• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    NLRP3炎癥小體和氧化應(yīng)激在新生兒缺氧缺血性腦病患者胎盤組織中的表達(dá)及其臨床意義

    2020-04-27 13:18:47韋婷艷楊杰曾宇婷
    關(guān)鍵詞:缺氧缺血性腦病胎盤氧化應(yīng)激

    韋婷艷 楊杰 曾宇婷

    [摘要] 目的 研究新生兒缺氧缺血性腦?。℉IE)患者胎盤組織中NLRP3炎性小體表達(dá)和氧化應(yīng)激狀態(tài),探討NLRP3炎性小體和氧化應(yīng)激在HIE中的臨床意義。 方法 選擇廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院2010年7月~2019年5月HIE患者胎盤組織(HIE組)及正常胎盤組織(正常組)各30例,免疫組化法檢測(cè)兩組NLRP3表達(dá)。取兩組新鮮胎盤組織各10例,測(cè)定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)濃度。并對(duì)兩組胎盤組織進(jìn)行病理學(xué)評(píng)估。 結(jié)果 HIE組胎盤組織中有合體滋養(yǎng)葉細(xì)胞結(jié)節(jié)和有細(xì)胞滋養(yǎng)葉細(xì)胞的絨毛數(shù)量均高于正常組(P < 0.05),而具有血管合體細(xì)胞膜的絨毛數(shù)少于正常組(P < 0.05)。HIE組胎盤組織中的NLRP3表達(dá)量明顯高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。HIE組的SOD活力低于正常組(P < 0.05),MDA含量高于正常組(P < 0.05)。NLRP3與SOD活力呈負(fù)相關(guān)(r = -0.63,P = 0.00),而與MDA含量呈正相關(guān)(r = 0.74,P = 0.00)。 結(jié)論 HIE新生兒胎盤組織中NLRP3炎癥小體表達(dá)明顯增加并存在異常氧化應(yīng)激,兩者存在相關(guān)性,其可能是新生兒HIE發(fā)生的原因。

    [關(guān)鍵詞] 缺氧缺血性腦病;NLRP3炎癥小體;氧化應(yīng)激;胎盤

    [中圖分類號(hào)] R714.43? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210(2020)03(b)-0017-04

    [Abstract] Objective To investigate the expression and oxidative stress of NLRP3 inflammasomes in the placenta of neonates with hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), and to investigate the clinical significance of NLRP3 inflammasome and oxidative stress in HIE. Methods From July 2010 to May 2019, 30 cases of HIE placental tissue (HIE group) and 30 cases of normal placental tissue (normal group) were selected from Zengcheng District People′s Hospital, Guangzhou, NLRP3 expression was detected by immunohistochemistry. The concentrations of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) were measured in 10 fresh placental tissues, placental tissues of the two groups were pathologically evaluated. Results The number of villi with cytosygotrophoblast nodules and cytotrophoblast cells in the placenta tissues of neonates in HIE group was higher than that of normal group (P < 0.05). The number of villi with cytosomal membrane was less than that of normal group (P < 0.05). The expression level of NLRP3 in HIE group neonatal placenta was significantly higher than that in normal group, and the difference was statistically significant (P < 0.05). SOD activity in HIE group was lower than that in normal group (P < 0.05), and MDA content was higher than normal group (P < 0.05). NLRP3 was negatively correlated with SOD activity (r = -0.63, P = 0.00), while positively correlated with MDA content (r = 0.74, P = 0.00). Conclusion There is a significant increase in the expression of NLRP3 inflammasomes in the placenta of neonates with HIE and abnormal oxidative stress, both of which are correlated, which may be the cause of neonatal HIE.

    [Key words] Hypoxic-ischemic encephalopathy; NOD-like receptor protein 3 inflammasomes; Oxidative stress; Placenta

    新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemi cencephalopathy,HIE)是因圍生期窒息或缺氧所致的腦血流減少性腦損傷,是新生兒死亡率和并發(fā)嚴(yán)重慢性疾病的最重要原因之一[1]。新生兒HIE發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,尚未闡明。氧化應(yīng)激(oxidative stress,OS)由氧化與抗氧化作用失衡導(dǎo)致,在許多疾病中起著核心作用。OS在HIE發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[2]。腦中樞組織受到多種有害損傷時(shí)其固有免疫系統(tǒng)可產(chǎn)生炎性反應(yīng),而固有免疫系統(tǒng)中模式識(shí)別受體NOD樣受體蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎癥小體對(duì)于炎性反應(yīng)的誘導(dǎo)起到了重要作用[3]。在新生鼠缺氧缺血性腦損傷模型的腦組織中,NLRP3炎癥小體及其下游炎癥介質(zhì)表達(dá)升高,NLRP3可能介導(dǎo)和參與新生鼠缺氧缺血性腦損傷病程的發(fā)生與發(fā)展[4]。目前NLRP3炎癥小體在人類新生兒HIE中的作用及相關(guān)研究甚少報(bào)道。本研究分析新生兒HIE胎盤組織中NLRP3炎癥小體表達(dá)和OS狀態(tài),探討NLRP3炎癥小體和OS在HIE中的作用。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇2010年7月~2019年5月廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱“我院”)出生的新生兒HIE患者中胎盤組織石蠟塊30例為HIE組,其中-80℃凍存的新鮮胎盤組織10例。按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)新生兒學(xué)組標(biāo)準(zhǔn)[5],包括前置胎盤10例,胎盤早剝12例,妊娠高血壓綜合征妊娠6例,多胎妊娠2例。孕齡30~44周,平均(39.00±0.73)周。選取同期在我院出生的正常新生兒的胎盤石蠟組織30例作為正常組,其中-80℃凍存的新鮮胎盤組織10例。兩組一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05),具有可比性,見表1。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并已獲得患者監(jiān)護(hù)人知情同意。

    1.2 方法

    1.2.1 胎盤組織的病理學(xué)觀察? 所有病理石蠟組織均為4%中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋。新鮮胎盤組織切取成小塊,生理鹽水清洗后于-80℃凍存?zhèn)溆?。所有石蠟組織4 μm厚切片,常規(guī)HE染色。采用盲法由有經(jīng)驗(yàn)的高年資病理醫(yī)師在400×光學(xué)顯微鏡下觀察胎盤的病理組織學(xué)形態(tài)特征,隨機(jī)觀察10個(gè)不重復(fù)的高倍視野(high power field,HPF)。

    1.2.2 免疫組織化學(xué)染色? 免疫組化試劑盒MaxVisionTM HRP(Mouse/Rabbit)(KIT-5002)、檸檬酸鹽抗原修復(fù)液(MVS-000),PBS緩沖液(PBS-0060)、DAB顯色劑(DAB-0031)均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。兔抗NLRP3多克隆抗體(ab214185)購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。30例HIE新生兒和30例正常新生兒胎盤的石蠟組織4 μm厚切片,常規(guī)脫蠟水化,切片浸泡在修復(fù)液中高壓鍋加熱3 min,自然冷卻后PBS洗5 min×3次,3% H2O2室溫孵育10 min,PBS洗3 min×3次,加NLRP3抗體(稀釋度1∶200)于37℃水浴箱孵育1 h,PBS洗3 min×3次,加入MaxVisionTM HRP 孵育20 min,PBS洗3 min×3次,顯微鏡下DAB控色5~10 min,蘇木精復(fù)染核,常規(guī)封片。免疫組化染色結(jié)果參照文獻(xiàn)[6],高年資病理醫(yī)師在雙盲情況下對(duì)切片染色結(jié)果進(jìn)行判讀:染色強(qiáng)度按無(wú)色、淡黃色、棕黃色和棕褐色依次記0、1、2、3分。同樣物鏡下計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),1%~10%記1分,<10%~50%記2分,<50%~75%記3分,>75%記4分。兩項(xiàng)得分相乘,滿3分為+,4分為++,≥5分為+++,+~+++為陽(yáng)性表達(dá)。

    1.2.3 氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)? 從-80℃冰箱分別取出10名HIE新生兒和10例正常新生兒胎盤組織,勻漿處理后2000 r/min離心15 min(離心半徑10 cm),取上清檢測(cè)。超氧化物歧化酶(SOD)(A001-3)和丙二醛(MDA)測(cè)試盒(A003-1)均購(gòu)自南京建成生物工程研究所,檢測(cè)按照說(shuō)明書進(jìn)行,在酶標(biāo)儀(Thermo ScientificTM,MultiskanTM FC IVD型)450 nm和532 nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。按試劑盒說(shuō)明書給定的公式計(jì)算SOD活性和MDA含量:SOD活力(U/mgprot)=SOD抑制率(%)÷50%×反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)(0.24 mL/0.02 mL)×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù);MDA含量(nmol/mgprot)=(測(cè)定OD值-對(duì)照OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)÷待測(cè)樣本蛋白濃度(mgprot/mL)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 20.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用百分率表示,比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組胎盤組織病理學(xué)觀察結(jié)果比較

    HIE組胎盤組織中有合體滋養(yǎng)葉細(xì)胞結(jié)節(jié)和有細(xì)胞滋養(yǎng)葉細(xì)胞的絨毛數(shù)量均高于正常組(P < 0.05),而具有血管合體細(xì)胞膜的絨毛數(shù)少于正常組(P < 0.05)。見表2。

    2.2 兩組胎盤組織中NLRP3的表達(dá)情況比較

    NLRP3主要表達(dá)在胎盤合體滋養(yǎng)葉細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,呈棕黃色著色(圖1,見封三)。HIE胎盤組織中可見不同強(qiáng)度的NLRP3表達(dá),正常胎盤組織中大部分不表達(dá)NLRP3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。見表3。

    2.3 兩組胎盤組織中SOD和MDA水平比較

    HIE組新生兒胎盤組織中SOD活力明顯低于正常組(P < 0.05),MDA含量明顯高于正常組(P < 0.05)。見表4。

    2.4 NLRP3與SOD、MDA的相關(guān)性分析

    Spearman等級(jí)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),NLRP3與SOD活力呈負(fù)相關(guān)(r = -0.66,P = 0.00),NLRP3與MDA呈正相關(guān)(r = 0.74,P = 0.00)。

    3 討論

    HIE病因復(fù)雜,涉及到氧化應(yīng)激損傷、炎性反應(yīng)等病理因素[7-9],確切機(jī)制尚未闡明。由于新生兒腦內(nèi)糖原甚少,使其對(duì)缺血缺氧極其敏感。胎盤是母體向胎兒供血供氧的唯一通道,胎盤的異常會(huì)導(dǎo)致母胎之間血?dú)饨粨Q異常,從而影響胎兒生長(zhǎng)和發(fā)育。本研究顯示新生兒HIE的胎盤組織發(fā)生了一定程度的病理改變。這些病理改變包括HIE胎盤組織的有合體滋養(yǎng)葉細(xì)胞結(jié)節(jié)和有細(xì)胞滋養(yǎng)葉細(xì)胞的絨毛數(shù)量均高于正常新生兒胎盤,而具有血管合體細(xì)胞膜的絨毛數(shù)比正常新生兒減少(P < 0.05)。新生兒HIE胎盤的這些病理改變,是由于低氧條件下導(dǎo)致的組織學(xué)形態(tài)[10]。

    目前NLRP3在新生兒HIE胎盤組織中的研究較少。研究報(bào)道NLRP3在胎膜早破胎膜及胎盤組織中的表達(dá)升高[11]。在新生鼠HIE損傷模型的腦組織中,NLRP3炎癥小體及其下游炎癥介質(zhì)表達(dá)升高,NLRP3可能介導(dǎo)和參與新生鼠HIE損傷病程的發(fā)生與發(fā)展[4]。本研究NLRP3在新生兒HIE胎盤組織的表達(dá)明顯高于正常新生兒胎盤(P < 0.05)。新生兒HIE的發(fā)生會(huì)伴隨炎性反應(yīng)的出現(xiàn)[12],而炎癥的發(fā)生離不開炎癥小體的參與[13-14]。NLRP3炎癥小體調(diào)控產(chǎn)生的多種炎癥介質(zhì)和因子介導(dǎo)免疫炎性反應(yīng),從而產(chǎn)生一系列的級(jí)聯(lián)放大作用,促進(jìn)炎性反應(yīng)和組織損傷進(jìn)程[15]。作為母體向胎兒供血供氧的唯一通道,胎盤組織中NLRP3炎癥小體的表達(dá)增高,有可能通過激活下游多種炎癥介質(zhì)和因子,通過級(jí)聯(lián)放大作用介導(dǎo)腦部免疫炎性反應(yīng)和組織損傷,從而引起后續(xù)的HIE,但有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

    正常妊娠期的氧化和抗氧化作用保持相對(duì)平衡,不會(huì)產(chǎn)生過度的OS[16-17]。有研究已證實(shí)OS在新生兒HIE的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[18-19]。本研究顯示新生兒HIE胎盤的SOD活力明顯低于正常新生兒胎盤的,MDA含量明顯高于正常新生兒胎盤組織,顯示新生兒HIE胎盤組織中存在過度OS。MDA是細(xì)胞膜磷脂中的多不飽和脂肪酸在受到活性氧攻擊后發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物,其水平升高說(shuō)明組織中活性氧含量過多,被認(rèn)為是檢測(cè)活性氧水平的指標(biāo)[20]。SOD是體內(nèi)極為重要的抗氧化酶,具有強(qiáng)大的清除氧自由基的能力,SOD的活性在抵抗氧化劑產(chǎn)生及氧自由基中起著根本性的作用[20]。推測(cè)胎盤存在缺血缺氧后,導(dǎo)致活性氧產(chǎn)生,并且迅速增加的活性氧抵抗抗氧化劑的防御,最終導(dǎo)致過度的OS反應(yīng)。

    本研究NLRP3與SOD活力呈密切負(fù)相關(guān)性,相反,與MDA呈密切正相關(guān)性。提示新生兒HIE胎盤中同時(shí)存在炎性反應(yīng)與OS,且二者相關(guān)性好。推測(cè)新生兒HIE胎盤組織中NLRP3炎癥小體表達(dá)明顯增加和存在異常OS可能是新生兒HIE發(fā)生的原因。進(jìn)一步研究炎性反應(yīng)體和OS在新生兒HIE中的作用機(jī)制,將有望為預(yù)防和治療新生兒HIE提供新策略。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]? 王鑫,姜泓.新生兒缺氧缺血性腦病的病因和發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2019,36(2):194-197.

    [2]? Zhao M,Zhu P,F(xiàn)ujino M,et al. Oxidative Stress in Hypoxic-Ischemic Encephalopathy:Molecular Mechanisms and Therapeutic Strategies [J]. Int J Mol Sci,2016,17(12):2078.

    [3]? Schroder K,Kanneganti TD,Shao F,et al. Mechanism and Consequences of Inflammasome Activation [J]. J Mol Biol,2018,430(2):131-132.

    [4]? 李曉光,王茉琳,羅文哲,等.NLRP3炎性小體在缺氧缺血新生大鼠腦組織中的表達(dá)及意義[J].中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志,2017,26(1):13-16.

    [5]? 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)新生兒學(xué)組.新生兒缺氧缺血性腦病診斷依據(jù)和臨床分度[J].中國(guó)實(shí)用兒科雜志,2000,15(6):379-380.

    [6]? 高鵬,莫春艷,龔洵,等.復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛和蛻膜中NLRP3炎癥小體的差異性表達(dá)研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2018,27(10):762-765.

    [7]? Al Mamun A,Yu H,Romana S,et al. Inflammatory Responses are Sex Specific in Chronic Hypoxic-Ischemic Encep-halopathy [J]. Cell Transplant,2018,27(9):1328-1339.

    [8]? Al-Shargabi T,Govindan RB,Dave R,et al. Inflammatory cytokine response and reduced heart rate variability in newborns with hypoxic-ischemic encephalopathy [J]. J Perinatol,2017,37(6):668-672.

    [9]? Thurmond P,Yang JH,Li Y,et al. Structural modifications of the prostate in hypoxia,oxidative stress,and chronic ischemia [J]. Korean J Urol,2015,56(3):187-196.

    [10]? 譚運(yùn)福,崔穎鵬.新生兒缺氧缺血性腦病的胎盤組織學(xué)定量學(xué)改變[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2004,20(6):627-628.

    [11]? 季美蕓,盧紅.NOD樣受體蛋白3、Toll樣受體2在胎膜早破患者胎盤和胎膜組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].廣西醫(yī)學(xué),2019,40(1):33-38.

    [12]? Yu-fei NI,Qiu-yan GU,Xiao-qin LI. Research Progress of Mechanism and Treatment of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy [J]. J Int Transl Med,2017,5(3):117-122.

    [13]? Schroder K,Kanneganti TD,Shao F,et al. Mechanism and Consequences of Inflammasome Activation [J]. J Mol Biol,2018,430(2):131-132.

    [14]? Coll RC,O′Neill L,Schroder K. Questions and controversies in innate immune research:what is the physiologicalrole of NLRP3? [J]. Cell Death Discov,2016,2(1):16019.

    [15]? Mangan MSJ,Olhava EJ,Roush WR,et al. Targeting the NLRP3 inflammasome in inflammatory diseases [J]. Nature Reviews Drug Discovery,2018,17(9):588-608.

    [16]? de Andrade Ramos BR,Witkin SS. The influence of oxidative stress and autophagy cross regulation on pregnancy outcome [J]. Cell Stress Chaperones,2016,21(5):755-762.

    [17]? Lisha S,Pammal RS,Indu M,et al. Oxidative stress during early pregnancy and birth outcomes [J]. Public Health Nutr,2016,19(17):3210-3215.

    [18]? Zhao M,Zhu P,F(xiàn)ujino M,et al. Oxidative Stress in Hypoxic-Ischemic Encephalopathy:Molecular Mechanisms and Therapeutic Strategies [J]. Int J Mol Sci,2016,17(12):2078.

    [19]? Qin X,Cheng J,Zhong Y,et al. Mechanism and Treatment Related to Oxidative Stress in Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy [J]. Front Mol Neurosci,2019, 12:88.

    [20]? 苗繪,孫艷美,張萍萍,等.酶抗氧化系統(tǒng)與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)關(guān)系的研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2018,58(21):98-10.

    (收稿日期:2019-09-04? 本文編輯:封? ?華)

    猜你喜歡
    缺氧缺血性腦病胎盤氧化應(yīng)激
    被診斷為前置胎盤,我該怎么辦
    基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對(duì)新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
    被診斷為前置胎盤,我該怎么辦
    新生兒缺氧缺血性腦病63例臨床分析
    經(jīng)顱彩超在新生兒缺氧缺血性腦病中的應(yīng)用價(jià)值
    新生兒缺氧缺血性腦病的早期MRI診斷
    舒適護(hù)理對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病預(yù)后的影響
    氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
    氧化應(yīng)激與結(jié)直腸癌的關(guān)系
    23例胎盤早剝的診斷和處理
    一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美乱妇无乱码| 在线av久久热| 激情在线观看视频在线高清| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 欧美成人午夜精品| 级片在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 色av中文字幕| 久久草成人影院| 国产成人欧美在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| aaaaa片日本免费| 国产成人av教育| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 村上凉子中文字幕在线| 久9热在线精品视频| 热99re8久久精品国产| 日本一区二区免费在线视频| www.999成人在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 人人澡人人妻人| 九色国产91popny在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产97色在线日韩免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产免费男女视频| 亚洲国产欧美网| 人人妻人人看人人澡| 一级毛片女人18水好多| 两个人看的免费小视频| 日本 欧美在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久久久久久久中文| 欧美中文日本在线观看视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美久久黑人一区二区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产成人精品无人区| 成人三级黄色视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲精品在线观看二区| www.自偷自拍.com| www.自偷自拍.com| ponron亚洲| 波多野结衣高清无吗| 久久久国产欧美日韩av| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜精品在线福利| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美中文日本在线观看视频| 天堂影院成人在线观看| 色播在线永久视频| 色老头精品视频在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 色综合婷婷激情| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 午夜福利欧美成人| 亚洲第一青青草原| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产欧美日韩一区二区精品| 在线观看免费午夜福利视频| 99热这里只有精品一区 | 在线观看免费视频日本深夜| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 国产成人av激情在线播放| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | a在线观看视频网站| 婷婷丁香在线五月| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美日本视频| 丝袜在线中文字幕| 久久亚洲精品不卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产亚洲欧美98| 老司机午夜福利在线观看视频| 一级毛片高清免费大全| 热re99久久国产66热| 国产精品一区二区精品视频观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久人妻av系列| 国产人伦9x9x在线观看| 免费观看精品视频网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久香蕉精品热| 午夜福利高清视频| 搡老岳熟女国产| 久久久久久久久久黄片| 1024香蕉在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| www.www免费av| 18美女黄网站色大片免费观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 欧美黑人巨大hd| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 在线观看舔阴道视频| 亚洲av美国av| 精品久久久久久久久久久久久 | 在线播放国产精品三级| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产av又大| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲av成人一区二区三| 国产真人三级小视频在线观看| 国产在线观看jvid| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产成人精品无人区| 可以在线观看的亚洲视频| 精品日产1卡2卡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 男女之事视频高清在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 一级作爱视频免费观看| 欧美一级毛片孕妇| 两个人看的免费小视频| 成人国产综合亚洲| 男人舔女人的私密视频| 久热这里只有精品99| 十八禁网站免费在线| 人成视频在线观看免费观看| 久久久久国内视频| 国产在线观看jvid| 成人三级黄色视频| 久久人妻av系列| 窝窝影院91人妻| 久热爱精品视频在线9| 国产视频一区二区在线看| www.熟女人妻精品国产| 国产精品 国内视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 高清在线国产一区| 搞女人的毛片| 精品福利观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 级片在线观看| 久久九九热精品免费| 午夜免费激情av| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产成人系列免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一级片免费观看大全| 成年免费大片在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产乱子伦一区二区三区| 脱女人内裤的视频| 在线观看日韩欧美| 国产欧美日韩一区二区三| 免费电影在线观看免费观看| 免费av毛片视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| 男女之事视频高清在线观看| 香蕉国产在线看| 色av中文字幕| 欧美大码av| 色综合婷婷激情| 又紧又爽又黄一区二区| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美午夜高清在线| av在线天堂中文字幕| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 成人永久免费在线观看视频| 一区二区三区激情视频| 国产精品影院久久| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 看黄色毛片网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜视频精品福利| 欧美在线黄色| 国产精品九九99| cao死你这个sao货| 男人操女人黄网站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产99久久九九免费精品| 美女国产高潮福利片在线看| 国产成人欧美| 精华霜和精华液先用哪个| 长腿黑丝高跟| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美乱妇无乱码| 在线看三级毛片| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美日本视频| 久久久久久九九精品二区国产 | 欧美日本视频| 成人av一区二区三区在线看| 国产成年人精品一区二区| 人成视频在线观看免费观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产成人av激情在线播放| 一级黄色大片毛片| 亚洲全国av大片| 88av欧美| 亚洲五月天丁香| 两人在一起打扑克的视频| 日本一本二区三区精品| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久香蕉精品热| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 免费看美女性在线毛片视频| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲在线自拍视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 999久久久国产精品视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 听说在线观看完整版免费高清| 国产欧美日韩一区二区精品| 可以在线观看毛片的网站| 美女国产高潮福利片在线看| 此物有八面人人有两片| 国产一卡二卡三卡精品| 免费观看人在逋| 好男人在线观看高清免费视频 | 成人三级黄色视频| 变态另类丝袜制服| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 韩国精品一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 露出奶头的视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| www.精华液| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲熟女毛片儿| av天堂在线播放| 在线天堂中文资源库| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产av一区在线观看免费| 国产精品国产高清国产av| 国产一区在线观看成人免费| 国产精品日韩av在线免费观看| 1024手机看黄色片| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产三级黄色录像| 午夜精品在线福利| 两个人看的免费小视频| 亚洲熟女毛片儿| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲avbb在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 欧美午夜高清在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美午夜高清在线| 一级片免费观看大全| 精品久久久久久成人av| 欧美精品啪啪一区二区三区| 精品人妻1区二区| 久久久久久久午夜电影| 99精品久久久久人妻精品| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲成人久久性| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 色尼玛亚洲综合影院| 成年版毛片免费区| 国产成人系列免费观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲成人精品中文字幕电影| 叶爱在线成人免费视频播放| e午夜精品久久久久久久| 韩国av一区二区三区四区| 欧美在线黄色| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美黄色淫秽网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜激情福利司机影院| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 女性被躁到高潮视频| ponron亚洲| 久久久久久久午夜电影| 午夜激情福利司机影院| 怎么达到女性高潮| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲国产欧美网| 97碰自拍视频| 久久久久久国产a免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 中文字幕高清在线视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲av电影在线进入| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲自拍偷在线| 欧美日韩乱码在线| xxxwww97欧美| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产91精品成人一区二区三区| 久9热在线精品视频| 中文字幕av电影在线播放| 午夜福利高清视频| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲欧美激情综合另类| 色播在线永久视频| 亚洲国产精品999在线| 日本a在线网址| 狂野欧美激情性xxxx| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久99热这里只有精品18| 国产av又大| 日日爽夜夜爽网站| 久久久久久九九精品二区国产 | 丝袜在线中文字幕| 长腿黑丝高跟| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黑人欧美特级aaaaaa片| 老汉色∧v一级毛片| 天堂动漫精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 精品福利观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美在线一区亚洲| 最新美女视频免费是黄的| 999精品在线视频| 黄色视频不卡| 很黄的视频免费| 日韩国内少妇激情av| 国产在线观看jvid| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 淫秽高清视频在线观看| 日韩有码中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 丁香欧美五月| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品国产国语对白av| 在线视频色国产色| 男女之事视频高清在线观看| 午夜久久久在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 丰满的人妻完整版| 久久久久九九精品影院| 黄片播放在线免费| 欧美亚洲日本最大视频资源| 免费高清视频大片| 很黄的视频免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成人三级黄色视频| 成人午夜高清在线视频 | 午夜福利在线在线| 久久久久久大精品| 99久久精品国产亚洲精品| 一本综合久久免费| 男女午夜视频在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品久久久久久成人av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看黄色视频的| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 最近最新中文字幕大全电影3 | 午夜免费观看网址| 国产国语露脸激情在线看| 超碰成人久久| 国产精品,欧美在线| 女警被强在线播放| 757午夜福利合集在线观看| 99热只有精品国产| e午夜精品久久久久久久| av免费在线观看网站| 国产av不卡久久| 狂野欧美激情性xxxx| 一级a爱视频在线免费观看| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲免费av在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲美女黄片视频| 国产黄色小视频在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲自拍偷在线| 在线观看午夜福利视频| 91在线观看av| 免费av毛片视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美成人午夜精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产片内射在线| 韩国精品一区二区三区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 黑人操中国人逼视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| tocl精华| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲成人久久性| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美日本视频| 草草在线视频免费看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 特大巨黑吊av在线直播 | 99热6这里只有精品| 老汉色av国产亚洲站长工具| 免费在线观看成人毛片| 麻豆成人av在线观看| 久久香蕉国产精品| 成人三级做爰电影| 欧美三级亚洲精品| 91av网站免费观看| 久久久久久久久免费视频了| 91成人精品电影| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久精品国产综合久久久| 99精品欧美一区二区三区四区| 91麻豆av在线| 亚洲全国av大片| 久久精品91无色码中文字幕| 国产亚洲精品av在线| 亚洲男人天堂网一区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日韩欧美国产一区二区入口| www.www免费av| 国产精品亚洲美女久久久| 久久久久久国产a免费观看| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久九九热精品免费| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲欧美激情综合另类| 国产午夜福利久久久久久| 男女视频在线观看网站免费 | 欧美日本视频| 亚洲av成人av| 精品久久久久久久久久久久久 | 国产一区二区激情短视频| www.熟女人妻精品国产| 亚洲国产精品999在线| 可以在线观看的亚洲视频| 日本黄色视频三级网站网址| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 日本一本二区三区精品| avwww免费| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩精品中文字幕看吧| av在线天堂中文字幕| 久久 成人 亚洲| 亚洲精品色激情综合| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美在线黄色| 国产视频内射| 脱女人内裤的视频| 国产精品,欧美在线| 99热这里只有精品一区 | 老鸭窝网址在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| av有码第一页| 国产成人av激情在线播放| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 91麻豆av在线| 亚洲真实伦在线观看| 日韩有码中文字幕| 999久久久精品免费观看国产| 欧美在线一区亚洲| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 好男人在线观看高清免费视频 | 精品久久久久久久末码| 又黄又粗又硬又大视频| 午夜福利免费观看在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产久久久一区二区三区| www日本黄色视频网| 在线av久久热| av中文乱码字幕在线| 热99re8久久精品国产| 丝袜在线中文字幕| 一本一本综合久久| av免费在线观看网站| 精品免费久久久久久久清纯| 男男h啪啪无遮挡| 国产一区二区激情短视频| 亚洲人成网站高清观看| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 美女午夜性视频免费| 中出人妻视频一区二区| 亚洲国产精品999在线| 国产日本99.免费观看| 男人舔女人的私密视频| 好男人在线观看高清免费视频 | 这个男人来自地球电影免费观看| 成年版毛片免费区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久香蕉国产精品| 国产激情欧美一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品第一国产精品| 国产一区二区三区视频了| 在线观看免费日韩欧美大片| 在线观看66精品国产| 亚洲精华国产精华精| 黄色成人免费大全| 视频在线观看一区二区三区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 母亲3免费完整高清在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成在线人永久免费视频| 久久午夜亚洲精品久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| 真人一进一出gif抽搐免费| 精品国产亚洲在线| 成人手机av| 亚洲五月色婷婷综合| 18美女黄网站色大片免费观看| 黄色成人免费大全| 18美女黄网站色大片免费观看| 精品不卡国产一区二区三区| 99riav亚洲国产免费| 一区二区三区激情视频| 国产精华一区二区三区| 久久香蕉精品热| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲成人久久性| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 人人澡人人妻人| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人欧美大片| 视频区欧美日本亚洲| 99久久99久久久精品蜜桃| 丝袜美腿诱惑在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲精品中文字幕一二三四区| av电影中文网址| 91av网站免费观看| 岛国在线观看网站| 色精品久久人妻99蜜桃| 一区二区三区激情视频| 国产av又大| 久久精品人妻少妇| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 校园春色视频在线观看| 欧美午夜高清在线| 国产99久久九九免费精品| 国产午夜精品久久久久久| 午夜日韩欧美国产| 制服丝袜大香蕉在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 中国美女看黄片| 色哟哟哟哟哟哟| 无人区码免费观看不卡| 日韩精品青青久久久久久| 久久久国产成人精品二区| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产免费男女视频| 成人亚洲精品一区在线观看| av电影中文网址| 成人午夜高清在线视频 | 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲五月色婷婷综合| 男人操女人黄网站|