子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)變化及其臨床意義

張宇靖，騰紅，周炫妤

中國(guó)人民解放軍92493部隊(duì)醫(yī)院，遼寧葫蘆島125001

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，占女性惡性腫瘤總數(shù)的4%～7%[1]。與歐美發(fā)達(dá)國(guó)家相比，我國(guó)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率總體處于較低水平，但近年來(lái)持續(xù)上升并呈年輕化趨勢(shì)[1,2]。浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是影響惡性腫瘤治療效果和患者預(yù)后的重要因素[3]。因此，探索敏感性高、特異性強(qiáng)的腫瘤標(biāo)志物對(duì)惡性腫瘤早期診斷、預(yù)測(cè)病情和預(yù)后具有重要意義。隨著腫瘤發(fā)病分子機(jī)制研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)了多種與腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的因子[4]。E-鈣黏蛋白(E-cadherin)是一種主要在上皮細(xì)胞膜表達(dá)的跨膜糖蛋白，能夠介導(dǎo)上皮細(xì)胞間的黏附連接，對(duì)維持正常上皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，在非小細(xì)胞肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤組織中E-cadherin異常表達(dá)，并與腫瘤進(jìn)展和患者預(yù)后密切相關(guān)[5～7]?？缒そz氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)屬于Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4表達(dá)上調(diào)能夠介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖、侵襲和遷移，從而參與前列腺癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[8～10]。但目前E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)變化與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系尚不清楚。為此，本研究觀察了子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)變化，并探討其表達(dá)變化與腫瘤進(jìn)展和患者預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年5月～2016年5月中國(guó)人民解放軍92493部隊(duì)醫(yī)院收治的子宮內(nèi)膜癌患者93例(觀察組)。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合子宮內(nèi)膜癌診斷；②初診；③接受子宮切除手術(shù)，包括廣泛子宮切除手術(shù)聯(lián)合雙側(cè)附件切除手術(shù)或盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)以及筋膜外全子宮切除術(shù)；④術(shù)前未接受任何抗腫瘤治療；⑤預(yù)計(jì)生存時(shí)間>6個(gè)月；⑥臨床病理資料和隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心、肝、腎等重要臟器嚴(yán)重功能障礙或凝血功能障礙者；②合并急慢性炎癥性疾病、自身免疫性疾病或其他部位惡性腫瘤者；③術(shù)前接受任何抗腫瘤治療者；④妊娠期或哺乳期女性；⑤合并其他惡性腫瘤者?；颊吣挲g29～73(60.87±10.24)歲，其中<60歲41例、≥60歲52例；絕經(jīng)狀態(tài)：絕經(jīng)前34例，絕經(jīng)后59例；組織學(xué)類型：腺癌72例，鱗癌21例；FIGO分期[11]：Ⅰ、Ⅱ期58例，Ⅲ、Ⅳ期35例；組織分化程度：低未分化37例，高中分化56例；浸潤(rùn)深度：未浸潤(rùn)31例，淺肌層38例，深肌層24例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例。同期隨機(jī)選擇中國(guó)人民解放軍92493部隊(duì)醫(yī)院收治的，因陰道流血行診斷性刮宮并經(jīng)組織病理檢查證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜患者45例(對(duì)照組)，年齡30～76(58.92±11.35)歲。兩組年齡具有可比性。本研究經(jīng)中國(guó)人民解放軍92493部隊(duì)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象或其家屬知情同意。

1.2 E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化SP法。取手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌組織和診斷性刮宮獲取的正常子宮內(nèi)膜組織，4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。然后將切片置于65 ℃烤箱烘片30 min，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，3%過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，檸檬酸抗原修復(fù)液(pH 6.0)加熱修復(fù)抗原，自然冷卻至室溫。山羊血清封閉液封閉后，分別加入兔抗人E-cadherin、TMPRSS4一抗，4 ℃過(guò)夜。次日加入HRP標(biāo)記的二抗室溫孵育20 min后，加入鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物37 ℃孵育30 min，DAB染色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知E-cadherin、TMPRSS4陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片。E-cadherin、TMPRSS4陽(yáng)性染色主要定位于胞質(zhì)中，呈棕褐色或深褐色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)400倍視野，評(píng)估染色強(qiáng)度，并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。染色強(qiáng)度：未著色為0分，淺棕色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞比例：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，≤25%為1分，>25%～<50%為2分，≥50%為3分。以染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例綜合評(píng)估陽(yáng)性表達(dá)[12]，二者評(píng)分乘積≥1即為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 隨訪 子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后采用門(mén)診、電話等形式定期隨訪，術(shù)后2年內(nèi)每3個(gè)月隨訪1次、術(shù)后第3年開(kāi)始每6個(gè)月隨訪1次，共隨訪時(shí)間為3年。終點(diǎn)事件為患者死亡。統(tǒng)計(jì)患者生存時(shí)間，計(jì)算3年生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)比較 觀察組與對(duì)照組E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率分別為38.71%(36/93)、73.33%(33/45)，TMPRSS4陽(yáng)性表達(dá)率分別為78.49%(73/93)、31.11%(14/45)。觀察組E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率低于對(duì)照組，TMPRSS4陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組(χ2分別為14.542、29.224，P均<0.05)。

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin表達(dá)與TMPRSS4表達(dá)的關(guān)系 Spearman秩相關(guān)分析顯示，子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin表達(dá)與TMPRSS4表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(rs=-0.672，P<0.05)。

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)均與FIGO分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，而與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)類型無(wú)關(guān)(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

2.4 子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 截至隨訪日期，共隨訪17～36個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為25個(gè)月，死亡37例，無(wú)失訪病例。

子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)者生存時(shí)間22～35個(gè)月、中位生存時(shí)間29個(gè)月，3年生存率為80.56%(29/36)；E-cadherin陰性表達(dá)者生存時(shí)間16～31個(gè)月、中位生存時(shí)間24個(gè)月，3年生存率為47.37%(27/57)。子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)者中位生存時(shí)間、3年生存率均高于E-cadherin陰性表達(dá)者(χ2分別為9.053、7.231，P均<0.05)。

子宮內(nèi)膜癌組織TMPRSS4陽(yáng)性表達(dá)者生存時(shí)間15～29個(gè)月、中位生存時(shí)間22個(gè)月，3年生存率為53.42%(39/73)；TMPRSS4陰性表達(dá)者生存時(shí)間27～36個(gè)月、中位生存時(shí)間32個(gè)月，3年生存率為85.00%(17/20)。子宮內(nèi)膜癌組織TMPRSS4陽(yáng)性表達(dá)者中位生存時(shí)間、3年生存率均低于TMPRSS4陰性表達(dá)者(χ2分別為12.521、16.085，P均<0.05)。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，是女性生殖系統(tǒng)三大常見(jiàn)惡性腫瘤之一，多發(fā)生于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后婦女。近年來(lái)隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展和居民生活方式轉(zhuǎn)變，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐年升高并呈年輕化趨勢(shì)，已成為威脅女性健康和生活質(zhì)量的主要疾病之一。子宮內(nèi)膜癌早期以手術(shù)治療為主，治療效果較好，中晚期多采取手術(shù)聯(lián)合放化療治療，患者預(yù)后較差，5年生存率較低。目前認(rèn)為，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后較差的重要因素[13,14]。因此，早期診斷子宮內(nèi)膜癌，對(duì)臨床制定針對(duì)性干預(yù)措施具有重要意義。但目前缺少有效的早期子宮內(nèi)膜癌篩查手段。

E-cadherin是一種存在于上皮細(xì)胞膜表面的細(xì)胞黏附分子，能夠介導(dǎo)上皮細(xì)胞間的黏附連接，同時(shí)還具有細(xì)胞骨架，對(duì)維持正常上皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整具有重要作用。研究證實(shí)，在多種惡性腫瘤組織中E-cadherin異常表達(dá)，并與腫瘤進(jìn)展和患者預(yù)后密切相關(guān)展[15]。Lopez-Verdin等[16]研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin表達(dá)下調(diào)能夠使細(xì)胞間的黏附作用降低，進(jìn)而促進(jìn)惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。武鴻彪等[17]研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin能夠參與直腸癌的發(fā)生、發(fā)展，并可作為評(píng)估患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。Jang等[18]研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，并與患者臨床病理特征密切相關(guān)，可作為胃癌輔助診斷和預(yù)后評(píng)估的重要分子標(biāo)志物。TMPRSS4屬于Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白家族成員之一，具有水解蛋白酶體、介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外的多種傳導(dǎo)信號(hào)途徑等作用。有研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4能夠通過(guò)激活uPA/uPAR受體系統(tǒng)和解整合素-金屬蛋白酶受體系統(tǒng)，引起Src、FAK、ERK、Rac1、JNK等信號(hào)傳導(dǎo)異?；罨?，繼而導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[19]。Mahati等[20]研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4表達(dá)上調(diào)與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，具有作為腫瘤診斷、病情評(píng)估和預(yù)后判斷腫瘤標(biāo)志物的潛能。有研究還發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4表達(dá)上調(diào)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖、侵襲和遷移，從而促進(jìn)甲狀腺癌[21]、結(jié)腸癌[22]等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。但目前E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)變化與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系尚不清楚。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率低于對(duì)照組，TMPRSS4陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，提示在子宮內(nèi)膜癌組織存在E-cadherin、TMPRSS4異常表達(dá)現(xiàn)象，其異常表達(dá)能夠參與子宮內(nèi)膜癌形成。E-cadherin正常表達(dá)對(duì)維持上皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整具有重要作用，當(dāng)其表達(dá)下調(diào)或表達(dá)缺失時(shí)，可引起腫瘤細(xì)胞惡性增殖，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。TMPRSS4與相應(yīng)細(xì)胞因子作用可使蛋白酶激活，進(jìn)而啟動(dòng)腫瘤相關(guān)基因表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖并抑制其凋亡。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)均與FIGO分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)類型無(wú)關(guān)。提示E-cadherin、TMPRSS4表達(dá)變化與子宮內(nèi)膜癌侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌病情程度的分子標(biāo)志物。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin表達(dá)與TMPRSS4表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示E-cadherin、TMPRSS4可能通過(guò)相互作用共同介導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。在子宮內(nèi)膜癌中E-cadherin表達(dá)與TMPRSS4表達(dá)具體的作用機(jī)制尚不完全清楚，可能是E-cadherin表達(dá)下調(diào)能夠減弱腫瘤細(xì)胞間的黏附作用，使腫瘤細(xì)胞從原始部位脫離或穿過(guò)基底膜侵犯周圍組織；TMPRSS4表達(dá)上調(diào)能夠促進(jìn)腫瘤新生血管生成，促進(jìn)惡性腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移；TMPRSS4通過(guò)介導(dǎo)整合素α5表達(dá)及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑，抑制E-cadherin表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)者中位生存時(shí)間、3年生存率均高于E-cadherin陰性表達(dá)者；子宮內(nèi)膜癌組織TMPRSS4陽(yáng)性表達(dá)者中位生存時(shí)間、3年生存率均低于TMPRSS4陰性表達(dá)者。提示E-cadherin、TMPRSS4異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后密切相關(guān)，有可能作為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后評(píng)估的分子標(biāo)志物。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌組織E-cadherin表達(dá)下調(diào)、TMPRSS4表達(dá)上調(diào)，二者表達(dá)變化與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和患者預(yù)后密切相關(guān)。E-cadherin、TMPRSS4有可能成為子宮內(nèi)膜癌早期診斷、病情評(píng)估和預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物。