玄菊解毒合劑含漱液輔助治療慢性牙周炎的臨床觀察

徐倩容 楊里娜 艾黃萍 鄭濤 左渝陵

牙周炎是累及牙周支持組織的一種炎癥性、破壞性疾病，其中以慢性牙周炎最為常見，其最終會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的牙周骨量喪失，牙齒松動(dòng)，是成年人失牙的首位原因[1]。牙周炎屬于中醫(yī)學(xué)“牙宣”的范疇，歷代文獻(xiàn)中又可見齒槁、齒挺、齒動(dòng)搖、牙漏等病名?；颊邥?huì)出現(xiàn)齦肉紅腫、滲血滲膿、盲袋形成、牙根宣露、牙齒松動(dòng)等臨床癥狀[2]。本課題組前期針對妊娠性齦炎采用玄菊解毒凝膠輔助治療后有明顯改善[3]，而玄菊解毒合劑以漱口水的形式對慢性牙周炎的治療效果如何，是否有臨床應(yīng)用價(jià)值，其原理如何，是本研究的重點(diǎn)。本研究通過觀察治療前后慢性牙周炎患者臨床療效，以及檢測齦溝液白細(xì)胞介素-1β(IL -1β)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)含量的變化，旨在為該類患者提供更好的臨床治療方法提供參考依據(jù)，研究結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

根據(jù) 1999 年牙周病國際研討會(huì)制定的分類標(biāo)準(zhǔn)，選取2013-07～2015-06間于我科就診的慢性牙周炎患者共60 例。納入患者均具備下列牙周病的典型癥狀：余留牙不少于20 顆；且有不同程度的牙齦紅腫、充血、糜爛，探診牙齦出血，或伴牙松動(dòng)、牙周溢膿，每一象限至少有 2或 2 以上患牙牙周探診深度 ≥ 4 mm； X線片顯示牙槽骨有不同程度的吸收，但吸收不超過根長 1/ 2。排除系統(tǒng)疾病，若為女性，非經(jīng)期與妊娠期； 1 個(gè)月內(nèi)未使用抗生素； 3 個(gè)月內(nèi)未使用過避孕藥等性激素制劑； 3 個(gè)月內(nèi)未使用過免疫制劑；患者簽署知情同意書。

1.2 病例分組

共60 例，年齡35～64 歲，平均51 歲，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組各30 例。 2 組性別、年齡等比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，詳見表 1。

組 別男女年齡/歲對照組191150.93±8.59實(shí)驗(yàn)組21950.70±8.72

1.3 方法

1.3.1 治療方法 2 組患者均在進(jìn)行口腔宣教及牙周基礎(chǔ)治療后，分別輔以生理鹽水、玄菊解毒合劑漱口水(由金銀花50 g、 野菊花50 g、 玄參50 g、 板藍(lán)根50 g、 補(bǔ)骨脂25 g組成)，統(tǒng)一制成成品水煎液200 ml，2 瓶，每次飯后含漱20～25 ml，3 次/d，2 min/次含漱治療，14 d為1 個(gè)療程。

1.3.2 牙周臨床指標(biāo)觀察 采用單盲法，于治療前和治療后14 d，由同一名醫(yī)師使用牙周探針(Silver，Hu-Friedy)分別檢查每位患者口腔內(nèi)6 顆牙：11、31、16、46、26、36，每顆牙探診6個(gè)位點(diǎn)，即近中頰面(MB)、頰面(B)、遠(yuǎn)中頰面(DB)、遠(yuǎn)中舌面(DL)、舌面(L)、近中舌面(ML)，每顆牙探診最深的位點(diǎn)用作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。按照《口腔預(yù)防醫(yī)學(xué)》檢測標(biāo)準(zhǔn)[4]，評價(jià)治療前后牙周狀態(tài)相關(guān)指標(biāo)：牙齦指數(shù)(GI)、牙周探診深度(PD)和改良出血指數(shù)(mBI)。

1.3.3 齦溝液中的IL-1β和MMP-2采集與測定 每位患者選擇取1顆受檢牙(首選右下第一磨牙，若缺失則選右下第二磨牙或左下第一磨牙)，輕柔去除待測牙齦上大塊結(jié)石，棉卷隔濕，輕吹牙面至干燥，將已稱量的whatman 3#標(biāo)準(zhǔn)無菌濾紙條(2 mm×10 mm大小)插入取樣牙頰側(cè)近中、中央、遠(yuǎn)中3 個(gè)位點(diǎn)的牙周袋內(nèi)，微感阻力，30 s后取出(若有血液和唾液污染，則棄置不用)。將同一患者的3 張濾紙條放入加有200 μl PBS緩沖液的EP管中，-70 ℃儲(chǔ)存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)對樣本中IL-1β和MMP-2 濃度進(jìn)行檢測(CCC, USA)。采用明膠酶活性熒光測量法對MMP-2生物活性進(jìn)行檢測(Thermo Fisher, InvitrogenTM, EnzChek, D-12054 USA)，最終在2 h時(shí)用495 nm測量熒光值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS軟件對治療前后GI、 mBI進(jìn)行秩和檢驗(yàn)； PD、IL-1β和MMP-2指標(biāo)自身前后進(jìn)行配對t檢驗(yàn)；不同干預(yù)組組間進(jìn)行方差檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 2 組病例治療前后牙周臨床指標(biāo)比較

2 組患者治療前牙周臨床指標(biāo)(GI、PD、mBI)對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組、對照組受檢牙齒治療后的GI、mBI較治療前均有明顯下降(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組GI、mBI較對照組下降明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而PD 2 組組內(nèi)對比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而治療后組間對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表 2)。

Tab 2 Comparison of GI, mBI, PD between the 2 groups of pre- and post-treatment (n=30,

注：①：治療后與治療前對比，P<0.05； ②：治療后，實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，P<0.05

2.2 2 組病例治療前后齦溝液中IL-1β和MMP-2變化

治療前2 組病例的兩項(xiàng)指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 14 d后，實(shí)驗(yàn)組、對照組受檢牙治療后的齦溝液中IL-1β和MMP-2的濃度較治療前均有不同程度的下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；并且治療后指標(biāo)對比，實(shí)驗(yàn)組較對照組下降明顯，其結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖 1)。

2.3 2 組病例治療前后齦溝液中MMP-2的酶活性變化

治療前2 組病例的MMP-2活性定量值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 14 d后，實(shí)驗(yàn)組、對照組受檢牙治療后的齦溝液中MMP-2活性較治療前均有不同程度的下降，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；并且治療后的MMP-2活性相比，實(shí)驗(yàn)組較對照組下降明顯，其結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，圖 2)。結(jié)果提示MMP-2酶活性與MMP-2的量直接相關(guān)，也提示Elisa結(jié)果的可信。

3 討 論

牙周病是口腔臨床常見疾病，更與全身健康或者疾病呈現(xiàn)雙向關(guān)系，患牙周炎的患者可能處于患其他疾病的危險(xiǎn)中，或者提示患者可能已經(jīng)患某種系統(tǒng)性疾??；同時(shí)，嚴(yán)重的牙周炎不僅影響患者系統(tǒng)疾病的治療與健康的恢復(fù)，而且大大降低其生活質(zhì)量。可見牙周病的治療至關(guān)重要，牙周健康與全身健康密不可分[1]。

通過牙周病發(fā)病機(jī)理的研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體的免疫反應(yīng)在牙周病的發(fā)生發(fā)展中至關(guān)重要，炎癥正是通過激活免疫系統(tǒng)而導(dǎo)致了牙槽骨的吸收[5]。相關(guān)的細(xì)胞因子以及基質(zhì)金屬蛋白酶在誘導(dǎo)牙周骨吸收中扮演著重要的角色[6]。IL-1β和MMP-2在齦溝液中含量的變化可與牙周炎癥狀呈正相關(guān)[7]。IL-1β主要通過刺激T、B淋巴細(xì)胞增殖、產(chǎn)生免疫應(yīng)答、誘導(dǎo)宿主炎癥反應(yīng)、促進(jìn)骨及軟骨破壞吸收[8]，IL-1β是一種強(qiáng)大的炎性介質(zhì)，其含量變化與反映牙周炎癥程度的客觀指標(biāo)如GI、PD等有相關(guān)性[7,9-11]，被認(rèn)為是介導(dǎo)牙周炎發(fā)生發(fā)展的重要因子。而MMP-2與牙周組織中膠原纖維的改建關(guān)系密切，在牙根吸收中發(fā)揮作用[12]，同時(shí)MMP-2可激活多種細(xì)胞因子如IL-1β等[13]，是牙周組織破壞過程的關(guān)鍵。

牙周炎根據(jù)其臨床表現(xiàn)可將其歸于中醫(yī)牙宣病范疇。臨證主要是以牙齦紅腫，齦肉日漸萎縮，齒縫中常滲血滲膿，牙根宣露，甚則牙齒疏豁松動(dòng)，終至缺失脫落為主要癥狀，是口腔常見病之一[2]。中醫(yī)認(rèn)為牙齒雖歸腎所主，而上下牙床屬陽明胃與大腸，牙齒與齦肉既需腎精之固濟(jì)，亦需氣血之濡養(yǎng)，其為病與腎胃關(guān)系至密。臨證以實(shí)在陽明，胃火上炎多見[2]。本方中以川銀花宣散上焦風(fēng)熱，清熱解毒，為君藥；野菊花與板藍(lán)根共用，加強(qiáng)清熱解毒作用，玄參滋陰解毒，鹽補(bǔ)骨脂引藥入腎經(jīng)，補(bǔ)腎固齒。諸藥合用，起清熱解毒，消腫止痛之效[14]。

目前治療牙周病的基本方法以牙周基礎(chǔ)治療為主，嚴(yán)重的牙周炎輔以西藥、手術(shù)治療等[1]，而長期使用抗生素等西藥可能會(huì)產(chǎn)生耐藥、菌群失調(diào)等問題。本研究按照中醫(yī)理念，探求能配合基礎(chǔ)治療，有效緩解癥狀，促進(jìn)恢復(fù)的治療方法。玄菊解毒合劑漱口水中，金銀花、野菊花、板藍(lán)根清熱解毒，不僅有抗菌性，且一定程度上抵抗內(nèi)毒素作用[14-15]；玄參清熱涼血、養(yǎng)陰生津、解毒散結(jié)[16]，補(bǔ)骨脂能顯著抑制IL-1β等牙周膜細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)外[17]，還能調(diào)節(jié)骨代謝，加速骨愈合[18]。幾味藥相輔相成，可望輔助基本療法，共同促進(jìn)牙周組織恢復(fù)。

在課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)[3]，玄菊解毒凝膠能有效減輕妊患娠期牙齦炎患者不適、口臭等癥狀，降低相應(yīng)的牙周觀察指標(biāo)和炎性因子等臨床指標(biāo)。而本研究觀察中，玄菊解毒合劑漱口水同樣降低了臨床指標(biāo)GI、mBI，以及IL-1β和MMP-2分泌量；在進(jìn)一步檢測MMP-2生物活性時(shí)，其結(jié)果顯示與MMP-2濃度變化相似。這些變化都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，證明了玄菊解毒合劑具有良好的臨床療效。雖然兩組治療前后PD變化明顯，但PD治療后組間對比變化不大，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能是由于牙周基礎(chǔ)治療配合生理鹽水和玄菊解毒合劑漱口水緩解減輕了炎癥癥狀，使得炎性因子分泌減少，腫脹的牙齦組織得以恢復(fù)，但牙周牙槽骨等支持組織的恢復(fù)是一個(gè)較長的過程，而本實(shí)驗(yàn)臨床治療觀察時(shí)間短，缺乏陽性對照，下一步我們將延長觀察時(shí)間，與陽性含漱劑如氯己定含漱劑等做對比，進(jìn)一步測定其附著喪失(attachment loss, AL)、細(xì)胞因子等指標(biāo)。

綜上，在治療慢性牙周炎上，玄菊解毒合劑漱口水可降低牙周臨床指標(biāo)，對降低炎性因子的含量也有一定積極作用，有一定臨床應(yīng)用前景。