基于聚類分析及因子分析對(duì)急性腸粘膜損傷大鼠背部敏化區(qū)域Evans Blue滲出強(qiáng)度及規(guī)律的分析＊

林 燊，林 棟＊＊，王芳玲，洪 霖，齊詩儀，莫毓昌

（1. 福建中醫(yī)藥大學(xué)針灸學(xué)院 福州 350122；2. 華僑大學(xué)數(shù)學(xué)科學(xué)學(xué)院 泉州 362021）

穴位即腧穴，亦稱之為“孔穴”“刺激點(diǎn)”，在《內(nèi)經(jīng)》中有“以痛為腧”“以手疾按之，快然乃刺之”的記載，是臟腑-經(jīng)絡(luò)關(guān)系中的重要環(huán)節(jié)之一。穴位是人體生理、病理狀態(tài)呈現(xiàn)于體表皮膚的重要部位，在臨床疾病的診斷和治療過程中，產(chǎn)生敏化現(xiàn)象的穴位具有更為特殊意義[1]。穴位敏化概念自二十世紀(jì)八十年代提出后，正逐步成為穴位研究熱點(diǎn)之一[2,3]。有研究發(fā)現(xiàn)[4]，穴位的功能強(qiáng)弱是隨著機(jī)體功能變化而動(dòng)態(tài)改變，在“沉寂態(tài)”與“激活態(tài)”之間轉(zhuǎn)化[5]。而關(guān)于體表穴位分布規(guī)律的研究，是穴位敏化研究中關(guān)注相對(duì)較少的薄弱環(huán)節(jié)，尚欠缺進(jìn)一步的科學(xué)闡釋[6]。目前,有關(guān)敏化穴位分布規(guī)律的研究已取得初步結(jié)果，有研究通過觀察發(fā)現(xiàn)急性心肌缺血模型大鼠的腹部和四肢幾乎未見Evans Blue 滲出，而在脾、胃俞、心俞的Evans Blue 滲出點(diǎn)較為密集[7]。同時(shí),亦有研究發(fā)現(xiàn)冠心病心絞痛患者體表牽涉痛部位及穴位敏化點(diǎn)的位置分布與脊柱T1～T5 神經(jīng)節(jié)段所支配的皮表區(qū)域相關(guān)[8]。為進(jìn)一步探索與分析體表敏化穴位分布特征及規(guī)律性，本研究擬觀察急性腸粘膜損傷模型大鼠背部Evans Blue 滲出點(diǎn)的分布情況，并通過基于探索性空間統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)的經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法以及多元統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)[9]深入探索穴位敏化分布規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

本實(shí)驗(yàn)采用SPF 級(jí)體重為200～220 g 的雄性SD大鼠，許可證號(hào)：SYXK（閩）2014-005。每籠6只，給予自然照明、自由飲水和攝食。實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫保持恒定。將30 只SD 大鼠按不同芥子油濃度分為5%、7.5%、10%、12.5%、15%濃度，共五組，每組6 只。實(shí)驗(yàn)過程中，嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后過量麻醉處死。

1.2 急性腸粘膜損傷模型制備

造模前動(dòng)物禁食20小時(shí)，不禁水，自由活動(dòng)，室溫保持在（20±1）℃，灌腸前，按摩腹部以刺激排出3-4粒糞便后將大鼠倒置，用18號(hào)直頭灌胃針由肛門進(jìn)入大鼠腸道約8 cm，按實(shí)驗(yàn)分組注入提前用石蠟油稀釋的不同濃度芥子油（5%、7.5%、10%、12.5%、15%）各0.5 ml，注射后保持大鼠倒置姿態(tài)1分鐘，模型制備完畢[9]。

1.3 Evans Blue注射

各組大鼠在腸道灌注芥子油造模后4 小時(shí)注射10%的水合氯醛注射（4 ml/kg）麻醉，先用電動(dòng)剃毛器除去大鼠背部的被毛，再用脫毛劑去除殘留的被毛，操作應(yīng)盡量避免皮膚損傷造成假陽性點(diǎn)滲出。隨后尾靜脈注射Evans Blue（5 mg/100 g，50 mg/ml溶于生理鹽水中），觀察大鼠背部Evans Blue滲出點(diǎn)，其以隱于皮下的淡藍(lán)色滲出點(diǎn)為準(zhǔn)，而在表皮顏色鮮艷的滲出點(diǎn)大多是由于實(shí)驗(yàn)過程中的體表皮膚損傷導(dǎo)致。研究者分別在造模完成后5小時(shí)、10小時(shí)、15小時(shí)、20小時(shí)、25小時(shí)五個(gè)時(shí)間點(diǎn)拍照記錄大鼠背部的EB滲出情況[9]。

1.4 經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法

1.4.1 動(dòng)物定標(biāo)

在鼠臺(tái)上標(biāo)定鼻尖、耳根、尾根的位置，將大鼠按標(biāo)定位置俯臥固定在鼠臺(tái)上，采用三維支架標(biāo)定拍攝高度為38 cm，于造模后五個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行拍照。

1.4.2 建立經(jīng)緯網(wǎng)格坐標(biāo)系

本研究以大鼠第一胸椎為原點(diǎn)建立平面直角坐標(biāo)系，在坐標(biāo)系內(nèi)構(gòu)建5 mm×5 mm 的經(jīng)緯網(wǎng)格（項(xiàng)目組前期研究發(fā)現(xiàn)大鼠各棘突間距大約為5 mm）[9]。坐標(biāo)系中X 軸由原點(diǎn)向左依次設(shè)為11、12、……、16，向右設(shè)為1、2、……、6；Y 軸由原點(diǎn)向下依次設(shè)為A、B、C、D、……、U、V，將大鼠背部區(qū)域分為 264 個(gè)網(wǎng)格（A1、……、A6、A11、……、A16、……、V15、V16）[9]（見圖1）。

1.4.3 計(jì)數(shù)

圖1 建立大鼠經(jīng)緯網(wǎng)格定標(biāo)圖

將5 mm×5 mm 經(jīng)緯網(wǎng)格以A1……A6、A11……A16……V15、V16 命名。完整在一個(gè)方格內(nèi)的隱于皮膚之下的Evans Blue滲出點(diǎn)計(jì)數(shù)為1，參考程斌等研究報(bào)道[10]。若Evans Blue 滲出點(diǎn)顏色鮮艷則是假陽性點(diǎn)，由于實(shí)驗(yàn)過程中大鼠皮膚損傷所致，不納入統(tǒng)計(jì)；若Evans Blue 滲出點(diǎn)在經(jīng)緯網(wǎng)格相鄰處，跨越兩個(gè)或多個(gè)格子，以記上不記下，記右不記左為原則，對(duì)各網(wǎng)格區(qū)域內(nèi)點(diǎn)的統(tǒng)計(jì)（見圖2）[9]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

1.5.1 方法一

本研究通過聚類分析中的R 型聚類法（指標(biāo)聚類）獲得與EB 滲出強(qiáng)度相關(guān)的“特征網(wǎng)格”，并對(duì)該“特征網(wǎng)格”的滲出強(qiáng)度與病情、病程的相關(guān)性開展輪廓分析[11]。其中，R 型聚類法主要通過經(jīng)緯網(wǎng)格構(gòu)建獲得網(wǎng)格坐標(biāo)及EB 滲出點(diǎn)個(gè)數(shù)，并將數(shù)據(jù)錄入SPSS后，根據(jù)聚類級(jí)別得到有意義網(wǎng)格坐標(biāo)后，還原到大鼠背部網(wǎng)格坐標(biāo)中。而輪廓分析的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)兩組或多組變量均數(shù)向量的輪廓開展分析[12]。本研究針對(duì)聚類分析中獲得的“特征網(wǎng)格”開展隨濃度和時(shí)間分布的平行輪廓、重合輪廓、水平輪廓檢驗(yàn)，檢驗(yàn)觀察指標(biāo)的變化趨勢(shì)是否相同、均數(shù)是否相等、是否呈線性相關(guān)。

1.5.2 方法二

針對(duì)不同時(shí)間及不同濃度的EB 滲出強(qiáng)度，逐一開展因子分析，從而獲得在不同時(shí)間及濃度參數(shù)下的EB 滲出強(qiáng)度相關(guān)“特征區(qū)域”。再對(duì)其開展后繼的輪廓分析驗(yàn)證，進(jìn)一步判定其滲出“特征區(qū)域”的變化趨勢(shì)[11]。

圖2 Evans Blue滲出計(jì)數(shù)點(diǎn)

本研究的因子分析及主成分分析的意義，在于進(jìn)一步開展對(duì)敏化位置體表滲出強(qiáng)度的區(qū)域分析，相較于聚類分析的單網(wǎng)格特征，因子分析及主成分分析具有強(qiáng)大的空間分辨能力。因子分析法選取累計(jì)貢獻(xiàn)率大于60%的主成分?jǐn)?shù)為因子數(shù)，同時(shí)其特征根值必須大于1，并通過旋轉(zhuǎn)變換，尋找最佳公因子。因子分析經(jīng)多次旋轉(zhuǎn)迭代產(chǎn)生的一個(gè)以網(wǎng)格為計(jì)數(shù)單位的因子，形成不同的因子1、因子2、因子3 等，每個(gè)因子內(nèi)皆有若干個(gè)網(wǎng)絡(luò)坐標(biāo)，根據(jù)可提取因子數(shù)中的相關(guān)網(wǎng)格坐標(biāo)組成特征區(qū)域，并且還原到經(jīng)緯網(wǎng)格中分析其分布規(guī)律與特征，繼而同樣采用輪廓分析的方法對(duì)上述“特征區(qū)域”開展與病情及病程相關(guān)的趨勢(shì)分析。

2 結(jié)果

2.1 造模情況

造模后，部分大鼠排膿血便且肉眼可見，部分大鼠造模后自主收縮下肢、舔舐下肢或臀部，部分大鼠出現(xiàn)萎靡倦怠、毛發(fā)戰(zhàn)栗、對(duì)外界反應(yīng)觸碰反應(yīng)強(qiáng)烈、肛門周圍紅腫，部分大鼠眼睛、鼻子等部位出血。這說明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性腸粘膜損傷造模成功，在造模后25小時(shí)內(nèi)5%、7.5%、10%、12.5%、15%芥子油大鼠均存活。

2.2 體表EB滲出點(diǎn)聚類分析結(jié)果

根據(jù)大鼠背部各個(gè)網(wǎng)格所采集的有效Evans Blue滲出點(diǎn)數(shù)量輸入SPSS數(shù)據(jù)視圖，對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行R型聚類，得到樹狀分布圖（見圖3）。

圖3 聚類分析結(jié)果樹狀分布圖

根據(jù)聚類分析結(jié)果，選取圖3 全因素聚類分析中最具有特征意義的前4“類”，即如圖4 所示的四個(gè)“特征網(wǎng)格”，說明這四個(gè)點(diǎn)的滲出行為在不同時(shí)間及不同濃度的組別中具有較強(qiáng)的特征性。

將其中的網(wǎng)格坐標(biāo)還原至大鼠背部經(jīng)緯網(wǎng)格坐標(biāo)圖，可以看出在不同濃度不同時(shí)間觀察的EB 滲出強(qiáng)度，主要分布于急性腸粘膜損傷大鼠胸腰段的脊柱兩側(cè)（見圖4）。

2.3 “特征網(wǎng)格”的輪廓分析結(jié)果

通過運(yùn)用輪廓分析驗(yàn)證聚類分析所得四個(gè)“特征網(wǎng)格”（S1、N1、O14、L11）隨濃度或時(shí)間變化而存在的趨勢(shì)，其結(jié)果如圖5所示。

上述結(jié)果表明，在不同濃度下“特征網(wǎng)格”的EB滲出行為與時(shí)間變化的平行輪廓檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，說明在不同濃度芥子油下，“特征網(wǎng)格（4 個(gè)）”的Evans Blue 滲出行為未呈現(xiàn)時(shí)間變化趨勢(shì)；重合輪廓檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，說明“特征網(wǎng)格”在不同時(shí)間點(diǎn)的滲出程度相同，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖4 全因素R型聚類結(jié)果與特征網(wǎng)格分布

圖5 “特征網(wǎng)格”在各時(shí)間點(diǎn)上不同濃度芥子油模型大鼠的EB滲出強(qiáng)度輪廓分析

在不同時(shí)間點(diǎn)“特征網(wǎng)格（4 個(gè)）”的Evans Blue 滲出行為隨濃度變化的平行輪廓檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，說明各時(shí)間點(diǎn)的“特征網(wǎng)格”的滲出行為未呈現(xiàn)隨濃度變化趨勢(shì)；重合輪廓檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，說明“特征網(wǎng)格”在不同濃度下的滲出程度相同，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，如圖6所示。

2.4 體表EB滲出強(qiáng)度的因子分析結(jié)果

因子分析在不同濃度、不同時(shí)間結(jié)果中存在的“特征區(qū)域”見表1，其“特征區(qū)域”還原結(jié)果如圖8、圖9。

通過網(wǎng)格坐標(biāo)還原可發(fā)現(xiàn)因子1中各坐標(biāo)分布具有集中趨勢(shì)，而因子2 及因子3 的集中趨勢(shì)減弱呈分散狀（如圖7所示）?？紤]到若干相鄰網(wǎng)格集合成的區(qū)域且范圍不宜太大，所包含有效指標(biāo)約在3-5 個(gè)之間（如表1）。研究發(fā)現(xiàn)，所謂有意義因子所組成的“特征區(qū)域”，即如因子1 中網(wǎng)格坐標(biāo)有著有比較典型的“組點(diǎn)成區(qū)”的趨勢(shì)，而該趨勢(shì)在因子2 與因子3 中則不存在。

按上述方法，在不同濃度、不同時(shí)間點(diǎn)下的“特征區(qū)域”結(jié)果如圖8、圖9所示。

2.5 “特征區(qū)域”的輪廓分析結(jié)果

通過輪廓分析驗(yàn)證因子分析結(jié)果所得“特征區(qū)域”隨濃度或時(shí)間變化的趨勢(shì)，其結(jié)果如圖10、圖11所示。

上述結(jié)果表明，不同濃度下Evans Blue 滲出特征區(qū)域在不同時(shí)間中的變化規(guī)律：平行輪廓檢驗(yàn)（P＞0.05），表明特征區(qū)域EB 滲出行為具有隨時(shí)間變化的趨勢(shì)；重合輪廓檢驗(yàn)（P＞0.05），表明特征區(qū)域隨時(shí)間變化的EB滲出程度相同，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

上述結(jié)果表明，各時(shí)間點(diǎn)EB 滲出特征區(qū)域在不同濃度下的變化規(guī)律：平行輪廓檢驗(yàn)（P＞0.05），表明不同濃度下的差值都在一個(gè)固定范圍內(nèi)，即特征區(qū)域EB 滲出行為具有隨濃度變化的趨勢(shì)；重合輪廓檢驗(yàn)（P＜0.05），表明不同濃度下的評(píng)分均值不相等，即特征區(qū)域EB 滲出程度隨濃度變化不相同，其結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖6 “特征網(wǎng)格”在不同濃度芥子油模型大鼠中各時(shí)間點(diǎn)的EB滲出強(qiáng)度輪廓分析

圖7 5%濃度的滲出區(qū)域特征分析

表1 因子分析后不同濃度及不同時(shí)間下的“特征區(qū)域”

圖8 因子分析后不同芥子油濃度下特征區(qū)域分布范圍

圖9 因子分析后不同時(shí)間點(diǎn)上特征區(qū)域分布范圍

圖10 特征區(qū)域在不同時(shí)間點(diǎn)中各濃度芥子油模型大鼠的EB滲出強(qiáng)度輪廓分析

圖11 “特征區(qū)域”在不同濃度芥子油模型大鼠中各時(shí)間點(diǎn)的EB滲出強(qiáng)度輪廓分析

3 討論

3.1 基于經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法的EB 滲出強(qiáng)度體表分布規(guī)律研究

現(xiàn)階段對(duì)于病理狀態(tài)下敏化穴位動(dòng)態(tài)性分布的研究主要有兩方面[7,10,13-15]：一方面是按照不同脊柱神經(jīng)節(jié)段分布，觀察疾病模型動(dòng)物體表Evans Blue 滲出點(diǎn)所處神經(jīng)節(jié)段與該節(jié)段內(nèi)Evans Blue 滲出數(shù)量，說明當(dāng)臟腑發(fā)生病變，其相應(yīng)神經(jīng)節(jié)段所支配的皮膚區(qū)域出現(xiàn)Evans Blue 滲出點(diǎn)。另一方面是按照傳統(tǒng)腧穴分布，觀察疾病模型動(dòng)物背部與四肢區(qū)域Evans Blue滲出點(diǎn)，并通過公式“在穴位處出現(xiàn)EB 滲出點(diǎn)的動(dòng)物只數(shù)/模型組的動(dòng)物只數(shù)×100%”得出Evans Blue 滲出在穴位處分布的比例，進(jìn)而判斷臟腑疾病與傳統(tǒng)腧穴之間的相關(guān)性。然而，現(xiàn)階段關(guān)于穴位敏化的研究尚不能表明具有動(dòng)態(tài)性的敏化穴位[16,17]，雖然已有研究涉及神經(jīng)生物學(xué)效應(yīng)，而對(duì)于體表分布特征的腧穴表述方面研究仍相對(duì)欠缺[18,19]。

本研究采用經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)急性腸粘膜損傷大鼠背部Evans Blue 滲出情況，并結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析開展研究。本研究中所使用的經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法是基于現(xiàn)代計(jì)量地理學(xué)中的空間統(tǒng)計(jì)分析思路,即空間數(shù)據(jù)（spatial data）統(tǒng)計(jì)分析方法[20]。通過繪圖軟件建立一個(gè)以大鼠背部第一胸椎為原點(diǎn)的平面坐標(biāo)系，并賦予每個(gè)網(wǎng)格相應(yīng)的坐標(biāo)名稱（如A1、A2），將每一個(gè)網(wǎng)格作為一個(gè)計(jì)數(shù)單位。通過經(jīng)緯網(wǎng)格坐標(biāo)在大鼠背部Evans Blue 滲出點(diǎn)與大鼠背部體表位置之間構(gòu)建了可以判斷參照分析的二維平面坐標(biāo)系。本實(shí)驗(yàn)基于坐標(biāo)體系對(duì)模型大鼠Evans Blue 滲出點(diǎn)分布特征進(jìn)行提煉分析，觀察各個(gè)經(jīng)緯網(wǎng)格內(nèi)Evans Blue 滲出點(diǎn)個(gè)數(shù)（即滲出強(qiáng)度），運(yùn)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)滲出強(qiáng)度并展開多元統(tǒng)計(jì)分析。

(1)基坑的周圍具有一個(gè)邊界效應(yīng),即在基坑外的濕陷量量會(huì)迅速的減小，而基坑內(nèi)部中心點(diǎn)沉降量最大，其沉降量沿半徑方向較為均勻的減小。

3.2 經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法與穴位敏化的“區(qū)域性”特征

本研究通過不同濃度、不同時(shí)間下的EB 滲出點(diǎn)聚類分析獲得特征網(wǎng)格，再通過輪廓分析驗(yàn)證各特征網(wǎng)格隨濃度或時(shí)間變化的趨勢(shì)，其結(jié)果無明顯特異性，說明單一個(gè)體的“特征網(wǎng)格”無顯著的隨疾病病情及病程變化趨勢(shì)。本研究發(fā)現(xiàn)通過聚類分析所得結(jié)果僅僅提示穴位敏化可能存在一定趨勢(shì)性，而通過觀察大鼠背部的EB 滲出點(diǎn)分布發(fā)現(xiàn)，不僅單個(gè)網(wǎng)格（5 mm×5 mm）存在是有意義的，相鄰的若干網(wǎng)格組合也可能是敏化陽性區(qū)域的分布（面積大于5 mm×5 mm 的多網(wǎng)格組合），即穴區(qū)。因此，本研究采用因子分析手段對(duì)前期獲得的數(shù)據(jù)，進(jìn)一步開展了“群”或“類”的統(tǒng)計(jì)探究，根據(jù)結(jié)果匯總因子貢獻(xiàn)度及因子系數(shù)的差異進(jìn)行篩選并組成網(wǎng)格“集合”。與單網(wǎng)格點(diǎn)的聚類分析相比，因子分析得到的公因子所表現(xiàn)出滲出行為特點(diǎn)差異顯得更為顯著。因此，區(qū)域性變量將由獨(dú)立的單個(gè)網(wǎng)格組成“集合”，更能突出其滲出行為的特點(diǎn)和規(guī)律性，并且Evans Blue 滲出數(shù)量隨著病情變化而發(fā)生動(dòng)態(tài)改變，上述研究揭示了敏化穴位分布的動(dòng)態(tài)性過程，有助于判斷滲出行為與臟腑疾病的相關(guān)性[9]。

通過多元統(tǒng)計(jì)分析表明，“特征區(qū)域”存在與濃度相關(guān)的變化規(guī)律特征，即與疾病病情相關(guān)。而區(qū)域性變量（集中、范圍較大）較之單坐標(biāo)變量（單個(gè)網(wǎng)格）似乎更能體現(xiàn)規(guī)律性的滲出特征，盡管現(xiàn)階段的研究結(jié)果仍不足以體現(xiàn)其與病程、病情相關(guān)的規(guī)律性，但已能從某些區(qū)域的分布行為中發(fā)現(xiàn)一絲端倪。

3.3 敏化區(qū)域與病情的相關(guān)性

現(xiàn)今關(guān)于穴位敏化的研究大多關(guān)注疾病過程中的某一階段，而對(duì)于隨病情及病程變化的疾病動(dòng)態(tài)性研究關(guān)注較少。敏化穴位的發(fā)生不僅與疾病共同存在，而且是疾病變化特征（病情、病程）的主要表現(xiàn)形式之一。有研究者認(rèn)為敏化穴位的分布規(guī)律不僅與疾病病程（時(shí)間）相關(guān)[21]，還與病情（程度）相關(guān)[22]。亦有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在不同病理狀態(tài)下穴位敏化都能表現(xiàn)出與病情相關(guān)的變化關(guān)系，并且在疾病過程的不同階段所呈現(xiàn)的特點(diǎn)有所差異[22]。陳日新等[23]對(duì)臨床多種常見疾病的熱敏灸治療發(fā)現(xiàn)，局部腧穴的熱敏發(fā)生率會(huì)隨著疾病的痊愈而下降。程斌等[10]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)急性胃粘膜損傷相關(guān)的體表EB 滲出點(diǎn)與內(nèi)臟神經(jīng)節(jié)段分布高度相關(guān)，并且EB滲出呈現(xiàn)與疾病病情相關(guān)。

通過還原經(jīng)緯網(wǎng)格坐標(biāo)所獲得“特征區(qū)域”，可能是急性腸粘膜損傷有關(guān)的敏化穴位分布區(qū)域，本研究接著通過輪廓分析進(jìn)一步分析“特征區(qū)域”是否存在隨濃度或時(shí)間變化而變化的趨勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)，“特征區(qū)域”在不同時(shí)間點(diǎn)存在隨濃度變化的趨勢(shì)，且變化程度不相同，而在不同濃度下隨時(shí)間變化的趨勢(shì)及變化程度尚不顯著。結(jié)果表明，芥子油濃度為7.5%時(shí)EB 滲出強(qiáng)度在各時(shí)間點(diǎn)均可達(dá)到峰值。其后隨著芥子油濃度增加，Evans Blue 滲出強(qiáng)度回落并呈現(xiàn)較平穩(wěn)變化趨勢(shì)。因此，盡管敏化穴位可隨病情變化而發(fā)生改變，即在疾病的不同階段或狀態(tài)下所呈現(xiàn)出不同的敏化狀態(tài)，但是其敏化進(jìn)程隨疾病狀態(tài)而存在一個(gè)臨界值（峰值），達(dá)到峰值后即使病情繼續(xù)加重，其敏化進(jìn)程也未見顯著性變化。

3.4 敏化“特征區(qū)域”與穴位分布相關(guān)性

腧穴是人體在生理或病理狀態(tài)下能與相應(yīng)臟腑結(jié)構(gòu)發(fā)生交互并發(fā)揮個(gè)性和/或共性效應(yīng)的體表區(qū)域[24]。本研究結(jié)果表明，急性腸粘膜損傷后大鼠背部EB 滲出點(diǎn)主要集中在大鼠胸段和腰段脊柱兩側(cè)（圖12 中紅色散點(diǎn)），與大鼠腧穴分布（圖12 中藍(lán)色陰影）具有一定相關(guān)性。通過多元統(tǒng)計(jì)分析所得特征區(qū)域主要集中分布于大鼠背部T10～T12段與L1～L2段脊柱兩側(cè)，其次在上背部T3、T4 段脊柱右側(cè)有分布趨勢(shì)（如圖12），其特征區(qū)域分布與大鼠體表穴位[26,27]中的肺俞、脾俞、腎俞定位相近。

4 總結(jié)

圖12 急性腸粘膜損傷大鼠背部“特征區(qū)域”集中分布與常規(guī)大鼠穴位比較

本研究通過構(gòu)建基于經(jīng)緯網(wǎng)格計(jì)數(shù)法的大鼠體表定位體系，采用聚類分析及因子分析的研究方法對(duì)以網(wǎng)格為最小計(jì)數(shù)單位的體表區(qū)域展開多元統(tǒng)計(jì)分析，從而提取及分析體表EB 滲出點(diǎn)的數(shù)學(xué)分布特征。今后本研究團(tuán)隊(duì)將進(jìn)一步開展與數(shù)學(xué)計(jì)算機(jī)學(xué)院的多學(xué)科交流合作，逐步引入Spatial Data 統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)，開展基于多值預(yù)測(cè)的體表穴位敏化分布規(guī)律研究。