不同炮制方法對玉竹成分的影響

周小祝 田強(qiáng) 石坤連

[摘要] 目的 考察不同炮制方法對玉竹成分的影響，為臨床炮制品選用提供依據(jù)。 方法 以醇浸出物量、玉竹多糖、玉竹總皂苷為考察指標(biāo)，對經(jīng)過清蒸、蜜炙、酒蒸之后的3個(gè)批次玉竹炮制品與凈玉竹進(jìn)行比較分析。采用浸出物測定法測定醇浸出物量;采用苯酚-硫酸法測定玉竹多糖含量;采用香草醛-冰醋酸法測定玉竹總皂苷的含量。 結(jié)果 2個(gè)批次蜜炙品醇溶性浸出物與凈玉竹比較升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;1個(gè)批次酒蒸品醇溶性浸出物與凈玉竹比較降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;3個(gè)批次清蒸品多糖含量與凈玉竹比較升高，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.01）;1個(gè)批次蜜炙品多糖含量與凈玉竹比較升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;2個(gè)批次酒蒸品多糖含量與凈玉竹比較下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）;3個(gè)批次清蒸品總皂苷含量與凈玉竹比較升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;3個(gè)批次蜜炙品總皂苷含量與凈玉竹比較升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;1個(gè)批次酒蒸品總皂苷含量與凈玉竹比較升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。結(jié)論 炮制方法對于玉竹成分的影響是復(fù)雜的，玉竹炮制后清蒸可以增加多糖含量，加熱炮制可以增加總皂苷含量，注意炮制與其功效、臨床炮制品的選用關(guān)聯(lián)的關(guān)系。

[關(guān)鍵詞] 玉竹;炮制方法;醇浸出物量;多糖;總皂苷

[中圖分類號(hào)] R283.3? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）03（a）-0019-05

[Abstract] Objective To inspect the effect of different processing methods on the composition of Polygonatum odoratum（Mill.） Druce， and to provide experiment basis for the selecting of clinical processed products. Methods The alcohol extract amount， polysaccharide of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， total saponins of Polygonatum odoratums （Mill.）Druce were used as index. After steaming， honey broiling and wine steaming， three batches of processed products of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce and Polygonatum odoratums（Mill.） Druce were compared and analyzed. The extraction method was used to determine the amount of alcohol extract. Phenol-sulfuric acid method was used to determine the content of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce. Vanillin-glacial acetic acid method was used to determine the content of total saponins. Results The content of alcohol soluble extract of two batches of honey processed products was higher than that of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.05）.The content of alcohol soluble extract in one batch of wine steaming products was lower than that in Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， the difference was statistically significant （P < 0.05）. The content of polysaccharides in three batches of steamed food was higher than that in Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.01）. The content of polysaccharides in one batch of processed honey was higher than that in Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. The content of polysaccharide in the two batches of wine steaming products decreased than that of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. The total saponin content of three batches of steamed products was higher than that of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.05）. The content of total saponins in three batches of honey processed products was higher than that in Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.05）. The content of total saponins in one batch of wine and steam was higher than that of pure bamboo， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The effects of processing methods on the components of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce are complicated. Steaming after processing of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce can increase the content of polysaccharides， and heating processing can increase the content of total saponins.

[Key words] Polygonatum odoratums（Mill.） Druce; Processing method; Alcohol extract amount; Polysaccharide; Total saponins

玉竹系百合科植物玉竹Polygonatum odoratums（Mill.） Druce的干燥根莖。具有養(yǎng)陰潤肺，益胃生津等功效[1-2]。玉竹含有多糖、皂苷等化學(xué)成分。其中玉竹多糖和總皂苷含量最多，多糖含量通常為10%左右，總皂苷含量為3%左右[3-4]。相關(guān)研究顯示，玉竹提取物有保護(hù)心臟、抗衰老等作用[4-8]。

玉竹常用的炮制品有凈玉竹、炙玉竹、蒸玉竹、酒玉竹等[9-11]。凈玉竹的炮制方法，《雷公炮炙論》記載“采得，先用竹刀刮上節(jié)皮了，洗凈”?，F(xiàn)行，取原藥材，除去雜質(zhì)、洗凈、潤透、切厚片、干燥。炙玉竹的炮制方法，《雷公炮炙論》記載“以蜜水浸一宿，蒸了，焙干用?！爆F(xiàn)行，取煉蜜置鍋內(nèi)，加適量開水稀釋后，投入玉竹片，用文火拌炒均勻，不粘手為度，取出放涼。蒸玉竹的炮制方法，《太平圣惠方》記載“刮皮蒸曝干”?，F(xiàn)行，取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，置容器內(nèi)蒸至外黑內(nèi)呈棕褐色，切段，干燥。酒玉竹的炮制方法，《本草備要》記載“竹刀刮去皮節(jié)，蜜水或酒浸蒸用?！爆F(xiàn)行，取凈玉竹片加黃酒拌勻，悶潤，置籠屜內(nèi)蒸透，取出，攤晾。

中藥的炮制與藥物功效和藥物成分關(guān)系密切，本研究結(jié)合傳統(tǒng)炮制工藝和現(xiàn)代炮制工藝，采用清蒸、蜜炙、酒蒸三種炮制方法對玉竹進(jìn)行炮制，得到清蒸玉竹、蜜炙玉竹、酒蒸玉竹炮制品，考察不同炮制工藝對玉竹浸出物、多糖、皂苷類成分的影響情況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器設(shè)備

Agilent UV-8454可見紫外分光光度儀（安捷倫科技有限公司）;eppendorf Centrifuge 5804R離心機(jī)（德國eppendorf公司）;BS-llOS電子天平（萬分之一，德國Sartorius公司）;電子秤（百分之一，上海佑科公司）。

1.2 試藥

葡萄糖（批號(hào)：130529，由廣州市齊云生物科技有限公司提供，純度>99%）;薯蕷皂苷元（批號(hào)：111539-200001，由中國食品藥品檢定研究院提供，純度>98%）;其余苯酚、硫酸、石油醚、三氯甲烷、甲醇、冰醋酸、鹽酸、95%乙醇等均為分析純，水為純凈水。

1.3 藥材

玉竹3個(gè)批次[1606001，產(chǎn)地陜西，購自安國市聚藥堂藥業(yè)有限公司;180602，產(chǎn)地湖南，購自天方?。ㄖ袊┧帢I(yè)有限公司;1606013，產(chǎn)地湖南，購自安國市聚藥堂藥業(yè)有限公司]，經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)中藥鑒定教研室劉傳明教授鑒定均為百合科植物玉竹Polygonatum odoratum （Mill.） Druce的干燥根莖。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。采用t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 方法與結(jié)果

2.1 玉竹的炮制

清蒸玉竹的炮制：分別取3個(gè)批次的凈玉竹各100 g，照蒸制法[12]進(jìn)行炮制。

蜜炙玉竹的炮制：分別取3個(gè)批次的凈玉竹各100 g，照蜜炙法[12]進(jìn)行炮制。

酒炙玉竹的炮制：分別取3個(gè)批次的凈玉竹各100 g，照酒炙法[12]進(jìn)行炮制。

2.2 炮制對玉竹成分的影響

2.2.1 炮制對醇溶性浸出物的影響

照《中華人民共和國藥典》[1]（以下簡稱“《中國藥典》”）2015版一部玉竹項(xiàng)下浸出物測定法要求，按醇溶性浸出物測定法（《中國藥典》[12]2015版四部通則2201）項(xiàng)下的冷浸法測定，用70%乙醇作溶劑，依法測定計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量（%）。重復(fù)試驗(yàn)3次。見表1。

結(jié)果醇溶性浸物均符合藥典規(guī)定。3批清蒸玉竹醇溶性浸出物與凈玉竹比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）;2個(gè)批次蜜炙玉竹醇溶性浸出物高于凈玉竹，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;1個(gè)批次酒蒸玉竹醇溶性浸出物低于凈玉竹，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

2.2.2 炮制對玉竹多糖的影響

照《中國藥典》[1]2015版一部玉竹項(xiàng)下含量測定及文獻(xiàn)[13]中玉竹多糖測定方法分別測定各炮制品中玉竹多糖含量。

2.2.2.1 對照品溶液的制備? 取無水葡萄糖對照品59.80 mg，精密稱定，加水至100 mL，搖勻即得（制成每mL含無水葡萄糖約0.6 mg的溶液）。

2.2.2.2 供試品溶液的制備? 分別取各炮制品粗粉約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水100 mL，加熱回流1 h，用脫脂棉濾過，如上重復(fù)提取1次，兩次濾液合并，濃縮至適量，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備? 精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2.0 mL，置具塞試管中，分別加5%苯酚溶液1 mL，混勻，迅速加入硫酸7.0 mL，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白，照《中國藥典》[12]2015版四部通則0401紫外-可見分光光度法，在488 nm的波長處測定吸光度，以吸光度A值為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y = 11.218X+0.0404，R2 = 0.9981，結(jié)果濃度在0.011 96～0.071 76 g/L之間線性關(guān)系良好。

2.2.2.4 玉竹各炮制品多糖含量測定? 精密量取各供試品溶液2 mL，加乙醇10 mL，攪拌，離心，取沉淀加水溶解，置50 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，照“2.2.2.3”項(xiàng)下的方法，自“加5%苯酚溶液1 mL”起，依法測定吸光度，計(jì)算，重復(fù)試驗(yàn)3次，多糖含量結(jié)果見表2。

3個(gè)批次清蒸玉竹多糖含量與凈玉竹比較，明顯升高，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.01）;1個(gè)批次蜜炙玉竹多糖含量與凈玉竹比較，明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;2個(gè)批次酒蒸玉竹多糖含量與凈玉竹比較，明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表2。

2.2.3 炮制對玉竹總皂苷的影響

參考有關(guān)文獻(xiàn)總皂苷測定方法[14-16]，對各炮制品中玉竹總皂苷含量進(jìn)行測定。

2.2.3.1 對照品溶液的制備? 精確稱取薯蕷皂苷元5.83 mg，用少量甲醇溶解，然后用甲醇定容到50 mL，搖勻即得（制成每mL含薯蕷皂苷元約0.1 mg的溶液）。

2.2.3.2 供試品溶液的制備? 分別取各炮制品粗粉約1 g，精密稱定，罝燒瓶中，加一定量80%乙醇，浸泡30 min，按一定條件（溫度60℃、料液比60、時(shí)間30 min）超聲2次，合并濾液，回收乙醇至干，加入3 mol/L鹽酸溶液25 mL使溶解，定量轉(zhuǎn)移至燒瓶中，加熱回流水解1 h，放冷，用石油醚（60～90℃）萃取5次，每次15 mL，合并石油醚液，水洗至中性，回收石油醚至干，加三氯甲烷適量溶解，定量轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，三氯甲烷定容至刻度，搖勻，得玉竹總皂苷元供試品溶液。

2.2.3.3 檢測波長的選擇? 吸取2 mL對照品溶液和供試品溶液于具塞試管中，揮干溶劑，分別加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻，密塞，置70℃恒溫水浴顯色15 min，取出后立即以冰水冷卻5 min，加冰醋酸10.0 mL，搖勻，在400～600 nm 波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在波長為533 nm處有最大吸收峰。見圖2。

1：樣品紫外吸收圖譜;2：薯蕷皂苷元對照品紫外吸收圖譜

2.2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備? 分別準(zhǔn)確吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL于磨口具塞試管中，水浴揮發(fā)溶劑，按“2.2.3.3”項(xiàng)下方法顯色，于533 nm波長處測定其吸光度。以吸光度A值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立線性回歸方程，結(jié)果為Y = 11.65X-0.1054，R2 = 0.9994。

2.2.3.5 加樣回收試驗(yàn)? 取1606013批次玉竹蜜炙品約1.0 g，精密稱定，加入對照品薯蕷皂苷元約5.163 mg，按“2.2.3.2”項(xiàng)下方法同時(shí)制備供試品溶液，依法測定計(jì)算加樣回收率，重復(fù)試驗(yàn)6次。該方法回收率良好，回收率在90%～108%之間，平均回收率為98.66%，RSD值為2.09%。

2.2.3.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)? 分別在6個(gè)不同日期取1606013玉竹蜜炙品約1.0 g，精密稱定，進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn);取1606013玉竹蜜炙品約1.0 g，精密稱定，重復(fù)測定6次，進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn);同時(shí)取一份1606013玉竹分別在0、20、40、60、80 min測定其吸光度，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“2.2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，結(jié)果精密度RSD值為1.26%，重復(fù)性RSD值為1.84%，儀器精密度、方法重復(fù)性良好;供試品溶液在80 min內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD值為1.23%。

2.2.3.7 總皂苷含量測定? 取各批次玉竹炮制品約1.0 g，精密稱定，按按“2.2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法顯色測定吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總皂苷含量，重復(fù)試驗(yàn)3次。見表3。

3個(gè)批次清蒸玉竹總皂苷含量與凈玉竹比較，均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;3個(gè)批次蜜炙玉竹總皂苷含量與凈玉竹比較，均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;1個(gè)批次酒蒸玉竹總皂苷含量與凈玉竹比較，均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

玉竹炮制對醇溶性浸出物量影響結(jié)果原因可能是加入適量蜜而導(dǎo)致浸出物量有所升高;而酒蒸可能是加入酒后蒸制，包括揮發(fā)性成分等成分隨酒蒸餾而散失[17]。玉竹炮制對玉竹多糖影響可能是蜜炙短時(shí)間加熱對多糖有一定的破壞作用，導(dǎo)致多糖含量有下降趨勢;酒蒸可能是加入酒后蒸制，一方面因酒的作用使多糖過分分解，另一方面可能操作過程中隨酒液流失;而清蒸可能使玉竹苷類成分分解出多糖，使玉竹多糖含量增加[18-19]。玉竹炮制對玉竹總皂苷影響分析原因可能清蒸、蜜炙、酒蒸等加熱炮制方法可以使總皂苷分解或者是從細(xì)胞組織間釋放出來，從而使總皂苷含量增加[20]。

炮制方法對于玉竹成分的影響同時(shí)也是復(fù)雜的，玉竹糖類成分除了多糖，同時(shí)還有大量的簡單糖類成分，而簡單糖類成分跟多糖之間，可能存在相互轉(zhuǎn)化的情況，比如蒸制過度可能導(dǎo)致多糖分解，或者加輔料蒸制，可能加速多糖分解為簡單糖類。因此炮制方法對于玉竹成分的影響可以進(jìn)一步進(jìn)行深入的研究，可以進(jìn)一步研究多糖和簡單糖類，多糖和皂苷之間的相互關(guān)聯(lián)問題。同時(shí)可以聯(lián)系玉竹的功效做進(jìn)一步的研究，炮制方法對于玉竹成分的影響跟其功效相關(guān)，涉及到臨床炮制品的選用。玉竹多糖跟玉竹養(yǎng)陰生精的功效相關(guān)，跟抗衰老、降血糖、抗氧化、增強(qiáng)免疫等有關(guān)，而皂苷跟玉竹潤肺、益胃等功效相關(guān)。在玉竹加工炮制和臨床使用過程中，仍需考慮不同炮制方法對藥材功效的影響，做到更加合理地用藥[21-22]。

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