綜合評(píng)分法優(yōu)選輔料甘草汁的制備工藝

史 輯 景海漪 盧 瑩 賈天柱*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

綜合評(píng)分法優(yōu)選輔料甘草汁的制備工藝

史 輯 景海漪 盧 瑩 賈天柱*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

目的 優(yōu)選炮制輔料甘草汁的最佳制備工藝。方法 采用正交試驗(yàn)法對(duì)甘草汁的制備各個(gè)影響因素進(jìn)行考察，通過(guò)多指標(biāo)綜合評(píng)分法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，優(yōu)選工藝條件。結(jié)果 因素D對(duì)甘草汁制備工藝的綜合評(píng)分值影響最顯著，因素A，B，C均為影響不顯著因素，可結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際進(jìn)行選擇。結(jié)論 采用綜合評(píng)分法通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選甘草汁制備工藝為：甘草藥材加8倍量水浸泡1 h，煎煮3次，每次1.5 h。

炮制輔料；甘草汁；制備工藝；高效液相色譜法；甘草苷；甘草酸；綜合評(píng)分法

甘草汁是中藥炮制常用的液體輔料，為甘草煎湯去渣而得，一些藥物經(jīng)甘草汁浸泡或煎煮后能增強(qiáng)補(bǔ)益作用，緩和劣性等，如甘草汁制巴戟天、制遠(yuǎn)志。各省炮制規(guī)范對(duì)于甘草汁制備方法的規(guī)定較多，對(duì)其中浸泡時(shí)間、溶劑用量等因素的描述不明確，對(duì)于甘草汁制藥材的方法記載也不一致[1-3]。為保證制巴戟飲片的規(guī)范生產(chǎn)，本實(shí)驗(yàn)采用綜合評(píng)分的方法對(duì)甘草汁制備工藝進(jìn)行考察，結(jié)合傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)，為甘草汁的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料與儀器

日本島津公司LC-20A液相色譜儀（LC-20AB泵，IL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，CBM-20A系統(tǒng)控制器，CTO-20A柱溫控制箱，SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器，LC-Solution工作站）；SARTORIUS CP225D型十萬(wàn)分之一分析天平；KQ-5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；X/WT數(shù)顯調(diào)節(jié)儀電熱恒溫水浴鍋（余姚市顯星儀器有限公司）；電熱恒溫干燥箱（上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠）。

甘草飲片購(gòu)自大連開(kāi)發(fā)區(qū)陽(yáng)光大藥房，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李峰教授鑒定為豆科植物甘草Glycyrrhizin uralensis Frisch的干燥根和根莖；甘草酸及甘草苷對(duì)照品購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司；甲醇和乙腈為色譜純, 水為娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草苷和甘草酸的HPLC測(cè)定方法的建立。

2.1.1 色譜條件：日本島津公司LC-20A液相色譜儀；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脫，0～8 min乙腈19%，8～35 min乙腈19%～50%，35～36 min乙腈50%～100%，36～40 min乙腈100%～19%；流速1 mL/min；柱溫25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。此條件下，樣品中甘草苷、甘草酸均可達(dá)到基線分離，分離度良好。

2.1.2 甘草藥材供試液的制備：精密稱取甘草藥材粉末（60目）約0.12 g于50 mL具塞三角瓶中，加入流動(dòng)相20 mL，稱重，超聲提取30 min，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液，微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，作為供試液，取供試液10 μL注入高效液相色譜儀，根據(jù)峰面積計(jì)算藥材中甘草酸、甘草苷的含量。

2.1.3 線性關(guān)系考察：精密稱定甘草苷和甘草酸對(duì)照品各10 mg，置于25 mL量瓶中，加少許甲醇溶解后，用流動(dòng)相定容。精密吸取上述對(duì)照品溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別進(jìn)樣3次（每次進(jìn)樣20 L），按“2.1.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積均值A(chǔ)對(duì)進(jìn)樣量C（g）線性回歸，求得甘草苷（1）和甘草酸（2）的線性回歸方程分別為：

甘草苷的線性范圍為0.2064～1.032 g；甘草酸的線性范圍為：0.3904～1.9520 g；樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。RSD＜1.0%。

2.2 出膏率的測(cè)定

稱取甘草藥材50 g，切成1～2 cm碎段，加適量水浸泡后，進(jìn)行煎煮，將煎煮液轉(zhuǎn)移至1000 mL量瓶中，并用水稀釋至刻度。精密量取25 mL置于已恒重的蒸發(fā)皿中，于105 ℃干燥3 h，稱重，計(jì)算出膏率。

2.3 甘草汁制備工藝篩選

以出膏率、甘草酸及甘草苷的提取率為指標(biāo)，以浸泡時(shí)間、溶劑用量、提取時(shí)間和提取次數(shù)為考察因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，選擇L9（34）正交表，見(jiàn)表1；根據(jù)測(cè)定結(jié)果，進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)分。評(píng)分時(shí)以各指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)最大值為參照將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化，再給以不同的權(quán)重。鑒于甘草藥材中甘草苷和甘草酸的含量和藥理活性較好，二者取相同的權(quán)重系數(shù)，均設(shè)為0.4。在有效成分明確的前提下，出膏率越高則純度越低，但是本實(shí)驗(yàn)甘草藥材有效成分種類較多，藥理作用多樣，因此我們認(rèn)為其出膏率代表其他類有效成分，因此設(shè)其權(quán)重系數(shù)為0.2。以綜合值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見(jiàn)表2和表3。其中綜合評(píng)分Y=0.4X1×100/87.35+0.4X2×100/63.38+0.2X3×100/3.9434。

表1 甘草汁提取工藝因素水平

表2 甘草汁提取工藝正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析

直觀分析結(jié)果表明，以綜合評(píng)分為標(biāo)準(zhǔn)，在所選因素水平范圍內(nèi)，煎煮次數(shù)對(duì)結(jié)果影響最大，其次是煎煮時(shí)間，浸泡時(shí)間對(duì)于結(jié)果的影響較小。以極差最小的因素，即浸泡時(shí)間做為誤差，進(jìn)行方差分析[4]。結(jié)果表明，提取次數(shù)D為主要影響因素，因素A影響最小。根據(jù)正交試驗(yàn)綜合評(píng)分結(jié)果優(yōu)選最佳提取方案為A2B1C2D3，即甘草藥材，切成1～2 cm碎段，加入8倍量水，浸泡1 h后，煎煮3次，每次1.5 h，3次所得煎煮液合并即得。

2.4 最佳提取工藝的驗(yàn)證

按照最佳工藝，稱取甘草藥材6 g，切成1～2 cm碎段，加入8倍量水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，煎煮3次，合并濾液，濾液濃縮至100 mL。精密吸取1 mL濃縮液置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，在上述色譜條件下進(jìn)樣10 L，測(cè)定結(jié)果為甘草汁中的甘草苷平均含量為0.720%，甘草酸平均含量為1.406%。

按照確定的最佳工藝，重復(fù)驗(yàn)證3次，測(cè)得平均出膏率為2.84%，甘草酸提取率為62.15%，甘草苷提取率為70.69%，在正交表中與最佳工藝最接近的4號(hào)試驗(yàn)相比，較為接近。因此說(shuō)明此工藝穩(wěn)定，方法可靠。

3 討 論

甘草汁作為炮制輔料，其質(zhì)量?jī)?yōu)劣直接影響巴戟天等飲片炮制，要建立規(guī)范化炮制輔料甘草汁制備工藝具有重要意義，本研究以2010年版中國(guó)藥典規(guī)定甘草藥材的指標(biāo)性成分，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，以浸泡時(shí)間、溶劑用量、提取時(shí)間和提取次數(shù)為考察因素。結(jié)果表明，提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)甘草苷和甘草酸的含量影響較大，最終確定甘草汁的最佳制備工藝為：甘草藥材，切成1～2 cm碎段，加入8倍量的水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，煎煮3次，3次所得煎煮液合并即得。

甘草汁作為常用的炮制輔料，一般以甘草飲片用量為指標(biāo)，我們之前工作是分別對(duì)甘草苷和甘草酸采取不同色譜條件分別檢測(cè)，工作量較大，本實(shí)驗(yàn)依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部甘草藥材的指標(biāo)性成分檢測(cè)方法，按優(yōu)選工藝制備甘草汁，測(cè)定甘草汁中的甘草苷含量為0.720%，甘草酸含量為1.406%。采用該甘草汁炮制藥物時(shí)，可按照原料藥的炮制要求等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，可保證甘草汁中甘草苷和甘草酸的總含量，穩(wěn)定其炮制品的質(zhì)量。

制備甘草汁時(shí)，我們使用電熱套加熱水回流提取藥材，既能保證充分回流，又可以防止煎煮甘草藥材時(shí)水分不斷揮發(fā)，藥材有效成分提取不完全，且燒杯煎煮體積不易控制，得到有效成分含量高的甘草汁，對(duì)中藥飲片的炮制有一定的指導(dǎo)意義。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 鈕正睿,李先瑞,顧雪竹,等.炮制輔料甘草汁的制備工藝研究[J].中國(guó)中藥雜志,2009,34(16):2051-2053.

[3] 梁憲楊.以甘草為輔料炮制品的研究初探[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2000,16(6):369-370.

[4] 蔡翠芳,冀小君,堐榜琴,等.炮制輔料甘草汁的制備工藝研究[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,10(6):25-27.

Studies on Technology Optimization for Preparing Licorice Juice by Multi-Target Grading Method

SHI Ji, JING Hai-yi, LU Ying, JIA Tian-zhu*
(School of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China)

Objective To optimize prepare technology for licorice juice. Methods Based on the preliminary result of screening test. The water extract technology was chosen and optimized by an orthogonal test. Extraction time and numbers were examined at three levels and a multi-target grading methods was applied, which synthesized the paste-forming rate, extraction rate of glycyrrhizic acid and liquiritin. Results Extraction time significantly effected on multi-target grade, other factors could be selected in accordance with production practice. Conclusion The best extraction is obtained after the herb is extracted with 8 folds water for three numbers and each last 1h.

Morinda officinalis; Licorice juice; Preparing technology; HPLC; Glycyrrhizic acid; Liquiritin; Multi-target grading method

R283

：B

：1671-8194（2014）08-0040-02

*通訊作者