盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材馬錢苷的定性與定量分析

譚翔勻 周和 王世俊

【摘 要】 目的：建立盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材馬錢苷的定性與定量檢測方法，并制定質量標準。方法：采用薄層色譜法，以忍冬藤對照藥材、馬錢苷為參照，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上層溶液為展開劑，建立其定性鑒別方法;采用高效液相色譜法，以馬錢苷為對照，WatersT3 C18（4.6mm×250mm，5μm）為色譜柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液（13∶[KG-*3/5]87）為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長為235nm，柱溫25 ℃，測定盆炎凈膠囊中馬錢苷的含量。結果：TLC法斑點清晰，分離效果好;馬錢苷在3.66～32.90μg/mL范圍內呈良好的線性關系，r=0.9998;平均回收率為100.08%、RSD為0.22%。結論：本法簡捷、快速、可行、重復性好，可作為盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材馬錢苷的質量控制提供依據(jù)。

【關鍵詞】 盆炎凈膠囊;馬錢苷;TLC;HPLC;定量與定性

【中圖分類號】R284.2 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2020）3-0041-03

Abstract：Objective To establish a qualitative and quantitative analysis of loganin from Caulis Loniceraein Penyanjing capsule，and establish quality Standards.Methods A TLC method was used as the qualitative identification of Penyanjing capsule by using Honeysuckle rattan control medicine and loganin as reference，and the upper solution of ethyl acetate-acetic acid-water（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5））as developing solvents.An HPLC method was used，Loganin was used as reference;Waters T3C18（4.6mm×250mm，5μm） as analytical column and acetonitrile-0.5% acetic acid solution as mobile phaseat theflow rate of 1.0 ml/min ; Detecting wavelength was set at 235nm. The temperature of column was at 25℃.Restults The spots were well separated clear by the TLC method.Loganin was linear in the range of 3.66～32.90μg/mL，r=0.9998. The average recoveries of Loganin was 100.08% with the RSD of 0.22%.Conclusion The simple，fast，feasible and reproducible method can be a basis of quality control of loganin from Caulis Loniceraein Penyanjing capsule.

Keywords：Pen Yan Jing Capsule;Loganin;TLC;HPLC;Quality and Quantity

盆炎凈膠囊由忍冬藤、蒲公英、狗脊、赤芍、車前草等八味中藥材組成[1-2]，具有清熱利濕、和血通絡、調經(jīng)止帶之功效，用于濕熱下注、白帶過多等癥狀[2]。作為中藥復方制劑具有藥味較多，現(xiàn)有標準對忍冬藤藥材只做忍冬藤對照藥材定性鑒別。因此，筆者對忍冬藤藥材中馬錢苷成分進行定性與定量分析研究，并進行方法學考察，建立質量標準，可作為盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材質量內控標準。

1 儀器與材料

1.1 儀器 美國Agilent LC-1260高效液相色譜議（包括四元泵，二極管矩陣檢測器，柱溫箱，自動進樣器，Agilent工作站和處理軟件），WatersT3 C18（250mm×4.6mm，5μm）柱;AB204-S型梅特勒電子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料 忍冬藤對照藥材、馬錢苷對照品（批號：111640-201808） 購于中國食品藥品檢定研究院，乙睛為色譜純，水為娃娃哈純凈水，其他試劑均為分析純，3批盆炎凈膠囊（批號：170401、170402、170403）遵義華衛(wèi)制藥提供，陰性樣品自制。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別[3-4] 取本品粉末約2.0g，加乙醇15mL，超聲40min，濾過，濾液濃縮近1mL，作為供試品溶液。另取忍冬藤對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取馬錢苷對照品，加乙醇制成每1mL含0.3mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，吸取上述三種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。結果表明，分離度好，斑點顯色清晰，而陰性無干擾。如圖1所示。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[5-9] WatersT3 C18（4.6mm×250mm，5μm）為色譜柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液（13∶[KG-*3/5]87）為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長為235nm，柱溫25 ℃。進樣量10μL，相連兩峰分離度為達4.4，理論塔板數(shù)按馬錢苷計，應不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷照品適量，加甲醇溶解制成馬錢苷18.28μg/mL對照品溶液，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取內容物約2.0g（批號：170401），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25mL，超聲處理50min，取出，放冷，用甲醇補足重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性溶液制備 取缺忍冬藤藥材處方下自制陰性樣品，按“2.2.3”項下供試品溶液制備方法制備成陰性對照溶液。精密吸取10μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件下測定，結果表明陰性對照的色譜圖在馬錢苷相應的保留時間無干擾峰，詳見色譜圖2、圖3、圖4。

2.2.5 線性關系的考察 精密吸取對照品混合溶液2、6、10、14、18μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以馬錢苷濃度（μg）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，回歸方程為：Y=26.864X+0.9979，R=0.9998，在3.66～32.90mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，連續(xù)測定6次，記錄峰面積，結果馬錢苷峰面積的RSD為0.16%，結果表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 分別吸?。ㄅ枺?70401）同一供試品溶液于0、2、4、8、12h精密吸（批號：170401）樣品制備的供試品溶液10μL進樣，測得峰面積，RSD均值為1.10%，表明在12h內穩(wěn)定。

2.2.8 重復性試驗 取同一批樣品（批號：170401）6份，[JP]精密稱定，按照“2.2.3”項下方法制備成供試品溶液。測定峰面積，計算馬錢苷平均含量為350.27μg/g，RSD為1.16%，結果表明重復性好。

2.2.9 加樣回收試驗 取已知含量（含馬錢苷350.27μg/g）的樣品6份，每份約1.0g，精密稱定，精密馬錢苷對照品適量，按“2.2.3”項下的方法操作，計算回收率，馬錢苷平均回收率為100.08%，RSD為0.22%，詳見表1。

2.2.10 含量測定 3批樣品結果詳見表2。

3 討論

通過盆炎凈膠囊中忍冬藤的研究，筆者增加忍冬藤藥材中馬錢苷作為對照，進行定性與定量分析。在TLC中以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上層溶液為展開劑，展開效果好，與各斑點均能有效分離，斑點顯色清晰，且陰性無干擾;采用HPLC法測定處方中忍冬藤藥材有效成分馬錢苷，供試品色譜中，在與對照品色譜相應保留時間陰性無干擾。

對甲醇-水、甲醇-醋酸溶液、乙睛—水、乙睛-醋酸溶液4個系統(tǒng)的流動相考察結果表明，乙睛-0.5%醋酸溶液梯度洗脫效果最好。同時采用DAD檢測器進行紫外區(qū)全波長掃描，在2235nm、325nm波長下有最大吸收，根據(jù)所測目標峰在235nm波長下檢測，分離好，峰面積較大，因此選擇235nm為本實驗的檢測波長。

綜上所述，TLC法以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上層溶液為展開劑，各斑點能有效的分離，斑點顯色清晰，陰性無干擾;HPLC法測定處方中有效成分馬錢苷的含量，以乙睛-0.5%醋酸溶液（13∶[KG-*3/5]87）為流動相，其馬錢苷分離效果好，干擾成分少，基線平穩(wěn);樣品處理簡單，分析速度快，數(shù)據(jù)準確，結果可靠，可作為盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材質量內控提供依據(jù)。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：193.

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局標準.盆炎凈膠囊標準YBZ07682006[S].2006

[3]馮華，石尚友，羅秀瓊，等，苗藥復方胃痛膠囊中吳茱萸的定性與定量分析[J].甘肅中醫(yī)藥大學學報，2017，33（4）：30-33.

[4]馮華，石尚友，羅秀瓊，等，黔產大菟絲子中綠原酸的定性與定量分析[J].中國民族民間醫(yī)藥，2017，26（5）：14-16.

[5]袁志鷹，楊巖濤，李榮東，等.HPLC同時測定盆炎凈膠囊中3種有效成分含量[J].中國中醫(yī)藥信心雜志，2017，24（5）：82-85.

[6]湛文青，李虹.HPLC法測定盆炎凈膠囊中綠原酸含量[J].廣東藥學，2004，14（1）：11-13.

[7]徐英輝，申茹，郭玉巖.忍冬藤膠囊的制備及其質量標準[J].中成藥，2019，41（8）：1790-1794.

[8]甄亞欽，馮玉，田偉，等.忍冬不同部位 UPLC 指紋圖譜及化學模式識別研究[J].中草藥，2019，50（18）：4449-4454.

[9]路俊仙，呂凌，張才波.忍冬4個藥用部位中11種化學成分的含量測定[J].中藥材，2019，42（5）：1085-1089.