基于熵權(quán)法對(duì)千金子-甘草不同配伍比例的化學(xué)成分變化及體外肝毒性研究△

張景珍，崔曰新，王思雨，王新杰，張瑤，高慧，蘭曉燕，王英姿

北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 102488

千金子為大戟科植物續(xù)隨子EuphorbialathyrisL.的干燥成熟種子，味辛，性溫，有小毒；歸肝、腎、大腸經(jīng)；具有瀉下逐水、破血消癥，外用療癬蝕疣的功效；用于二便不通、水腫、痰飲、積滯脹滿、血瘀經(jīng)閉，外治頑癬、贅疣[1]。研究表明千金子中含有多種化學(xué)成分，具有廣泛的藥理活性，常用于治療白血病、晚期血吸蟲病腹水、毒蛇咬傷、膀胱癌、銀屑病等疾病[2-4]。甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、 脹果甘草G.inflataBat.或光果甘草G.glabraL.的干燥根和根莖，味甘，性平；歸心、肺、脾、胃經(jīng)；具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥的功能，在中醫(yī)臨床、方藥配伍中應(yīng)用廣泛，有“十方九草”之說(shuō)，被譽(yù)為“國(guó)老”“眾藥之王”。千金子與甘草臨床合用報(bào)道較多的成藥有周氏回生丸(《中華人民共和國(guó)藥典》一部)，用于霍亂吐瀉，痧脹腹痛；時(shí)疫救急丸(中藥部頒標(biāo)準(zhǔn))用于暑濕霍亂，頭暈發(fā)熱，脘腹脹痛，惡心嘔吐，腸鳴泄瀉。目前尚未有關(guān)兩者配伍后的不良反應(yīng)數(shù)據(jù)和報(bào)道，且關(guān)于兩者的配伍研究也極少[5-6]，未見有對(duì)其不同配伍比例的研究報(bào)道。

“十八反”屬于中藥“七情”中的相反配伍，為中藥用藥禁忌的一種，是中藥藥性理論的重要組成部分，是中藥合理用藥的重要內(nèi)容，對(duì)指導(dǎo)中藥臨床用藥具有重要意義[7-8]。但“十八反”是否為絕對(duì)禁忌，古代文獻(xiàn)記載及現(xiàn)代研究均無(wú)確切定論，存在一定爭(zhēng)議[9-12]?！笆朔础敝械母什莘春Ｔ?、大戟、甘遂、芫花，雖為配伍禁忌但臨床應(yīng)用情況居多，甘草與海藻的配伍多用于治療瘰疬、癭證、痹證、肺脹等疾病，而甘草與大戟、甘遂、芫花等藥的配伍常用來(lái)治療水腫臌脹、痰飲咳喘等疾病[11，13-15]。文獻(xiàn)表明，反藥藥對(duì)在不同劑量配比時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)毒性的協(xié)同、相加或拮抗作用；在適當(dāng)?shù)呐湮榻M方后，“十八反”藥物可能并不是絕對(duì)的配伍禁忌[16]。自古以來(lái)千金子就與京大戟、甘遂等同列為利水要藥，與大戟、甘遂等藥性、功效相似，且具有結(jié)構(gòu)相似的二萜類成分，對(duì)于甘草與千金子合用時(shí)是否存在共性的配伍禁忌規(guī)律值得探究。目前，關(guān)于甘草與大戟、甘遂、海藻、芫花等配伍的研究居多，而對(duì)于甘草與千金子的配伍研究還較少，有待于進(jìn)一步探究。故本研究是基于“十八反”中的“藻戟遂芫俱戰(zhàn)草”，即甘草反海藻、大戟、甘遂、芫花，對(duì)千金子與甘草合用進(jìn)行相關(guān)探索研究。

熵權(quán)法是一種根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)觀測(cè)值所提供信息量的大小來(lái)確定指標(biāo)權(quán)重的客觀賦值方法[17-18]，是客觀賦權(quán)法的一種，該方法以客觀條件為基礎(chǔ)，由評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)確定指標(biāo)權(quán)重，具有反映數(shù)據(jù)中隱含信息，增強(qiáng)指標(biāo)分辨意義、增強(qiáng)指標(biāo)差異性，避免選用指標(biāo)的差異過(guò)小所造成的數(shù)據(jù)分析困難，全面反映各類信息等優(yōu)勢(shì)。熵權(quán)法可避免主觀賦權(quán)法主觀性和不確定性強(qiáng)的弊端，目前在中藥的質(zhì)量控制及工藝優(yōu)選中已有相關(guān)應(yīng)用[17-23]，將其用于中藥多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)優(yōu)選中可以有效彌補(bǔ)主觀隨意性較大的缺陷，對(duì)促進(jìn)中藥的研究開發(fā)具有重要意義。

本研究選取千金子中的主要毒效成分千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3[24-26]及甘草中的有效成分甘草苷與甘草酸單銨水合物[27-29]為指標(biāo)性成分，根據(jù)臨床應(yīng)用方劑中甘草與其他中藥配伍時(shí)最常用配比、周氏回生丸和時(shí)疫救急丸中兩者配比以及《中華人民共和國(guó)藥典》中兩者的規(guī)定劑量，選取甘草-千金子的配伍比例分別為1∶0、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、0∶1?；诖箨浦兴幎嗑吒文I毒性[30-34]，擬通過(guò)不同配伍比例中的指標(biāo)成分變化及肝細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，利用熵權(quán)法對(duì)甘草-千金子不同配伍比例進(jìn)行綜合評(píng)分優(yōu)選，探討兩者合用甘草對(duì)千金子肝細(xì)胞毒性的影響，為甘草、千金子臨床應(yīng)用組方及進(jìn)一步研究提供一定的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國(guó)賽默飛高效液相色譜儀；Chromeleon?變色龍色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)；BSI10型萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán))；KH7200DB型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；Research plus 單道可調(diào)量程移液器(德國(guó)Eppendorf)；倒置相差顯微鏡(奧林巴斯有限公司)；細(xì)胞培養(yǎng)箱(賽默飛世爾科技有限公司)；生物安全柜(海爾集團(tuán))；熒光分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技有限公司)；離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf)；Milli-Q 純水機(jī)(Millipore)。

1.2 試藥

千金子飲片購(gòu)自安徽亳州滬譙中藥飲片廠(批號(hào)：1203070692，產(chǎn)地：江西)，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定為大戟科植物續(xù)隨子E.lathyrisL.的干燥成熟種子，甘草飲片購(gòu)自北京仟草中藥飲片有限公司(批號(hào)：180706013，產(chǎn)地：新疆)，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定為豆科植物甘草G.uralensisFisch.的干燥根和根莖。對(duì)照品千金子素L1(批號(hào)：111789-200901，純度：99.3%)、千金子素L2(批號(hào)：111790-200901，純度：98.5%)、千金子素L3(批號(hào)：111791-200901，純度：98.6%)購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)照品甘草苷(批號(hào)：551-15-5，純度：94.2%)和甘草酸銨(批號(hào)：53956-04-0，純度：94.2%)購(gòu)于上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司。細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；培養(yǎng)基、血清、胰酶、雙抗、PBS均購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水；甲醇、乙腈為色譜純；其余試劑為分析純。

1.3 細(xì)胞株

LO2細(xì)胞來(lái)源于中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所。

2 方法

2.1 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成1.032 mg·mL-1千金子素L1、1.026 mg·mL-1千金子素L2、1.012 mg·mL-1千金子素L3的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

精密稱甘草苷、甘草酸銨對(duì)照品適量，加70%乙醇水溶解，配制成1.026 mg·mL-1甘草苷、1.014 mg·mL-1甘草酸銨的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2 供試品溶液的制備

按1∶0、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、0∶1比例取甘草(過(guò)四號(hào)篩)-千金子(適當(dāng)粉碎)共1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入90 mL 70%乙醇水，稱質(zhì)量，超聲處理25 min(功率 250 W，頻率 50 kHz)，放冷，稱質(zhì)量，補(bǔ)足減失質(zhì)量，0.45 mm微孔濾膜濾過(guò)，取濾液，即得。

按1∶0、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、0∶1比例取甘草(過(guò)四號(hào)篩)-千金子(適當(dāng)粉碎)共1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入90 mL 70%乙醇水，稱質(zhì)量，超聲處理25 min(功率250 W，頻率50 kHz)，放冷，稱質(zhì)量，補(bǔ)足減失質(zhì)量，抽濾，減壓回收乙醇，60 ℃真空干燥濃縮成浸膏。精密稱取不同配伍比例藥物浸膏各50 mg，分別加入10 mL 磷酸緩沖液(PBS)溶解，得不同配伍比例的藥物溶液(5 mg·mL-1)，再稀釋成不同比例的藥物溶液(50 mg·mL-1)。配制好的各供試品溶液用0.22 mm的濾膜過(guò)濾，備用。

2.3 色譜條件

2.3.1 千金子含量測(cè)定色譜條件 色譜柱：ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇(A)-水(B)，梯度洗脫(0～5 min，75%A；5～35 min，75%～70%A；35～45 min，70%～85%A；45～60 min，85%～90%A；60～65 min，90%～75%A)；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm；流速：1 mL·min-1；溫度：25 ℃；進(jìn)樣量：20 mL。

2.3.2 甘草含量測(cè)定色譜條件 色譜柱：ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1%的磷酸水溶液(B)；梯度洗脫(0～8 min，18%A；8～20 min，18%～30%A；20～30 min，30%～50%A；30～31 min，50%～100%A；31～35 min，100%～18%A；35～45 min，18%A)；檢測(cè)波長(zhǎng)：237 nm；流速：1 mL·min-1；溫度：35 ℃；進(jìn)樣量：20 mL。

在上述色譜條件下檢測(cè)對(duì)照品溶液、甘草單煎液、千金子單煎液、甘草-千金子合煎液，HPLC圖見圖1～2。

2.4 細(xì)胞培養(yǎng)

將解凍復(fù)蘇的LO2肝細(xì)胞培養(yǎng)于DME(含10%胎牛血清和1%雙抗)培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5%CO2、70%～80%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)80%～90%，即按1∶4的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代，每隔1 d傳代1次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.1項(xiàng)下配制的千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3、甘草苷、甘草酸銨對(duì)照品溶液，稀釋得系列濃度的各對(duì)照品溶液。按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算得線性回歸方程見表1，結(jié)果千金子素L1在5.16～103.20 mg·mL-1、千金子素L2在1.03～51.30 mg·mL-1、千金子素L3在5.06～101.20 mg·mL-1、甘草苷在2.05～205.20 mg·mL-1、甘草酸銨在10.14～608.40 mg·mL-1峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

注：A.千金子素L1、L2、L3混合對(duì)照品；B.千金子單煎；C.千金子-甘草合煎；1.千金子素L1；2.千金子素L2；3.千金子素L3。圖1 千金子素L1、L2、L3 HPLC圖

注：A.甘草苷、甘草酸銨混合對(duì)照品；B.甘草單煎；C.千金子-甘草合煎；1.甘草苷；2.甘草酸銨。圖2 甘草苷、甘草酸銨HPLC圖

表1 甘草與千金子中各指標(biāo)成分的線性關(guān)系考察結(jié)果(n=6)

2.5.2 精密度試驗(yàn) 取2.1項(xiàng)下配制的對(duì)照品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣20 mL，測(cè)定峰面積值，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3、甘草苷、甘草酸銨峰面積的RSD分別為0.19%、0.25%、0.26%、0.32%、0.12%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.2項(xiàng)下制備的供試品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h，進(jìn)樣20 mL，測(cè)定峰面積值，計(jì)算千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3、甘草苷、甘草酸銨的RSD分別為1.53%、0.36%、0.68%、0.40%、0.32%，表明供試品溶液室溫放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備平行制備6份供試品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 mL，測(cè)定峰面積值，計(jì)算得千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3、甘草苷、甘草酸銨的RSD分別為0.56%、1.58%、0.21%、0.61%、0.95%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱量已知含量的甘草-千金子(1∶1)粉末，平行6份，精密加入與樣品中含量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品，按2.2項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

2.6 樣品成分溶出率測(cè)定

取2.2項(xiàng)下制備的各供試品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 mL，測(cè)定峰面積值，計(jì)算各成分溶出率，結(jié)果見表3。

2.7 CCK-8法測(cè)定甘草與千金子不同配伍比例對(duì)LO2細(xì)胞的毒性

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化后接種于96孔板中，每孔接種5000個(gè)細(xì)胞，將96孔板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)組按50 mg·mL-1的藥物質(zhì)量濃度和千金子∶甘草(4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、1∶0、0∶1)藥物配伍對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，每組設(shè)置5個(gè)平行，處理48 h，處理結(jié)束后棄去含藥培養(yǎng)液，向每孔中加入CCK8溶液(每孔100 mL加入10 mL CCK8)。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置空白組(加入相應(yīng)量的培養(yǎng)基和CCK8溶液，不加細(xì)胞和藥物)和對(duì)照組(加入相應(yīng)量的培養(yǎng)基、CCK8溶液和細(xì)胞，不加藥物)，5個(gè)平行。在37 ℃孵育1 h后，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處的吸光度(A)。根據(jù)測(cè)得的A值按公式(1)計(jì)算細(xì)胞相對(duì)存活率。

表2 甘草和千金子中各指標(biāo)成分的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 %

(1)

2.8 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化后接種于96孔板中，每孔接種5000個(gè)細(xì)胞，將96孔板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)組按50 mg·mL-1的藥物質(zhì)量濃度和千金子∶甘草(4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、1∶0、0∶1)藥物配伍對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，培養(yǎng)48 h后，放置于倒置顯微鏡下觀察 LO2 細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況并拍照。

2.9 數(shù)據(jù)分析

2.9.2 熵權(quán)法客觀賦權(quán) 1)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化：假設(shè)給定了K個(gè)指標(biāo)X1，X2……XK，其中Xi={x1，x2……xn}。假設(shè)對(duì)各指標(biāo)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后的值為Y1，Y2……YK，那么Yij=(Xij-min(Xi))/(max(Xi)-min(Xi))。2)求各指標(biāo)的信息熵Ej：Ej=-ln(n)-1。其中pij=Yij/，如果pij=0，則定義。3)確定各指標(biāo)權(quán)重Wi：Wi=(1-Ei)/(k-∑Ei)(i=1，2……k)。

3 結(jié)果

3.1 甘草與千金子不同配伍比例中各成分溶出率測(cè)定結(jié)果

對(duì)甘草與千金子不同配伍比例的供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，各指標(biāo)成分的溶出率測(cè)定結(jié)果見表3。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知甘草與千金子以不同比例配伍后對(duì)甘草苷、甘草酸銨、千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3等主要指標(biāo)成分的溶出率有不同程度的影響，提示甘草與千金子配伍后毒效作用的改變可能與其主要化學(xué)成分的變化有關(guān)。

3.2 甘草-千金子不同配伍比例正常肝細(xì)胞LO2的相對(duì)存活率

用CCK-8法測(cè)定甘草-千金子不同配伍比例對(duì)正常肝細(xì)胞LO2的毒性作用，由結(jié)果可知隨著配伍比例中甘草比例的增加，細(xì)胞的相對(duì)存活率增加，說(shuō)明甘草對(duì)細(xì)胞的存活有積極作用，結(jié)果見表4。

表3 甘草與千金子不同配伍比例中各指標(biāo)成分的溶出率測(cè)定結(jié)果

表4 甘草與千金子不同配伍比例對(duì)正常肝細(xì)胞LO2的增值抑制率

3.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)

倒置顯微鏡下觀察，甘草單提組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，大小均一，細(xì)胞數(shù)目與空白組無(wú)明顯差別，而千金子單提組、甘草-千金子不同配伍比例組細(xì)胞存在不同程度的皺縮，細(xì)胞數(shù)目有不同幅度的減少，其中以千金子單提組與甘草單提組和空白組差別最大，說(shuō)明甘草對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)基本無(wú)影響，千金子可明顯抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)影響細(xì)胞凋亡；與千金子組比較，兩者以不同比例配伍后各組可減少細(xì)胞的凋亡數(shù)目，結(jié)果見圖3。

注：A.空白組；B.甘草組；C.千金子組；D.甘草-千金子(4∶1)；E.甘草-千金子(2∶1)；F.甘草-千金子(1∶1)；G.甘草-千金子(1∶2)；H.甘草-千金子(1∶4)；比例尺=1000 μm。圖3 各組LO2細(xì)胞形態(tài)圖

3.4 甘草與千金子中各指標(biāo)成分與細(xì)胞的相對(duì)存活率相關(guān)性分析

將指標(biāo)成分千金子素L1、L2、L3，甘草苷和甘草酸銨的含量分別與細(xì)胞相對(duì)存活率做相關(guān)性分析，結(jié)果表明千金子素L1、L2、L3與細(xì)胞相對(duì)存活率呈負(fù)相關(guān)，甘草苷、甘草酸銨與細(xì)胞相對(duì)存活率呈顯著正相關(guān)，結(jié)果見表5。

表5 甘草和千金子中各指標(biāo)成分與細(xì)胞相對(duì)存活率的相關(guān)性結(jié)果(n=7)

注：*P<0.05。

3.5 熵權(quán)法計(jì)算得各指標(biāo)成分權(quán)重及不同比例得分

采用熵權(quán)法計(jì)算各指標(biāo)成分的權(quán)重，并對(duì)甘草-千金子不同配伍比例進(jìn)行綜合評(píng)分比較，結(jié)果千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3、甘草苷和甘草酸銨的權(quán)重依次為0.30、0.22、0.18、0.17和0.12，甘草-千金子4∶1、2∶1、1∶1、1∶2和1∶4各配伍比例的得分依次為2.97、2.75、2.99、2.71和2.82，得到綜合評(píng)價(jià)排序?yàn)?∶1、4∶1、1∶4、2∶1、1∶2。

4 討論

中藥本身成分較多，而配伍后的成分更為龐雜，藥物間的相互關(guān)系也異常復(fù)雜。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)甘草-千金子不同配伍比例下主要化學(xué)成分的變化進(jìn)行研究，初步探討甘草-千金子配伍變化的物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)果表明甘草與千金子以不同比例配伍后甘草苷、甘草酸銨、千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3等主要指標(biāo)成分的溶出會(huì)發(fā)生不同的變化，甘草苷與甘草酸銨相對(duì)于甘草單提組溶出率增加，而千金子素L1、千金子素L2、千金子素L3相對(duì)于千金子單提組普遍減小，提示其有效成分的變化可能與配伍前后毒效作用不一有關(guān)。此外，用CCK-8法從細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞活力角度測(cè)定甘草-千金子不同配伍比例對(duì)正常肝細(xì)胞LO2的毒性作用，發(fā)現(xiàn)千金子單藥對(duì)正常肝細(xì)胞LO2有抑制作用，甘草與千金子配伍后可減輕千金子的細(xì)胞抑制作用，且隨著配伍比例中甘草比例的增加減緩作用增強(qiáng)。通過(guò)相關(guān)性分析并利用熵權(quán)法計(jì)算各指標(biāo)成分的權(quán)重及對(duì)不同配伍比例進(jìn)行綜合評(píng)分，得甘草與千金子配伍比例1∶1時(shí)綜合評(píng)分最高，即基于化學(xué)成分變化及體外細(xì)胞毒性研究得兩者的最佳配伍比例為1∶1時(shí)可有效降低千金子的體外肝細(xì)胞毒性作用。

“十八反”為中藥配伍禁忌的主要內(nèi)容，但兩相反藥物配伍使用在古代中醫(yī)方劑和現(xiàn)代臨床中均有相應(yīng)的應(yīng)用。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)基于中藥“七情”配伍規(guī)律，從物質(zhì)基礎(chǔ)及細(xì)胞角度對(duì)甘草-千金子不同配伍比例的化學(xué)成分及體外細(xì)胞毒性進(jìn)行研究，結(jié)合客觀性較強(qiáng)的熵權(quán)法對(duì)其配伍比例進(jìn)行綜合評(píng)分優(yōu)選，初步對(duì)甘草-千金子不同比例配伍進(jìn)行了研究，為其他藥物配比的研究提供新的研究思路與方法。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理時(shí)，采用熵權(quán)法對(duì)各權(quán)重指標(biāo)進(jìn)行客觀賦權(quán)，與主觀賦權(quán)法相比，權(quán)重?cái)?shù)據(jù)完全來(lái)源于實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)的整理、計(jì)算與分析，其得到的權(quán)重系數(shù)可靠性更高，可以客觀地反映出實(shí)際數(shù)據(jù)的內(nèi)在規(guī)律，從而對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出客觀評(píng)價(jià)，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確[35-36]。僅有的2篇文獻(xiàn)報(bào)道表明，千金子與甘草合用在腸黏膜損傷方面能夠體現(xiàn)“增毒”的配伍禁忌現(xiàn)象，而在腸屏障功能、腸道運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)功能及系統(tǒng)炎癥方面未見配伍前后的顯著差異[5-6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在適當(dāng)?shù)谋壤湮榻M方后，“十八反”藥物可能并不是絕對(duì)的配伍禁忌，這與自古至今均有“十八反”同用的情況相符，前期甘遂、大戟等與甘草配伍的研究也出現(xiàn)毒性減弱的情況[37-38]，體現(xiàn)出甘草“清熱解毒，調(diào)和諸藥”的性質(zhì)。分析原因有以下幾個(gè)方面，一是藥物提取方式的不同，本實(shí)驗(yàn)中千金子與甘草的提取方式為合提，而此前文獻(xiàn)報(bào)道中的藥物為單味藥提取后合并使用及單味藥物提取物與單體成分的混合使用；二是本實(shí)驗(yàn)是基于化學(xué)成分及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的體外研究，文獻(xiàn)報(bào)道的研究是基于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體內(nèi)研究；三是藥物比例不同，本實(shí)驗(yàn)中千金子-甘草的配伍比例與文獻(xiàn)中的不同。綜上所述，千金子-甘草配伍受藥材品質(zhì)、炮制方法、配伍比例、藥物劑型及機(jī)體等多種因素影響且作用機(jī)制復(fù)雜，故需要從體內(nèi)外物質(zhì)基礎(chǔ)變化、量-效-毒關(guān)系、成分-靶點(diǎn)-通路等方面對(duì)千金子-甘草的配伍作用機(jī)制進(jìn)行深入探討，以期能科學(xué)、客觀地評(píng)價(jià)兩者配伍應(yīng)用，并為兩者臨床合理安全用藥提供理論依據(jù)。