抗感敗毒口服液對(duì)靶動(dòng)物雞的安全性試驗(yàn)

馮文麗，劉升，呂鳳霞，劉聯(lián)盟，岳旭龍，郝小倩，舒剛

（1.河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司鄭州 451162；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院成都 611130）

抗感敗毒口服液由黃芩、梔子、板藍(lán)根、連翹、綿馬貫眾和野菊花依據(jù)傳統(tǒng)中獸醫(yī)理論組方而成，黃芩清肺經(jīng)實(shí)火，燥濕涼血；梔子通瀉三焦實(shí)熱，涼血解毒共為主藥；連翹疏風(fēng)散熱，解毒散結(jié)；貫眾清氣分實(shí)熱，涼血止血共為臣藥；板藍(lán)根，野菊花清熱解毒，涼血利咽止痛，共為佐使。全方合用，共奏疏風(fēng)散熱，清熱解毒之效。該制劑具有清熱解毒，用于雞外感發(fā)熱[1]，癥見體溫升高、精神萎靡、羽毛蓬松、呼吸困難伴有咳嗽等。為了評(píng)價(jià)該制劑在臨床使用的安全性及安全劑量范圍，本試驗(yàn)根據(jù)農(nóng)業(yè)部第1596號(hào)公告《獸用中藥、天然藥物臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[2]中靶動(dòng)物安全試驗(yàn)的要求考察抗感敗毒口服液的安全性，旨在為臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)資料。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

80只健康雛雞，體重80±5g，購(gòu)自雅安鳳茗谷禽類養(yǎng)殖專業(yè)合作社。

1.2 受試藥物

抗感敗毒口服液，河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20180601，規(guī)格：每1mL相當(dāng)于原生藥量為1.49g。

1.3 儀器設(shè)備

AU5800全自動(dòng)生化分析儀，購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司；SQP型電子天平，購(gòu)自賽多利斯公司；LEICA RM2025型組織切片機(jī)，購(gòu)自德國(guó)Leica公司。

2 方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥

將80只雞隨機(jī)分為4組，每組20只，分別為抗感敗毒口服液高、中、低劑量組和空白對(duì)照組。其中高劑量組為臨床推薦劑量的5倍量（5.0mL/L·天），中劑量組為臨床推薦劑量的3倍量（3.0mL/L·天），低劑量組為臨床推薦劑量的1倍量（1.0mL/L·天）；飲水給藥，連續(xù)30d；空白對(duì)照組不給藥，自由飲水與采食。

2.2 觀察及檢查指標(biāo)

1）一般臨床觀察：試驗(yàn)期間每天觀察各組試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)、采食量等情況，并記錄死亡情況及其他異常。如果出現(xiàn)死亡，對(duì)死亡試驗(yàn)雞進(jìn)行病理剖檢和組織學(xué)檢查。

2）平均增重：試驗(yàn)前及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)逐只稱重，計(jì)算各組增重情況，以此考察本品對(duì)雞生長(zhǎng)性能的影響。

3）血液學(xué)和血液生化學(xué)檢查：試驗(yàn)結(jié)束后采集試驗(yàn)雞血樣進(jìn)行血常規(guī)檢查，進(jìn)行紅細(xì)胞總數(shù)（RBC）、白細(xì)胞總數(shù)（WBC）、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、血紅蛋白（HGB）等指標(biāo)的測(cè)定。紅細(xì)胞和白細(xì)胞采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定。并進(jìn)行血液生化檢查，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、總膽紅素（TBiL）、血糖（GLU）、尿素（UREA）、肌酐（Crea）指標(biāo)。

4）臟器指數(shù)：試驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)撲殺10只雞，收集心、肝、脾、肺、腎等組織，稱重后計(jì)算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)=器官鮮重（g）/活體重（g）×100%。

5）組織病理檢查：給藥及觀察結(jié)束后，各組隨機(jī)抽取10只雞進(jìn)行剖檢，觀察心、肝、脾、肺、腎等臟器是否出現(xiàn)裸眼病變；如有裸眼病變則做組織石蠟切片，作進(jìn)一步微觀病變鏡檢。

2.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS18.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間數(shù)據(jù)差異性采用單因素方差分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 抗感敗毒口服液對(duì)雛雞臨床表現(xiàn)的影響

試驗(yàn)期間，各給藥試驗(yàn)組與空白對(duì)照組雞精神狀態(tài)均良好，采食飲水正常，糞便沒有發(fā)生明顯異常變化，各組無死亡情況發(fā)生。

3.2 抗感敗毒口服液對(duì)體重的影響

給藥前和給藥后分別稱量各組試驗(yàn)雞體重，根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，高、中、低給藥劑量組與空白對(duì)照組相比，給藥30d后體重增重差異性不顯著（P＞0.05），由此可見，抗感敗毒口服液對(duì)雞生長(zhǎng)性能不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面作用。

表1 抗感敗毒口服液對(duì)雞體重的影響

3.3 抗感敗毒口服液對(duì)血液生理指標(biāo)的影響

不同劑量組及空白對(duì)照組分別在給藥后30d后采血測(cè)定各項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)值，根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)得知，紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、白細(xì)胞（WBC）、淋巴細(xì)胞百分率（Ly）、中性粒細(xì)胞百分率（NEU）、單核細(xì)胞百分率（Mn）與空白對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。這表明，試驗(yàn)后各組雞的各項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)正常，至少5倍劑量的抗感敗毒口服液給藥30d不會(huì)引起雞血液生理指標(biāo)異常。

3.4 抗感敗毒口服液對(duì)雞血液生化指標(biāo)的影響

通過對(duì)試驗(yàn)雞血清生化指標(biāo)測(cè)定，各劑量組與空白對(duì)照組在谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血清總膽紅素（Tbil）、血糖（Glu）等多項(xiàng)指標(biāo)上對(duì)比，均未有顯著性差異（P＞0.05）。這表明，至少5倍劑量的抗感敗毒口服液連續(xù)給藥30d不會(huì)引起雞血液生化指標(biāo)異常。

表2 給藥后血液生理指標(biāo)

表3 給藥后血液生化指標(biāo)

3.5 抗感敗毒口服液對(duì)臟器指數(shù)的影響

給藥后各組雞的臟器指數(shù)變化見表4。從表中可以看出，給藥組雞的心、肝、脾、腎的臟器指數(shù)與空白對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。這表明抗感敗毒口服液對(duì)雞臟器的生長(zhǎng)無明顯影響。

表4 給藥后雞臟器指數(shù)的變化

3.6 抗感敗毒口服液對(duì)雞重要器官病理組織學(xué)的影響

經(jīng)過剖檢，各組雞經(jīng)肉眼觀察內(nèi)臟器官未見明顯病理變化，大小、組織形態(tài)、顏色均未見明顯異常改變。組織病理學(xué)切片檢查表明，高劑量組雞的心、肝、脾和腎均未發(fā)現(xiàn)明顯病理學(xué)變化。心肌纖維致密，相互連結(jié)成網(wǎng)狀；肝臟中央靜脈明顯，肝細(xì)胞以中央靜脈為軸心呈放射狀，有不規(guī)則的竇狀隙；脾臟脾竇和小靜脈結(jié)構(gòu)明顯，淋巴細(xì)胞均勻分布；腎臟組織中腎小管密集，腎小體、遠(yuǎn)曲小管和近曲小管結(jié)構(gòu)完整。表明至少5倍劑量抗感敗毒口服液不會(huì)造成雞實(shí)質(zhì)性器官的病理?yè)p傷，具體見圖1。

圖1 病理組織切片

4 討論

抗感敗毒口服液由黃芩、梔子、板藍(lán)根、連翹、綿馬貫眾和野菊花組方而成，這幾味中藥材均被臨床廣泛應(yīng)用。王永彬等[3]研究表明長(zhǎng)期服用板黃口服液無毒副作用。徐春燕等[4]研究銀翹藍(lán)芩口服液對(duì)靶動(dòng)物雞是安全的。賈興等[5]研究表明長(zhǎng)期服用復(fù)方芩藍(lán)口服液無不良作用。段夢(mèng)迪等[6]對(duì)抗感敗毒口服液對(duì)大鼠的生長(zhǎng)和血液理化指標(biāo)的影響進(jìn)行研究，結(jié)果表明長(zhǎng)期應(yīng)用抗感敗毒口服液對(duì)大鼠生長(zhǎng)和血液理化指標(biāo)無顯著影響，臨床用藥安全。本試驗(yàn)對(duì)投喂抗感敗毒口服液推薦劑量1、3、5倍劑量的受試雞進(jìn)行了安全性研究和評(píng)估。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，使用抗感敗毒口服液推薦劑量1～5倍劑量的受試雞均未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，血液生理和血液生化指標(biāo)等參數(shù)與空白對(duì)照組相比也無顯著差異。病理組織學(xué)觀察顯示，高劑量組心臟、肝臟、腎臟等實(shí)質(zhì)臟器均未出現(xiàn)明顯的病理組織學(xué)變化。由此可以說明，抗感敗毒口服液按推薦劑量（1mL/L）飲水給藥對(duì)靶動(dòng)物雞是安全的。