油中這三類脂肪酸的比值相似[4,7-8]。

表2 茶籽含仁率和脂肪含量

注：白茶1號a和白茶1號b與表1相同

Note: Baiye 1aand Baiye 1bis same as Table 1

表3 茶籽脂肪酸組分絕對含量

注：a 十三碳酸（C13:0），b 十四碳酸（C14:0），c棕櫚酸（C16:0），d 硬脂酸（C18:0），e 順-油酸（C18:1c），f反-油酸（C18:1t），g亞油酸（C18:2c），h-亞麻酸（C18:3n6），i-亞麻酸（C18:3n3），j 二十碳酸（C20:0），k 順-11-二十碳一烯酸（C20:1），l 順-二十碳二烯酸（C20:2），m 順-8,11,14-二十碳三烯酸（C20:3），n 順-13-二十二碳一烯酸（C22:1），o 順-13,16-二十二碳二烯酸（C22:2），p 順-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸（C22:6），q 飽和脂肪酸酸，r 單不飽和脂肪酸，s 多不飽和脂肪酸；白葉1號a和白葉1號b注釋信息同表1

Note: a tridecanoic acid (C13:0), b myristic acid (C14:0), c palmitic acid (C16:0), d stearic acid (C18:0), e cis-oleic acid (C18:1c), f 9-trans-oleic acid (C18:1t), g cis-9,12-linoleic acid (C18:2c), h-linolenic acid (C18:3n6), i-linolenic acid (C18:3n3), j arachidic acid (C20:0), k arachidonic acid (C20:1), l cis-11,14-eicosadienoic acid (C20:2), m cis-8,11,14-eicosatrienoic acid (C20:3), n cis-13-docosenoic acid (C22:1), o docosadienoic acid (C22:2), p cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic (DHA) acid (C22:6), q saturated fatty acid, r monosaturated fatty acid, s polyunsaturated fatty acid. Baiye 1aand Baiye 1bare same as Table 1

續(xù)表3