高通量測(cè)序在非小細(xì)胞肺癌基因突變研究中的應(yīng)用*

楊靜麗，葛 闖，易 琳，張海偉，林昌海，唐萬燕，陳 霞，輦偉奇

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院新生兒診治中心/兒童發(fā)育疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國(guó)家兒童健康與疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心/兒童發(fā)育重大疾病國(guó)家國(guó)際科技合作基地/兒童感染免疫重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400014；2.重慶大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤轉(zhuǎn)移與個(gè)體化診治轉(zhuǎn)化研究重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400030)

肺癌的發(fā)病率和病死率均居我國(guó)惡性腫瘤的首位。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%～85%[1]。人們對(duì)NSCLC的分型認(rèn)知已經(jīng)邁入分子水平，越來越多的腫瘤靶向基因從基礎(chǔ)研究走向臨床應(yīng)用，如吉非替尼、?？颂婺帷W希替尼等酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的靶點(diǎn)基因表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)[2]，克唑替尼、色瑞替尼、勞拉替尼等的靶點(diǎn)基因間變性淋巴瘤激酶(ALK)，達(dá)拉非尼聯(lián)合曲美替尼的靶點(diǎn)基因BRAF、MEK等。

高通量測(cè)序是一種大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)，可用作基因點(diǎn)突變、插入缺失突變、基因重排和基因拷貝數(shù)突變等多種突變類型的分析。臨床上，高通量測(cè)序可以針對(duì)藥物的特定靶向基因進(jìn)行深度測(cè)序，從而為腫瘤患者提供更多的治療選項(xiàng)[3]。本研究對(duì)396例NSCLC患者的外周血循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)進(jìn)行高通量測(cè)序，以分析不同類型基因突變與臨床病理資料的關(guān)系，旨在為疾病的精準(zhǔn)化診療提供基因水平的參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集重慶大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2017年1月至2018年10月396例NSCLC患者的標(biāo)本。標(biāo)本類型為外周血。男性患者255例，女性患者141例，年齡30～86歲。所有病例均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診，其中腺癌患者293例，鱗狀細(xì)胞癌患者103例。本研究獲得該院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，臨床資料及標(biāo)本采集均獲患者知情同意。

1.2儀器與試劑 無水乙醇(分析純)、血漿游離DNA提取試劑盒購(gòu)自中國(guó)天根公司；高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自韓國(guó)Genespeed公司；混勻儀、渦旋振蕩器購(gòu)自中國(guó)其林貝爾公司；恒溫金屬浴購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；Qubit熒光計(jì)、磁力架購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；生物安全柜購(gòu)自中國(guó)海爾公司；超微量分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)NanoDrop公司；7500熒光定量PCR儀、數(shù)字PCR儀購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；Bioruptor?Pico超聲波破碎儀購(gòu)自比利時(shí)Diagenode公司；真空濃縮儀購(gòu)自中國(guó)北京吉艾姆公司；生物分析儀購(gòu)自中國(guó)Bioptic公司；NextSeq 550基因測(cè)序儀購(gòu)自美國(guó)Illumina公司。

1.3方法

1.3.1核酸提取 吸取500 μL Proteinase K于50 mL離心管底，加入5 mL制備血漿(10 mL全血，2 000 r/min離心10 min，取上清；8 000 r/min離心10 min，收集上清血漿)，加入Buffer 1 Mix，混勻30 s，瞬離；60 ℃水浴，30 min；加入Buffer 2，混勻15～30 s，冰浴5 min。將冰浴后溶液加入真空泵抽提吸附柱中進(jìn)行抽吸；然后加入600 μL Buffer 3，真空抽吸；加入750 μL Buffer 4，真空抽吸；加入750 μL無水乙醇，真空抽吸；將吸附柱放入干凈套管，14 000 r/min離心3 min，丟棄套管。將吸附柱裝入潔凈的1.5 mL收集管中，開蓋，室溫靜置10 min；56 ℃烘干，1 min；懸空滴加80 μL NF-Water，室溫靜置5 min；14 000 r/min離心1 min，保留約75 μL DNA溶液；再次滴加50 μL NF-Water，室溫靜置5 min；14 000 r/min離心1 min，保留約120 μL DNA溶液。取3 μL DNA原液以Qubit 熒光計(jì)評(píng)估核酸質(zhì)量及水平。剩余DNA原液如不立即使用可凍存于-80 ℃冰箱。

1.3.2文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序 將400 ng的DNA原液轉(zhuǎn)移至DNA剪切專用Covaris管中進(jìn)行剪切后，轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中并純化；進(jìn)行DNA末端修復(fù)，加“A”操作；連接接頭序列并用AMPure XP磁珠純化連接后的DNA標(biāo)本；在0.2 mL低吸附PCR管中配制PCR擴(kuò)增體系，混勻、PCR擴(kuò)增，用AMPure XP磁珠純化擴(kuò)增后的DNA文庫(kù)；Qubit熒光計(jì)測(cè)定文庫(kù)DNA水平，吸取600 ng文庫(kù)DNA至新的0.2 mL 的PCR管?！?5 ℃環(huán)境下，將文庫(kù)濃縮至5 μL，加入配制好的Block Mix溶液、P5 Blocker、P7 Blocker各1 μL，PCR擴(kuò)增；捕獲和洗脫雜交的文庫(kù)DNA；PCR擴(kuò)增上一步得到的文庫(kù)DNA，并用AMPure XP磁珠進(jìn)行純化；Qubit熒光計(jì)測(cè)定文庫(kù)DNA水平，文庫(kù)DNA水平應(yīng)≥1 ng/μL。根據(jù)文庫(kù)DNA水平進(jìn)行稀釋，稀釋液的終水平為1.5 ng/μL；qPCR精確定量文庫(kù)DNA有效水平。使用NextSeq 550基因測(cè)序儀進(jìn)行高通量測(cè)序。

1.3.3生物信息學(xué)分析 使用測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控軟件pk_qc_new2去除下機(jī)數(shù)據(jù)中質(zhì)量較低的數(shù)據(jù)；使用序列比對(duì)軟件BWA(版本V0.7.12)將原始數(shù)據(jù)與人類參考基因組(GRCh37)進(jìn)行比對(duì)；使用Samblaster_V0.1.22標(biāo)記測(cè)序數(shù)據(jù)中的重復(fù)reads并進(jìn)行去重；使用samtools_V0.1.19將比對(duì)文件SAM格式轉(zhuǎn)換為BAM格式，并用Sambamba_V0.5.8對(duì)BAM文件進(jìn)行排序，用GenomeAnalysisTK_V3.8局部重比對(duì)及堿基質(zhì)量重校正，過濾掉突變頻率0.5%以上的位點(diǎn)。分別使用 VarScan2.3、Mysv_V2.6.pl、ExomeCNV_V2進(jìn)行SNV/Indel、SV及CNV的分析。根據(jù)dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)(Avsnp150)、千人基因組(1000g2015aug_all)、外顯子聚合數(shù)據(jù)庫(kù)(Exac03_EAS)、癌癥體細(xì)胞突變數(shù)據(jù)庫(kù)(Cosmic83)、Clinvar_20170905和SAOdbSNP150對(duì)基因突變位點(diǎn)進(jìn)行注釋。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。所有比較均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Panel設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估 本Panel設(shè)計(jì)檢測(cè)EGFR、KRAS、HRAS、NRAS、PIK3CA、ALK、ROS1、BRAF、HER2、RET、TP53、MET、MAP2K1、FGFR1、FGFR2、AKT1、PTEN、SMO、KIT、PDGFRA、DDR2、RB1、TSC1、MEK1、BRCA、TET2、DNMT3A、GNA11共28種腫瘤驅(qū)動(dòng)基因的點(diǎn)突變、短片段缺失突變和短片段插入突變等基因突變類型，其中ALK、ROS1、RET 3個(gè)基因額外檢測(cè)基因重排；EGFR、FGFR1、FGFR2、MET、KIT 5個(gè)基因額外檢測(cè)基因拷貝數(shù)突變。

每例標(biāo)本產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量約為3 G，測(cè)序區(qū)域覆蓋度為100%，比對(duì)率>99%；高通量測(cè)序區(qū)域去重后平均測(cè)序深度大于2 000 X，最低測(cè)序深度1 200 X。100%測(cè)序標(biāo)本的測(cè)序質(zhì)量值為Q20≥90%，Q30≥85%，比對(duì)質(zhì)量值≥95%。99.50%的標(biāo)本文庫(kù)復(fù)雜度>25%，測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠。經(jīng)生物信息學(xué)分析比對(duì)，排除非目標(biāo)區(qū)突變、低質(zhì)量突變、胚系突變及同義突變。

2.2NSCLC患者外周血基因突變分布 396例NSCLC患者的28種ctDNA基因譜表明，67.42%的標(biāo)本至少檢出1個(gè)基因突變類型，其中EGFR基因突變所占比例最高為35.35%，其余的主要突變基因包括KRAS(9.85%)、ROS1(7.58%)、PIK3CA(5.56%)、ALK(5.56%)、RET(4.80%)、TSC1(4.04%)、PTEN(3.79%)、HER2(3.28%)、BRAF(2.78%)、DDR2(2.78%)、MET(2.27%)?；蛲蛔儥z出率最高的前5個(gè)基因占比為63.89%，前10個(gè)基因占比為82.58%，表現(xiàn)出明顯的主基因突變聚集現(xiàn)象。見圖1。

EGFR基因亞型同樣呈現(xiàn)出明顯的主次分布規(guī)律，其中最常見的突變亞型是19del、L858R，分別占45.00%、41.43%，剩余依次是T790M(22.86%)、G719X(3.57%)、S768I(2.14%)、L861Q(2.14%)、20ins(1.43%)，其他(17.14%)。在63例19del突變標(biāo)本中共發(fā)現(xiàn)15種亞型，占比最高的前5位依次是：c.2235_2249del GGA ATT AAG AGA AGC(23.81%)、c.2236_2250del(20.63%)、c.2235_2249del(12.70%)、c.2239_2248 TTA AGA GAA G>C(9.52%)、c.2240_2257del TAA GAG AAG CAA CAT CTC(9.52%)，其余少見亞型占23.81%，同樣表現(xiàn)出明顯的主亞型聚集現(xiàn)象。見表1。

圖1 NSCLC患者外周血28種基因突變譜

表1 EGFR19號(hào)外顯子缺失突變亞型分布

續(xù)表1 EGFR19號(hào)外顯子缺失突變亞型分布

2.3NSCLC患者28種基因突變的關(guān)系 本研究結(jié)果表明，EGFR突變亞型存在明顯的互斥突變與伴隨突變現(xiàn)象。19del缺失突變、L858R點(diǎn)突變和20ins 3個(gè)亞型常表現(xiàn)為互斥突變。在63例19del突變病例中，僅有2例分別攜帶G719X和L861Q，其余均為單亞型突變；58例L858R突變病例中，也僅有1例攜帶S768I共突變；2例20ins病例同樣為單突變。伴隨突變則多表現(xiàn)在罕見突變亞型上，如32例T790M突變?nèi)慷及殡S其他突變位點(diǎn)；5例G719X突變病例中，發(fā)現(xiàn)有2例攜帶S768I突變，1例攜帶L861Q突變。

T790M突變總是伴隨EGFR敏感突變，主要是19del與L858R 2個(gè)亞型，且兩種伴隨突變形式與患者的靶向治療密切相關(guān)。32例T790M突變標(biāo)本中，18例患者經(jīng)靶向治療并出現(xiàn)一代EGFR-TKI耐藥現(xiàn)象，其伴隨突變是19del；14例患者未經(jīng)靶向治療，其伴隨突變是L858R。獲得性T790M突變的患者發(fā)生基因突變的概率大于原發(fā)性T790M突變的患者統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，可能是因?yàn)镹SCLC患者在靶向治療過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)在靶向藥物的打擊下進(jìn)一步發(fā)生克隆演進(jìn)，導(dǎo)致更多基因發(fā)生突變，形成旁路激活效應(yīng)，最終導(dǎo)致靶向藥物耐藥。見圖2。

注:A表示T790M獲得性突變；B表示T790M原發(fā)性突變。

圖2 T790M突變狀態(tài)下的多基因突變分布

2.4陽(yáng)性標(biāo)本基因突變分析 140例EGFR突變標(biāo)本中，檢測(cè)出存在其他基因突變類型的占36.43%；256例無EGFR突變標(biāo)本中，檢出其他基因突變類型的占47.27%，提示NSCLC患者的不同基因間同樣存在強(qiáng)烈的基因突變互斥現(xiàn)象(χ2=4.33,P=0.038)。具體分析發(fā)現(xiàn)，EGFR突變標(biāo)本發(fā)生其他類型基因突變的概率顯著低于無EGFR突變的標(biāo)本，如KRAS、ALK、RET、PTEN、DDR2、MET等基因突變?cè)贓GFR突變患者中的檢出率分別為9.80%、13.73%、5.88%、3.92%、0.00%、3.92%，明顯小于無EGFR突變患者中的檢出率(分別為27.27%、12.40%、13.22%、10.74%、8.26%、5.79%)，可能是EGFR基因突變抑制了其他基因發(fā)生突變。見圖3。

注:A表示EGFR突變標(biāo)本中多基因突變分布；B表示無EGFR突變標(biāo)本中多基因突變分布。

圖3 EGFR突變及未突變狀態(tài)下的多基因突變分布

2.5基因突變與臨床病理特征的關(guān)系 考察常見驅(qū)動(dòng)基因突變與患者組織類型、組織分期、性別、年齡、吸煙史的關(guān)系。腺癌標(biāo)本EGFR突變檢出率(40.96%)，顯著高于鱗狀細(xì)胞癌(19.42%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；女性患者EGFR突變檢出率(51.77%)顯著高于男性(26.27%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；無吸煙史的患者EGFR突變檢出率(46.73%)，明顯高于有吸煙史的患者(23.86%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；晚期患者(不低于3B期)的EGFR突變檢出率(36.53%)，高于早期(低于3B期)患者(14.29%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；<65歲與≥65歲的患者比較，EGFR突變檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.97)。KRAS基因突變的特征人群同樣為無吸煙史的女性晚期腺癌患者，但因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)人群的規(guī)模有限，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，需繼續(xù)擴(kuò)大樣本量。見表2。

表2 主要基因突變與臨床病理特征(n)

續(xù)表2 主要基因突變與臨床病理特征(n)

注:P1表示高通量測(cè)序檢出突變統(tǒng)計(jì)值；P2表示EGFR突變統(tǒng)計(jì)值；P3表示KRAS突變統(tǒng)計(jì)值。

3 討 論

隨著全球生物醫(yī)藥技術(shù)的飛速發(fā)展，以肺癌為代表的惡性腫瘤的診治已進(jìn)入了以生物信息大數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)的精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代[4]。高通量測(cè)序技術(shù)可以對(duì)標(biāo)本的核酸序列進(jìn)行大規(guī)模的檢測(cè)，快速得到患者個(gè)體化的全景式基因信息譜，為惡性腫瘤的精準(zhǔn)化診治提供支撐，并以其檢測(cè)通量大、信息全面、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)逐步從實(shí)驗(yàn)室研究階段邁入臨床應(yīng)用階段[5]。在高通量測(cè)序臨床應(yīng)用方面，以美國(guó)紀(jì)念斯隆凱特琳癌癥研究中心的MSK-IMPACT和美國(guó)Foundation Medicin公司的FoundationOne CDx最為引人關(guān)注。2018年，中國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局先后批準(zhǔn)燃石醫(yī)學(xué)、諾禾致源、世和基因及艾德生物的4款腫瘤高通量測(cè)序檢測(cè)試劑盒，有效地規(guī)范了腫瘤診斷領(lǐng)域的臨床選擇。本研究對(duì)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)推薦的8個(gè)基因及20個(gè)NSCLC常見的驅(qū)動(dòng)基因進(jìn)行高通量測(cè)序，研究了患者中這些基因突變的特征。

根據(jù)396例NSCLC患者的測(cè)序結(jié)果繪制基因突變圖譜，發(fā)現(xiàn)EGFR的突變檢出率為35.35%，與東亞人群中NSCLC人群30%～40%的EGFR突變檢出率一致[6]。從組織類型看，EGFR基因突變?cè)诜蜗侔┗颊咧械臋z出率為40.96%；肺鱗狀細(xì)胞癌患者中的檢出率為19.42%，高于目前研究報(bào)道關(guān)于肺鱗狀細(xì)胞癌EGFR突變的檢出率，也反映出高通量測(cè)序技術(shù)相對(duì)于傳統(tǒng)檢測(cè)方法的靈敏度優(yōu)勢(shì)[6]。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，無論是NSCLC患者的多基因之間，還是EGFR亞型之間，均有明顯的突變聚集現(xiàn)象，主要表現(xiàn)是基因突變檢出率最高的前10個(gè)基因占高通量測(cè)序檢出突變總數(shù)的82.58%，EGFR基因的19del與L858R突變2個(gè)亞型占據(jù)EGFR突變的86.43%。同時(shí)，EGFR基因的19del缺失突變、L858R點(diǎn)突變和20ins 3個(gè)亞型上大多為單突變，很少有與其他基因亞型發(fā)生共突變的現(xiàn)象，表現(xiàn)出明顯的互斥突變效應(yīng)。T790M、G719X、S768I、L861Q等亞型則常常有共突變現(xiàn)象，表現(xiàn)出顯著的伴隨突變效應(yīng)。本研究進(jìn)一步豐富了程亞楠等[7]關(guān)于EGFR 19del與L858R呈現(xiàn)出明顯的互斥現(xiàn)象的理論，而所有T790M突變都與上述2個(gè)突變位點(diǎn)伴隨出現(xiàn)。

T790M是第一代EGFR-TKI藥物的耐藥突變[8]，但ZHENG等[9]研究表明，在影像學(xué)檢查顯示病情有發(fā)展前的2.2個(gè)月即可在血漿中檢測(cè)到T790M突變。本研究表明，T790M伴隨L858R突變常常是原發(fā)性突變，T790M與19del共突變則常是獲得性突變。獲得性T790M突變的患者發(fā)生基因突變的概率大于原發(fā)性T790M突變的患者，可能是因?yàn)镹SCLC患者靶向治療過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)在靶向藥物的打擊下進(jìn)一步克隆演進(jìn)，導(dǎo)致更多基因發(fā)生突變，最終形成旁路激活。EGFR突變標(biāo)本發(fā)生多基因突變的頻率顯著低于無EGFR突變標(biāo)本，如KRAS、ALK、RET等基因突變?cè)贓GFR突變患者中的檢出率分別為9.80%、13.73%、5.88%，明顯小于無EGFR突變患者中的27.27%、12.40%、13.22%，可能是因?yàn)镋GFR基因突變抑制了其他基因發(fā)生突變。

本研究中的ALK在NSCLC中的突變檢出率為5.56%，與張緒超等[10]報(bào)道的3%～7%的中國(guó)肺癌人群ALK突變檢出率相一致。SOLOMON等[11]研究證實(shí)了第一代ALK抑制劑克唑替尼在ALK陽(yáng)性晚期NSCLC一線治療中的作用。在對(duì)克唑替尼的耐藥機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，ALK酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域獲得性突變約占 20%，ALK擴(kuò)增占8%[12]。ASCEND-4研究中第二代ALK抑制劑色瑞替尼一線治療ALK陽(yáng)性NSCLC的無進(jìn)展生存期長(zhǎng)達(dá)16.6個(gè)月，顯著優(yōu)于化療組的8.1個(gè)月。無論有無ALK基因激酶區(qū)域的2次突變現(xiàn)象，患者都能從色瑞替尼治療中獲益[13]。目前第三代ALK抑制劑勞拉替尼已在歐洲獲批上市，第四代靶向藥物已處于臨床試驗(yàn)階段。

BRAF在惡性腫瘤中的突變檢出率約為8%，主要見于黑色素瘤(50%)、甲狀腺乳頭狀癌(30%～70%)，而在NSCLC中的突變檢出率為3%～5%[14]。本研究中BRAF突變檢出率為2.78%，與張海燕等[15]報(bào)道的中國(guó)人群4.4%的突變檢出率基本一致。BRAF基因突變類型中，約90%的BRAF突變是第15號(hào)外顯子的密碼子600處的纈氨酸被谷氨酸替代，即V600E突變。KRON等[16]認(rèn)為在無針對(duì)性的治療時(shí)，非 V600E突變型肺癌患者的預(yù)后優(yōu)于V600E突變型肺癌患者，提示V600E可能是NSCLC預(yù)后不良的獨(dú)立影響因素。JOSHI等[17]認(rèn)為聯(lián)合使用BRAF和MEK靶點(diǎn)抑制劑達(dá)拉非尼、曲美替尼對(duì)攜帶V600E的NSCLC具有良好治療效果。

近年來，間質(zhì)-上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化在NSCLC中的臨床應(yīng)用是研究的熱點(diǎn)，其中MET基因第14號(hào)外顯子跳躍突變可作為NSCLC患者治療的新靶點(diǎn)已經(jīng)得到越來越廣泛的證實(shí)[18]。MET基因第14號(hào)外顯子跳躍突變總發(fā)生率為3%～6%，多發(fā)于肺肉瘤樣癌(22%)和肺腺癌(3%～4%)[19-20]。但LIU等[21]分析了968例中國(guó)NSCLC患者的基因信息，發(fā)現(xiàn)MET基因第14號(hào)外顯子跳躍突變僅占腺癌患者的0.9%。MET基因的靶向藥物多為腺苷三磷酸的選擇性競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，通過抑制MET的活性進(jìn)而阻止下游相關(guān)激酶的磷酸化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的調(diào)控。YAP等[22]研究了21例MET基因第14號(hào)外顯子突變的晚期NSCLC患者，經(jīng)克唑替尼靶向治療，部分緩解率為44%，疾病控制率為50%，顯示了良好的臨床療效。

4 結(jié) 論

本研究采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)NSCLC患者28種靶向治療相關(guān)驅(qū)動(dòng)基因的突變信息進(jìn)行全景檢測(cè)，證實(shí)EGFR基因亞型間的分布規(guī)律及EGFR基因?qū)ζ渌蛲蛔兊囊种谱饔茫瑸榕R床醫(yī)生制訂NSCLC患者的精準(zhǔn)診療方案提供了有力的保障。從更高層面上看，高通量測(cè)序技術(shù)的臨床應(yīng)用可以加快對(duì)未知病因或病因復(fù)雜的家族性腫瘤的研究與評(píng)估，也有利于發(fā)現(xiàn)新的致病基因，使腫瘤的預(yù)防更精準(zhǔn)、有效。