血漿肝素結(jié)合蛋白免疫熒光干式定量檢測試劑盒的性能評價

王杜平

（徐州市中心醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221009）

肝素結(jié)合蛋白（heparin-binding protein,HBP），于1984年由Shafer等[1]發(fā)現(xiàn)并首次成功分離。HBP主要存在于中性粒細(xì)胞的分泌顆粒和嗜天青顆粒中，故又被稱為天青殺素或CAP37。研究表明HBP是一種多功能蛋白，具有殺菌功能和趨化特性，構(gòu)成人類中性粒細(xì)胞先天防御系統(tǒng)的一部分。生理情況下，HBP血中水平極低，一般不超過10 ng/mL[2]。當(dāng)細(xì)菌入侵機(jī)體時，細(xì)菌的M蛋白和纖維蛋白原形成循環(huán)蛋白復(fù)合物可結(jié)合中性粒細(xì)胞表面的β2整合素，激活其粘附于血管內(nèi)皮細(xì)胞，并脫顆粒將HBP釋放入血[3]，導(dǎo)致其在血中的濃度大大升高。HBP是嚴(yán)重膿毒癥的早期診斷標(biāo)志物，在重癥感染患者的病理生理過程中發(fā)揮重要作用，可作為潛在的診斷標(biāo)志物[4]。同時，有報道指出，HBP檢測有助于重癥感染者診斷器官功能損傷、監(jiān)測療效和預(yù)后預(yù)測。

HBP作為一個新的臨床檢測項目，在檢測方法上目前常見的有ELISA法、免疫比濁法等，本文旨在對免疫熒光干式定量法HBP檢測試劑盒進(jìn)行性能評價，現(xiàn)將初步結(jié)果報告如下。

1 材料和方法

1.1 儀器及試劑 儀器為蘇州和邁精密儀器有限公司生產(chǎn)的FIC-Q100干式免疫熒光儀；HBP檢測試劑盒由中翰盛泰生物技術(shù)有限公司提供（批號：19S1A02F），質(zhì)控品濃度分別為低值18.4 ng/mL和高值192 ng/mL；企業(yè)內(nèi)部參考物質(zhì)為高值275 ng/mL，低值5.9 ng/mL。

1.2 方法

1.2.1 血清樣本采集：選取本院2019年7月健康體檢者的枸櫞酸鈉抗凝血漿樣本，男女各20 名，共40名，年齡31～69 歲，平均48.6 歲。

1.2.2 正確度評估試驗：選用生產(chǎn)廠商的HBP企業(yè)內(nèi)部參考物質(zhì)，低值濃度為5.9 ng/mL，高值濃度為275 ng/mL。根據(jù)廠商說明書檢測3 d，每批均重復(fù)2 次。

1.2.3 精密度評估試驗：采用簡易精密度試驗，測試廠商提供的高、低兩個濃度的質(zhì)控品標(biāo)本，HBP濃度分別為192 ng/mL和18.4 ng/mL，每個濃度標(biāo)本連續(xù)測試11 次。

1.2.4 線性試驗：參考CLSI EP6-A文件，選取高值HBP參考物質(zhì)和低值HBP參考物質(zhì)，在已知線性范圍內(nèi)配制7個系列濃度的稀釋樣本，其HBP的理論濃度分別為每個稀釋樣本平行測定3 次。

1.2.5 參考區(qū)間驗證：參考CLSI C28-A2文件，分別測定20 名男性和20 名女性的HBP血漿水平，以不高于11.4 ng/mL為界限，20 名中少于2 名不超過界限認(rèn)為符合廠商聲明的參考區(qū)間（95%置信區(qū)間）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行線性相關(guān)性分析等。

2 結(jié)果

2.1 正確度評估試驗 HBP低、高2個濃度校準(zhǔn)品的相對偏倚分別為4.40%和2.95%。均在生產(chǎn)商允許相對偏倚范圍內(nèi)。見表1。

表1 正確度評估試驗結(jié)果

2.2 簡易精密度評估試驗 HBP低（18.4 ng/mL）、高（192 ng/mL）2個濃度質(zhì)控品的CV分別為7.68%、5.44%，精密度符合要求（CV＜10%）。

2.3 線性試驗 HBP濃度在0～275 ng/mL時檢測呈線性，線性回歸方程為Y＝0.9141X＋0.9922，R2＝0.998，試驗結(jié)果良好。見圖1。

圖1 HBP線性試驗結(jié)果

2.4 參考區(qū)間驗證 20 名男性和20 名女性健康者，其血漿HBP水平均在廠商聲明的參考區(qū)間（＜11.4 ng/mL）內(nèi)，符合參考區(qū)間的驗證標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

HBP的檢測已經(jīng)被納入“中國嚴(yán)重膿毒癥/膿毒性休克治療指南”中，研究表明，HBP是重癥感染患者早期診斷嚴(yán)重膿毒癥/膿毒性休克的重要指標(biāo)，且高水平的血漿HBP有助于識別有快速進(jìn)展為膿毒癥循環(huán)衰竭危險的發(fā)熱患者[5]。

HBP的高靈敏度、高特異性、高陽性檢出率、早期濃度變化明顯等特點(diǎn)，使得它在感染性疾病早期的診斷價值優(yōu)于白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞分類計數(shù)、C反應(yīng)蛋白及降鈣素原等傳統(tǒng)炎癥指標(biāo)[6]。另外，在病毒感染和非特異性炎癥反應(yīng)時，血漿HBP保持低值水平，僅在急性細(xì)菌性感染時升高明顯，可鑒別細(xì)菌性感染和非細(xì)菌性感染。通過對血漿HBP濃度動態(tài)監(jiān)測，可預(yù)測嚴(yán)重感染患者將要出現(xiàn)的休克及循環(huán)衰竭[7]。

實(shí)驗結(jié)果顯示，杭州中翰盛泰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的免疫熒光干式定量法HBP檢測試劑盒具有較好的正確度、重復(fù)性，CV在10%以內(nèi)，表明隨機(jī)誤差較小，符合廠商聲明的標(biāo)準(zhǔn)要求。線性范圍評價試驗結(jié)果顯示，在血漿HBP 5.9～275 ng/mL的濃度范圍內(nèi)R2＝0.998，符合R2≥0.950的要求。相比于ELISA、免疫比濁法等方法，免疫熒光干式法定量檢測HBP操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可隨時檢測，適用于臨床檢測需要。