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    牛傳染性鼻氣管炎的研究進(jìn)展

    2020-11-30 22:49:15王海軍石豐運(yùn)劉勝宇
    中國(guó)動(dòng)物保健 2020年12期
    關(guān)鍵詞:養(yǎng)牛業(yè)病牛陽(yáng)性率

    王海軍,石豐運(yùn),劉勝宇

    (1.徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院江蘇徐州 221006;2.徐州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心江蘇徐州 221003)

    牛傳染性鼻氣管炎(infectious bovine rhinortra cheitis,IBR)是牛傳染性鼻氣管炎病毒(infectious bovine rhinortra cheitis virus,IBRV)引起的一種急性接觸性傳染病,也稱為牛皰疹病毒1型感染(Bovine herp es virus 1,BHV-1)、“牛膿皰性外陰道炎”、“紅鼻病”[1]等。犢牛感染后常導(dǎo)致腦炎,死亡率極高,育肥牛群增重變慢,奶牛產(chǎn)奶量下降甚至停止泌乳,引起極大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將該病列為必須報(bào)告的B類疫病,我國(guó)將其列為二類疫病。該病以嚴(yán)重的上呼吸道癥狀和流產(chǎn)為主要特點(diǎn),如呼吸困難、發(fā)熱、鼻炎、支氣管炎和化膿性子宮炎[3],不同年齡及品種的均可感染。感染途徑主要是直接接觸、交配或人工授精等。IBRV常引起潛伏感染,侵犯宿主三叉神經(jīng)或薦神經(jīng)節(jié),造成其不斷向外界排毒,病牛可終身帶毒,防治困難極大[4]。運(yùn)輸、混群、氣候突變、過(guò)分擁擠等應(yīng)激因素對(duì)本病的傳播流行起著重要的作用[5]。

    1 病毒的分離鑒定

    Madin SH等[6]在1956首次從病牛體內(nèi)分離出IBRV,之后,陸續(xù)有從病牛的眼結(jié)膜、大腦、外陰和流產(chǎn)胎兒等分離到該病毒的報(bào)道。我國(guó)于1980年首次報(bào)道了從新西蘭進(jìn)口的牛中分離到該病毒[7],鄧沛霖等[8]在國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)本地牛感染IBRV。封啟民等[9]首次從冷凍精液中分離到IBRV,說(shuō)明感染病毒的種公牛精液已經(jīng)是潛在的傳染源。此后,不斷有從不同牛體內(nèi)分類到IBRVD的報(bào)道。

    IBRV能在多種原代或傳代細(xì)胞中生長(zhǎng)。我國(guó)于1986年首次引進(jìn)MDBK傳代細(xì)胞分離IBRV[10]。該法是將采集的病料接種到牛腎細(xì)胞(MDBK)上培養(yǎng)3~5d,通過(guò)觀察細(xì)胞病變作用(CPE)作為病毒感染細(xì)胞的一種標(biāo)志,然后利用免疫熒光試驗(yàn)或病毒中和試驗(yàn)進(jìn)一步鑒定。這種方法準(zhǔn)確可靠,但費(fèi)時(shí)、費(fèi)力,不適用于臨床診斷。目前已經(jīng)普遍使用ELISA法、PCR技術(shù)來(lái)鑒定IBRV。

    2 致病機(jī)制

    IBRV編碼的蛋白接近70個(gè),是其入侵宿主細(xì)胞的通道[11],但是并非所有的基因都跟其毒力有關(guān)。TK基因是最早鑒定的IBRV UL區(qū)的非必需基因,其雖然不參與病毒復(fù)制,但影響病毒在神經(jīng)細(xì)胞中的持續(xù)感染,經(jīng)過(guò)切割,可制成TK基因缺失疫苗[12]。gE蛋白可以影響病毒的釋放及其在細(xì)胞之間的傳遞,并通過(guò)破壞IgG降低宿主免疫力[13]。gB、gC、gG蛋白和IBRV的毒害作用有關(guān)[14-16]。gD蛋白在病毒的復(fù)制過(guò)程中可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的體液免疫與細(xì)胞免疫,中和病毒,所以成了亞單位疫苗研制的寵兒[12]。IBRV感染宿主后造成免疫抑制,持續(xù)性感染,或?qū)е缕渌≡w的侵入[17]。

    3 血清抗體檢測(cè)

    自人類首次分離到病毒后,世界各地陸續(xù)有牛感染IBRV的病例報(bào)告,抽檢的血清抗體陽(yáng)性率也非常高。如Wood bin KA等[18]2002—2004年調(diào)查發(fā)現(xiàn)英國(guó)的IBRV陽(yáng)性率達(dá)到了83.2%。我國(guó)周泰沖等[7]較早進(jìn)行了血清抗體檢測(cè),應(yīng)用血清中和試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)IBR陽(yáng)性率超過(guò)50%。進(jìn)入二十一世紀(jì)后,隨著養(yǎng)牛業(yè)的快速發(fā)展,牛只的流動(dòng)愈發(fā)頻繁,國(guó)內(nèi)IBRV感染的情況越來(lái)越嚴(yán)重。如2003年楊春明[19]發(fā)現(xiàn)青海剛察地區(qū)的牛IBRV感染率為30.6%。2008—2009年冷雪等[20]調(diào)查發(fā)現(xiàn)吉林、遼寧、山西等地區(qū)IBR血清抗體陽(yáng)性率分別為35.3%、39.2%、35%。2014—2016年曲萍等[21]采集了9,668份牛血清樣品,群體陽(yáng)性率年均在80%以上。2014年王海軍等[22]在江蘇徐州的牛場(chǎng)采集的270份血清樣品中檢出104份陽(yáng)性血清,平均陽(yáng)性率為38.52%。

    4 診斷方法

    通過(guò)IBR病牛的臨床表現(xiàn)、剖檢病變,結(jié)合流行病學(xué)特征分析,可初步診斷。確診可采用血清學(xué)試驗(yàn)、PCR或核酸探針技術(shù)鑒定病毒。我國(guó)1980年首次通過(guò)IBRV Bartha-Nu/67的血清學(xué)中和試驗(yàn),對(duì)IBR進(jìn)行了診斷[23]。國(guó)際上,病毒中和試驗(yàn)是國(guó)際貿(mào)易指定的試驗(yàn),在國(guó)內(nèi)主要用于評(píng)價(jià)IBR疫苗的免疫效果[24]。血清中和試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等技術(shù)已被廣泛使用,但是產(chǎn)生抗體較慢,在IBRV急性感染或早期感染階段并不適用。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)特異性和靈敏度極高,還可直接檢測(cè)潛伏期的體內(nèi)病毒,已大量推廣使用[25]。

    5 防控策略

    關(guān)于該病的控制,國(guó)外研究起步較早。上世紀(jì)八十年代歐洲啟動(dòng)了IBR的控制規(guī)劃[26]。國(guó)際上,控制IBR的措施不盡相同。嚴(yán)格的檢疫和撲殺是最主要的防控手段,部分國(guó)家則通過(guò)接種疫苗來(lái)控制[27]。目前,丹麥、瑞典、挪威等國(guó)家已宣布其境內(nèi)已經(jīng)消滅了IBRV。

    該病目前缺乏有效的藥物治療,隨著養(yǎng)牛業(yè)的不斷發(fā)展,病毒的擴(kuò)散和疾病的蔓延給健康養(yǎng)殖帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。疫苗的合理使用可以減少牛只感染,或減輕其感染后的癥狀,降低其散毒危險(xiǎn)。然而,我國(guó)很多地區(qū)對(duì)布病、結(jié)核的防控比較重視,也已經(jīng)取得了良好的控制,但是對(duì)IBR的認(rèn)識(shí)還不到位,對(duì)防控該病不夠重視。雖然國(guó)外有些國(guó)家通過(guò)撲殺陽(yáng)性牛及持續(xù)感染牛逐步凈化牛群的做法獲得了成功,但耗資很大,對(duì)于我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)來(lái)講還不實(shí)際。針對(duì)該病的控制,強(qiáng)化檢疫并結(jié)合接種疫苗較為合理。自上世紀(jì)80年代以來(lái),我國(guó)學(xué)者也對(duì)預(yù)防IBR的疫苗進(jìn)行了研究。周泰沖等[7]首次用弱毒疫苗接種黑白花犢牛,免疫后21d中檢測(cè)到了抗體。1988年李崇華等[28]用IBRV的85-Y株制備了甲醛滅活礦物油佐劑疫苗。但是,滅活苗保護(hù)力較差,保護(hù)期短,弱毒苗保存、運(yùn)輸不便,容易導(dǎo)致免疫失敗、散毒、毒力返強(qiáng)等問(wèn)題,免疫后的牛群未必安全[29]。傳統(tǒng)疫苗還存在無(wú)法鑒別血清中抗體是來(lái)源于野毒感染還是疫苗接種。而基因缺失疫苗是利用分子生物學(xué)方法將病原體中一個(gè)或多個(gè)復(fù)制非必需基因部分或完全缺失后制成的重組疫苗。這種疫苗病毒毒力不易返強(qiáng),保持良好的免疫原性且安全性能高。而IBRV的g E基因缺失疫苗安全性高,效果好,且可以鑒別血清抗體的來(lái)源[27]。荷蘭啟動(dòng)撲滅計(jì)劃使用的便是IBRV TK-/g E-雙基因缺失疫苗。定明等[30]用BHV-1TK-/g E-/EGFP+雙缺失突變株進(jìn)行了動(dòng)物試驗(yàn),證明這種疫苗的安全性和保護(hù)力較高。

    6 結(jié)語(yǔ)

    我國(guó)是畜牧業(yè)大國(guó),奶牛和肉牛飼養(yǎng)規(guī)模不斷擴(kuò)大,尤其每年需要從澳大利亞、新西蘭等國(guó)引進(jìn)種牛,國(guó)內(nèi)牛只流動(dòng)愈發(fā)頻繁,減輕檢疫刻不容緩。IBRV感染帶來(lái)的危害不容忽視,加強(qiáng)血清抗體的檢測(cè),掌握當(dāng)?shù)卦摬×餍胁W(xué)特征,撲殺抗體陽(yáng)性牛及持續(xù)性感染牛,逐步凈化牛群結(jié)構(gòu)是保障養(yǎng)牛業(yè)健康、可持續(xù)發(fā)展的必然要求。目前,基因缺失疫苗可能存在基因缺失不徹底,病毒存在毒力反強(qiáng)的危險(xiǎn),或因?yàn)椴僮鞑划?dāng)降低病毒免疫原性,影響疫苗使用價(jià)值等一系列有待進(jìn)一步驗(yàn)證的問(wèn)題。針對(duì)病毒感染的特點(diǎn),需要研制出更加實(shí)用,更加安全、高效的新疫苗,促進(jìn)養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展。

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