千金子炮制減毒機理的研究進展

朱娟娟，辛義周，馬傳江

(山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東省中藥臨方炮制研究所，山東 濟南 250011)

千金子系大戟科植物續(xù)隨子(EuphorbialathyrisL.)的干燥成熟種子，廣泛分布于河北、河南、浙江、遼寧等省份，是我國常見的中草藥材，具有瀉下逐水、破血散結(jié)的功效，可用于水腫、積滯、脹滿和血瘀經(jīng)閉等癥的治療，作為外用藥時，可治療頑癬、疣贅等病癥。同時，千金子具有較強的毒性，對胃腸道有強烈的刺激作用，其峻瀉作用強度可達蓖麻油的三倍左右[1]，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)也有毒性，臨床誤服或多服容易引起中毒，被列為我國28種有毒中藥管理，歷代多采用去油制霜法炮制以降低毒性，緩和瀉下作用?！吨袊幍洹?015年版中，單列了千金子和千金子霜，仍采用制霜法制備千金子霜，在質(zhì)量控制方面，除對秦皮乙素定性鑒別外，《中華藥典》2010 年版開始千金子增加了千金子甾醇不得少于0.35%的規(guī)定，千金子霜則規(guī)定含脂肪油應為18.0%～20.0%。生品中千金子甾醇作為有效成分規(guī)定了最低含量要求，霜中脂肪油作為既有毒又有效的成分規(guī)定了含量范圍。制霜是中藥炮制的特色制法，千金子是去油制霜的代表藥物，古今臨床應用效果和藥理實驗無不驗證了制霜可有效降低千金子毒性，改善千金子瀉下作用強度，但其毒效物質(zhì)基礎和作用機理尚不完全清楚，制約了千金子的進一步開發(fā)和應用。本文從化學成分和藥理作用方面對千金子炮制減毒機理作了初步總結(jié)，為更好地開發(fā)利用千金子提供科學依據(jù)。

1 化學成分

根據(jù)化學分析結(jié)果，千金子主要化學成分為脂肪油(47%～50%)[2]、蛋白質(zhì)(15%)，其他成分為二萜酯、游離態(tài)二萜醇、甾醇、香豆素類以及其他化合物。

1.1 脂肪酸 危文亮等[3]報告了千金子中脂肪油的各類脂肪酸含量，主要以C16、C18脂肪酸為主。通過對不同種類的脂肪酸進行測定，發(fā)現(xiàn)油酸含量占比達84%，其他脂肪酸以棕櫚酸、亞油酸和亞麻酸等形式存在，含量占比分別為6.5%、4%、2.5%。

對千金子石油醚萃取部位化學成分分離過程中得到的大量小極性油脂進行了GC-MS分析，結(jié)果分離鑒定出 55 個化合物，占樣品總量的 99.37%。進一步分析發(fā)現(xiàn)，該55個化合物主要為脂肪酸，其中，不飽和脂肪酸占比最高，各類化合物含量為十八碳-6-烯酸(73.073%)、3-羥丙基酯油酸(10.902%)、棕櫚酸(6.301%)、順式- 13 - 二十碳烯酸甲酯(1.228%)。除此之外，還有12種成分及含量見于文獻報道[2]。

此外，有人采用GC-MS法測定了干金子和千金子霜油中脂肪酸成分，以油酸相對含量最高，其次為棕櫚酸和亞油酸，并且發(fā)現(xiàn)制霜前后這些成分組成和含量變化不大[4]，說明制霜對其影響不明顯。

1.2 二萜類 自1965年起，Adolf等[5]即開始千金子化學成分的分離、提取研究，并先后報道了8種二萜類成分，包括千金子素L1至千金子素L8(Euphorbia factor L1～Euphorbia factor L8)。1990年，Itokawa等[6]成功分離并提取出千金子素L9，2003年Appendino等[7]成功分離并提取千金子素L10，2005年Liao等[8]從千金子中分離出千金子素L11。經(jīng)國內(nèi)外相關(guān)文獻資料表明，千金子中的二萜類主要為以巨大戟烷(ingenane)和續(xù)隨子烷(lathyrane)為骨架的二萜化合物。近年來，隨著研究的不斷深入，千金子中又分離出兩種新骨架的二萜類化合物。Liao等[8]于2005年分離出的Lathyrannic acid A骨架化合物和Gao等[9]于2007年分離出的Lathyranone A骨架化合物。

張超等[10]對千金子石油醚部位進行初步化學成分分離得到的5個化合物即秦皮乙素和4種千金子素(L1、L2、L3、L8)，并對其在千金子不同用藥部位的分布情況進行了考察，發(fā)現(xiàn)秦皮乙素在千金子種皮中含量最高，同時，種皮中的二萜酯類含量很低，甚至部分檢品低于最低檢測限值，導致二萜酯類無法檢出。而在千金子種仁中，化合物含量分布與種皮情況相反，脂肪油及二萜酯類化合物主要分布于種仁中，種皮中脂肪油含量僅為3.29%左右。根據(jù)相似相溶原理進行分析，二萜酯類主要存在于千金子脂肪油中具有一定的道理。

近年來,李英霞等[11]借助高效液相色譜方法對不同產(chǎn)地的千金子其制霜前后所含千金子素L1和L3進行含量測定，發(fā)現(xiàn)制霜后千金子素含量顯著下降，下降率分別為64.22%和62.86%。

2 藥理作用

2.1 毒性研究 千金子的毒性作用體現(xiàn)在對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，一般情況下，由千金子引起的毒性作用，大多因患者過量服用藥物或誤服藥物導致。根據(jù)臨床實踐經(jīng)驗，千金子中毒劑量為9～15 g，輕度中毒患者可出現(xiàn)眩暈、頭疼、惡心、心悸、面色蒼白、冷汗等癥狀，嚴重中毒患者可出現(xiàn)血壓下降、脈搏微弱、呼吸短促等危重癥候[12]。由于千金子含有的甾醇對胃腸道具有強烈的刺激作用，能夠引起胃腸道激烈反應，進而產(chǎn)生峻瀉癥狀，作用強度約為蓖麻油的3倍[13]。此外，千金子含有的殷金醇棕櫚酸酯成分有致癌、促癌作用，與巴豆油類似[14]。

李濱等[14]以小鼠為研究對象，觀察千金子水煎液(每1 mL相當于生藥0.2 g)對小鼠的致死率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2.5 mg·kg-1為小鼠100%致死量，1.3 mg·kg-1為最低安全劑量，1.795 0 mg·kg-1為半數(shù)致死量(LD50)，95%的置信范圍為1.621%～1.988%。

楊珺等[15]通過研究千金子提取液對細胞的毒性作用，發(fā)現(xiàn)當千金子提取液濃度控制在15.625、7.813 mg·L-1范圍時，千金子提取液對細胞毒性作用不明顯，當濃度控制在125、62.5、31.25 mg·L-1范圍時，千金子提取液毒性顯著，且毒性與濃度呈正比，在高濃度范圍內(nèi)千金子提取液對細胞有一定毒性。鄭飛龍等[16]通過咸水蝦致死試驗證實，化合物千金子素L1、L2、L3、L8、L95個二萜類化合物對咸水蝦有較強毒性。

曹艷花[17]分別將千金子種皮、種仁細粉按比例混合后用0.1% CMC-Na配置成供試品溶液給小鼠灌胃，結(jié)果在最大耐受量實驗中實驗小鼠出現(xiàn)大便次數(shù)增多，活動減少的情況，但是未見死亡。將依照脂肪油含量測定方法制備的千金子脂肪油給小鼠灌胃，用改良寇氏法計算LD50為19.00 g·kg-1，95%可信限為17.71～20.39 g·kg-1。在討論千金子霜的制備方法過程中，分別提取烘制千金子和千金子霜的脂肪油樣品給小鼠灌胃，急性毒性實驗結(jié)果表明烘千金子脂肪油LD50為20.78 g·kg-1，95%可信限為19.36～22.39 g·kg-1，而烘千金子霜脂肪油LD50為124.1 g·kg-1，95%可信限為114.1～134.9 g·kg-1。結(jié)果進一步表明，千金子中所含的脂肪油是其主要毒性成分，制霜能夠降低其毒性，而且脂肪油含量與毒性大小具有量化關(guān)系。

孫付軍[18]將含油量分別為22.3%、25.0%和28.4%的千金子霜，在同等劑量下進行毒性實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同含油量千金子霜給藥組出現(xiàn)俯臥、少動、被毛潮濕等現(xiàn)象，間隔4 h后分別進行第二次、第三次實驗，毒副作用的時間略有差別，含油量較高的千金子霜出現(xiàn)毒副反應的時間略早，程度略重。而大劑量給藥時，隨著含油量的增加千金子霜的毒副作用也加重，含油量為28.4%的千金子霜組出現(xiàn)藥液樣稀便現(xiàn)象，但癥狀較脂肪油組和千金子生品組明顯減輕，表明毒性部位主要存在于脂肪油中。

2.2 藥效學研究 李鳳英等[19]采用大鼠在體灌流模式對千金子制霜前后提取物中主要二萜醇酯類成分吸收特性進行研究，通過在體單項腸道灌流實驗方式考察生千金子和霜制品提取物中千金子素L1、L2和L3大鼠腸吸收特性，結(jié)果表明：千金子素L1、L2、L3在不同腸段中吸收較好，千金子生品提取物中千金子素L1、L2、L3在不同的腸段吸收效果均大于霜品提取物，表明制霜能夠顯著減少各腸段對千金子素L1、L2、L3的吸收，從而進一步驗證了千金子制霜減毒作用機理。

宋衛(wèi)國等[20]采用復方地芬諾酯造成小鼠便秘模型，分別觀察千金子素L2、千金子生品和含油量不等的千金子霜對小鼠小腸推進作用的影響，結(jié)果表明：未發(fā)現(xiàn)千金子素L2與排便潛伏期縮短或便?？倲?shù)有顯著關(guān)系。但是發(fā)現(xiàn)小鼠糞便含水量顯著上升，千金子素L2對腸道水分吸收有著良好的抑制作用，千金子生品與千金子霜進行對比研究，結(jié)果表明：千金子生品對小鼠小腸具有較強的推動作用，在不同含油量的千金子霜實驗中，均發(fā)現(xiàn)小鼠小腸蠕動顯著加快，但與千金子生品小腸推動效果相比，千金子霜的作用相對較弱，隨著千金子霜含油量的降低，其腸蠕動作用逐漸減慢，與千金子霜中含油量呈一定線性關(guān)系，說明千金子制霜炮制后瀉下作用有所緩和，證明了除千金子素L1外，千金子素L2為另一瀉下成分。

現(xiàn)代研究認為，正常菌群在人體的生命活動中起著非常重要的作用。腸道內(nèi)存在著數(shù)量龐大且組成復雜的正常菌群，正常情況下，菌群處于平衡狀態(tài)，是機體健康的保證。近期研究發(fā)現(xiàn)，瀉下類中藥中因含有刺激性成分，對腸道內(nèi)的益生菌具有抑制作用，造成腸道菌群紊亂[21-22]。

孫振陽等[23]通過對大鼠糞便中的雙歧桿菌、大腸桿菌、乳酸桿菌和腸球菌的數(shù)量變化檢測，分析千金子制霜前后提取物對大鼠腸道菌落的影響。結(jié)果千金子生品和霜品提取物對大鼠腸道中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌和腸球菌作用存在顯著差異，尤其是作為腸道屏障的雙歧桿菌和乳酸桿菌多樣性顯著減少，導致正常的腸道菌落形態(tài)被破壞，腸道蠕動加快一定程度上影響了腸道菌落比例，產(chǎn)生菌落失衡的情況。同時，千金子制霜后提取物引起的腸道紊亂情況較生品作用降低，在低劑量下，腸球菌和大腸桿菌數(shù)量減少，表明千金子生品和霜品提取物對腸道菌落均有一定的抑制作用，千金子霜品對4種菌落作用相對減弱，由此引起的腸道菌落紊亂程度減小，與千金子制霜后瀉下作用緩和的研究結(jié)論一致。

3 結(jié)語

生千金子的含油量極高，目前，通過對千金子中化合物進行分離主要得到千金子素L1、L2、L3、L8等二萜酯類化合物，而對化合物分離過程中得到的小極性油脂類成分進行 GC-MS分析結(jié)果得知其中主要為脂肪酸，且目前并無脂肪酸的有關(guān)毒性報道，說明千金子的主要毒性成分很有可能是含量較大的二萜酯類化合物。對千金子的水煎液、粉末以及脂肪油分別進行的急性毒性實驗均表明千金子具有很強的致死毒性，且瀉下作用明顯。通過千金子制霜前后對大鼠腸道吸收、腸道菌落等影響研究，表明千金子中二萜酯類化合物對腸道吸收和菌落具有一定的抑制性作用，是千金子制霜減毒的主要作用機理。千金子素L1、L2、L3、L8、L95個二萜類化合物的急性毒性實驗結(jié)果進一步確定了二萜酯類化合物為千金子的主要毒性成分。千金子制霜后宏觀表現(xiàn)在脂肪油含量的降低，而二萜酯類化合物又主要存在于脂肪油中，隨著千金子霜中脂肪油含量的降低，千金子素L1、L3等二萜酯類化合物的含量也明顯降低，同時毒效實驗表明隨著千金子霜中脂肪油含量的降低毒副作用也明顯變?nèi)?，對腸道的刺激作用趨于緩和，制霜后LD50也顯著提高。綜合以上，初步認為千金子炮制減毒的機理主要與制霜后二萜酯類化合物含量降低有關(guān)。