復(fù)方中草藥制劑對凡納濱對蝦生長和非特異性免疫的影響

符云 付兵 郭曉奇 吳亞梅 馬志洲 王廣軍

摘 要 在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5 g·kg-1、1.0 g·kg-1和1.5 g·kg-1的自制中草藥制劑，配制成3種試驗(yàn)飼料，以基礎(chǔ)飼料為對照組飼料，每處理設(shè)3個(gè)平行樣，對體長為6～8 cm的凡納濱對蝦進(jìn)行為期60 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，每20 d取樣1次，以相對增重率、成活率為指標(biāo)，探討了中草藥制劑對凡納濱對蝦生長效應(yīng)的影響;以血清中溶菌酶（LZM）、一氧化氮合酶（NOS）、堿性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性為指標(biāo)，探討了中草藥制劑對凡納濱對蝦非特異性免疫效應(yīng)的影響。結(jié)果表明：在飼料中添加一定量的中草藥制劑，可以顯著提高凡納濱對蝦的體重增加倍數(shù)并降低飼料系數(shù)（P<0.05）。試驗(yàn)組凡納濱對蝦血清中的LZM、NOS、AKP和SOD等活性均高于對照組。結(jié)果證實(shí)，試驗(yàn)中的中草藥制劑具有顯著促進(jìn)凡納濱對蝦生長和提高凡納濱對蝦機(jī)體免疫能力的作用，建議在實(shí)際生產(chǎn)中的添加量為1.0 g·kg-1較為合適。

關(guān)鍵詞 中草藥;凡納濱對蝦;生長;免疫

凡納濱對蝦（Litopenaeus vanamei）又稱南美白對蝦，主要生長于太平洋西海岸至墨西哥灣中部。1988年我國引進(jìn)該蝦后，其年產(chǎn)量占全國蝦類年總產(chǎn)量的40%以上，逐漸成為我國主要的養(yǎng)殖蝦類，特別是在該蝦淡化養(yǎng)殖成功后，在內(nèi)陸地區(qū)廣泛開展養(yǎng)殖，現(xiàn)階段已經(jīng)發(fā)展到甘肅、青海等地。即使在西藏，目前也有養(yǎng)殖凡納濱對蝦的報(bào)道[1]。隨著凡納濱對蝦養(yǎng)殖區(qū)域的不斷擴(kuò)大，其養(yǎng)殖面積也在逐年增加，對苗種的需求也進(jìn)一步擴(kuò)大，導(dǎo)致一些苗種場對苗種的培育和選育就變得不夠重視，苗種的近親繁殖現(xiàn)象十分普遍，種質(zhì)退化嚴(yán)重，對疾病的抵抗力逐漸變?nèi)?。加上近年來環(huán)境污染嚴(yán)重，周邊水環(huán)境惡化，病原菌增多，引起養(yǎng)殖生產(chǎn)中的發(fā)病率增加，對凡納濱對蝦的養(yǎng)殖造成了毀滅性打擊，養(yǎng)殖過程中大量死亡的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前在凡納濱對蝦養(yǎng)殖過程中，有盈利的一般不超過20%。養(yǎng)殖環(huán)境的變化也導(dǎo)致微生物性病原的大量繁殖。傳統(tǒng)的化學(xué)藥物大量應(yīng)用和抗生素的濫用，致使病原菌的耐藥性增強(qiáng)，藥物的效果也越來越不明顯，其對環(huán)境的毒副作用也日益受到人們的詬病。此外，隨著社會發(fā)展，人們對自身的健康越來越重視，對包括水產(chǎn)品在內(nèi)的食品安全要求越來越高，一些傳統(tǒng)的化學(xué)制劑、抗生素類產(chǎn)品在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用必將退出歷史舞臺。所以，在保證養(yǎng)殖凡納濱對蝦正常生長的情況下，增強(qiáng)其自身的免疫能力、開發(fā)新的免疫增強(qiáng)劑成為凡納濱對蝦營養(yǎng)與飼料研究的重點(diǎn)[2]。

多年來，中草藥因具有副作用小、價(jià)格低廉、沒有殘留等特點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用越來越廣泛，且在水產(chǎn)養(yǎng)殖中逐漸顯露出良好的應(yīng)用效果，如在提高機(jī)體的免疫功能、促進(jìn)生長、增加養(yǎng)殖效益以及提升水產(chǎn)品的肉質(zhì)等方面，顯示出化學(xué)藥物難以達(dá)到的優(yōu)勢，符合了目前“綠色、健康、高效、生態(tài)”的綠色養(yǎng)殖發(fā)展理念。中草藥來源于天然植物，含有多糖類、氨基酸、維生素、酶類、油脂、蛋白質(zhì)以及生物堿等有利于機(jī)體生長的物質(zhì)。作為外源性功能飼料成分，具有提供額外營養(yǎng)、加快生長和增強(qiáng)免疫功能的作用[3-7]。

試驗(yàn)探討了在凡納濱對蝦飼料中加入一種自制的中草藥制劑，評價(jià)分析了其對凡納濱對蝦生長、飼料轉(zhuǎn)化率以及免疫效果的影響，探討中草藥制劑的促生長和提高免疫力的機(jī)制，為中草藥制劑在凡納濱對蝦無公害養(yǎng)殖中的大面積使用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中草藥制劑

中草藥制劑由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所自行研發(fā)配制，配方參考相關(guān)文獻(xiàn)，結(jié)合最近幾年的工作基礎(chǔ)，中草藥添加劑主要成分是杜仲15%、黃芪20%、甘草15%、陳皮5%、金銀花15%、黃連5%、魚腥草10%和白術(shù)10%等。將上述原料依次混合、攪拌、粉碎，最后過篩（100目）備用。

1.1.2 試驗(yàn)用蝦

試驗(yàn)所需要的對蝦由廣州金洋水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司提供，試驗(yàn)凡納濱對蝦在試驗(yàn)開始前先在試驗(yàn)容器內(nèi)暫養(yǎng)一個(gè)星期，觀察無異常后才用于試驗(yàn)。挑選健康、無病、健壯、外表無傷、大小一致的凡納濱對蝦飼養(yǎng)，所取蝦均長為（5.92±0.48）cm、均重為（1.01±0.15）g。

1.1.3 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)在珠江水產(chǎn)研究所試驗(yàn)基地的車間內(nèi)開展。

1.1.4 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在6 m3的小型塑料桶內(nèi)進(jìn)行，水深為1.1～1.2 m。試驗(yàn)所使用的水來自附近的池塘，經(jīng)過濾后用于試驗(yàn)?？紤]到凡納濱對蝦為海水蝦的習(xí)性，加入了一定的粗鹽，使試驗(yàn)水的鹽度為1～2。試驗(yàn)期間溫度為常溫，在21.0～30.0 ℃。整個(gè)試驗(yàn)期間連續(xù)用羅茨鼓風(fēng)機(jī)充氣，使溶解氧維持在5.0 mg·L-1以上。

1.2 試驗(yàn)方法

中草藥復(fù)合制劑的使用量為自變量，設(shè)計(jì)3個(gè)不同的添加水平，分別為A組（每噸飼料500 g）、B組（每噸飼料1 000 g）和C組（每噸飼料1 500 g），以不添加的飼料為對照組。每組分別設(shè)置3個(gè)重復(fù)。每個(gè)重復(fù)組投放60尾凡納濱對蝦。飼料基礎(chǔ)配方如表1所示。

1.3 試驗(yàn)期間的管理

整個(gè)養(yǎng)殖過程飼料的投喂量按照蝦體重的6%～8%投喂，同時(shí)根據(jù)具體的實(shí)際情況酌情調(diào)控。每日3次投喂，分別在8：00—9：00、12：00—13：00和16：00—17：00。在投喂2 h后收集并處理殘餌和糞便，每7 d換1/3的養(yǎng)殖水。

1.4 生長指標(biāo)

試驗(yàn)周期為60 d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)統(tǒng)計(jì)每個(gè)容器內(nèi)蝦的存活數(shù)并計(jì)數(shù)成活率，并對每個(gè)容器內(nèi)的蝦全部稱重。按照公式1～3分別計(jì)算增重倍數(shù)、餌料系數(shù)和成活率。

1.5 相關(guān)免疫評價(jià)指標(biāo)的取樣

在試驗(yàn)開始后的第20 d、40 d和60 d，每個(gè)試驗(yàn)容器內(nèi)隨機(jī)取3尾蝦，取其尾部肌肉，準(zhǔn)確稱量重量后，將樣品放在冰浴中勻漿，加入0.9%的生理鹽水，調(diào)至濃度為0.1 g·mL-1。離心機(jī)溫度調(diào)至4 ℃，將勻漿液在4 000 r·min-1離心10 min后，取上清液備用。

試驗(yàn)選取一氧化氮合酶（NOS）、溶菌酶（LZM）、堿性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）作為免疫評價(jià)指標(biāo)，以上指標(biāo)均采用南京建成生物公司的試劑盒測定。

1.8 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Ducans法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與討論

2.1 添加中草藥制劑對凡納濱對蝦生長情況的影響

在對蝦的飼料中添加自制的中草藥制劑投喂凡納濱對蝦后，對其生長和飼料系數(shù)等影響見表2。從表中可知，經(jīng)過60 d的飼養(yǎng)，各試驗(yàn)組的增重倍數(shù)均顯著高于對照組（P<0.05），而成活率無顯著差異（P>0.05）。對于飼料系數(shù)，表現(xiàn)為C組顯著低于與其他各組（P<0.05）。

2.2 飼料中加入中草藥制劑對凡納濱對蝦非特異性免疫指標(biāo)的影響

超氧化物歧化酶（SOD）是一種抗氧化性金屬蛋白酶，能通過歧化反應(yīng)清除掉體內(nèi)過多的自由基，從而對生物體的健康起到保護(hù)作用。由表3可知，飼喂20 d和40 d，各試驗(yàn)組SOD活性均高于對照組（P<0.05），其中B組SOD活性最高，而A組和C組之間差異不顯著（P>0.05）;投喂60 d，各試驗(yàn)組之間差異不顯著（P>0.05），但都顯著低于對照組（P<0.05）。

一氧化氮合酶（NOS）可催化L-精氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)橐谎趸∟O）。NO具有很好的抗氧化應(yīng)激，能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞吞噬病原體，如一些寄生蟲、細(xì)菌和真菌等。從表3可知，投喂20 d，各試驗(yàn)組NOS活性均顯著高于對照組（P<0.05），其中A組NOS活性最高;投喂40 d 和60 d，各試驗(yàn)組NOS活性均顯著高于對照組（P<0.05），且C組顯著高于A、B兩組（P<0.05），而A組和B組之間差異不顯著（P>0.05）。

堿性磷酸酶（AKP）是機(jī)體中的一個(gè)外酶。研究表明，當(dāng)機(jī)體的排泄系統(tǒng)出現(xiàn)異常時(shí)，有可能會引起AKP的升高。從表3可知，投喂20 d和40 d，B、C組中AKP活性顯著高于對照組（P<0.05），且兩組之間也存在顯著差異（P<0.05），但A組和對照組之間沒有顯著差異;投喂60 d，各試驗(yàn)組和對照組之間存在顯著差異（P<0.05），但C組顯著低于對照組（P<0.05）。

溶菌酶（LZM）的作用機(jī)理主要是可以水解致病菌中的粘多糖，是一種堿性酶。此外，LZM還可以直接同病毒蛋白結(jié)合，因此具有抗菌、消炎與抗病毒的功能。由表3可知，投喂20 d，各試驗(yàn)組中LZM活性顯著高于對照組（P<0.05）;投喂40 d，各組LZM活性顯著高于對照組（P<0.05），且A組與B、C組之間存在顯著差異（P<0.05）;投喂60 d，各試驗(yàn)組均顯著高于對照組（P<0.05）。

3 討論

國內(nèi)外的相關(guān)研究表明，在飼料中添加一種或者數(shù)種中草藥復(fù)合制劑可以提高凡納濱對蝦、羅氏沼蝦等蝦類的免疫能力，從而提高其對病原菌的抵抗力[4，7]。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，添加自制的中草藥制劑的試驗(yàn)組，無論是體重增加倍數(shù)、飼料系數(shù)還是4種與免疫相關(guān)的酶活指標(biāo)都與對照組存在顯著差異，說明試驗(yàn)所配制的中草藥制劑具有良好的促進(jìn)生長和增強(qiáng)免疫力的作用。

3.1 中草藥與生長

中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面已有廣泛的應(yīng)用，且很多的研究表明，一些中草藥，如神曲、麥芽、甘草等含有豐富的維生素、微量元素等可以促進(jìn)動物生長的因子，這些營養(yǎng)因子的存在可以協(xié)助增加養(yǎng)殖動物的消化功能，促進(jìn)吸收，降低餌料系數(shù)[6]。此次試驗(yàn)的中草藥制劑成分如黃芪等，含有甜菜堿、膽堿、氨基酸、糖類、黃烷化合物、蛋白質(zhì)和鐵、鈣、磷、硒、鋅、銅、錳等多種微量元素，可能是促進(jìn)凡納濱對蝦生長的原因之一。中草藥及其混合物應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)越來越多，中草藥制劑在畜禽中的應(yīng)用表明，其不僅可提高養(yǎng)殖產(chǎn)品的日增重，還能顯著提高飼料轉(zhuǎn)化效率并促進(jìn)養(yǎng)殖動物的生長。中草藥制劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖研究發(fā)現(xiàn)，用0.28%的金銀花、人參等投喂牙鲆，可以提高18.9%的增重率，降低11.2%的飼料系數(shù)[8]。在草魚養(yǎng)殖中使用1.0 g·kg-1的中草藥制劑，可以在草魚生長速度和降低飼料系數(shù)方面得到很高的效果[9]。在飼料中添加0.1%的白術(shù)、甘草等，凡納濱對蝦的體重比對照組提高了27%以上[10]。江湧等[11]在凡納濱對蝦飼料中分別添加1.0 g·kg-1的自制中草藥添加劑，可以明顯提高凡納濱對蝦的日增質(zhì)量率、相對增長率、成活率，降低飼料系數(shù)。這些研究結(jié)果都表明中草藥制劑廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)可提高飼料利用率，促進(jìn)生長，改善養(yǎng)殖效果。

3.2 中草藥制劑與非特異性免疫

中草藥以植物為主，中草藥的利用實(shí)際上就是植物提取物的利用，大多數(shù)中草藥中含有化學(xué)物質(zhì)元素，如核苷酸、有機(jī)酸、多糖和生物堿等。如茶葉中含有的大蒜素、甘草酸、生物堿和黃芪多糖等具有提升機(jī)體免疫能力的功效。有關(guān)中草藥對養(yǎng)殖蝦類免疫功能提升的研究較多[12-16]。蝦類屬于一種較為原始的物種，其在抵抗病原體的入侵時(shí)，主要還是依靠非特異免疫防御系統(tǒng)。該系統(tǒng)一般由血淋巴細(xì)胞和體液因子組成，在多種體液因子中，AKP、LZM、AP、T-SOD等活性大小常被用作衡量凡納濱對蝦非特異性免疫活性高低的重要指標(biāo)。

王雷等[13]、劉恒等[14]和劉樹青等[15]的研究證實(shí)了多種天然免疫多糖可以顯著提高凡納濱對蝦血淋巴中的免疫因子活力，提升機(jī)體的免疫功能。中草藥制劑或者一些植物提取物在投喂凡納濱對蝦后，其血清中的溶菌活力、T-SOD、ACP、AKP能夠得到明顯的增強(qiáng)[16]。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，凡納濱對蝦攝食一定劑量的中草藥后，肌肉組織中的SOD、NOS、AKP、LZM都有相應(yīng)的提高，表明試驗(yàn)凡納濱對蝦機(jī)體內(nèi)的非特異性免疫能力得到了提升，建議在實(shí)際生產(chǎn)中的添加量為1.0 g·kg-1。

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（責(zé)任編輯：趙中正）