TGF-β1表達(dá)與舌鱗癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究

劉金剛 劉本艷 游云華

[摘要] 目的 觀察轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor-beta 1，TGF-β1）在舌不典型增生及舌鱗癌的表達(dá)情況，探討其與舌鱗癌臨床病理的關(guān)系。 方法 收集2010～2015年病理科保存的20例正常舌黏膜、20例舌不典型增生、35例舌鱗癌病例，應(yīng)用S-P免疫組織化學(xué)法檢測TGF-β1表達(dá)情況，對其表達(dá)水平結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果 TGF-β1表達(dá)在正常舌黏膜組，非典型性增生組和舌鱗癌組表達(dá)有差異（P<0.05）。TGF-β1陽性表達(dá)率與舌癌的TNM分期呈正相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），TGF-β1在5年內(nèi)有復(fù)發(fā)組表達(dá)率高（P<0.05）。 結(jié)論 TGF-β1在非典型增生組和舌鱗癌組，在有轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和術(shù)后5年復(fù)發(fā)的舌鱗癌組陽性率表達(dá)高，TGF-β1的檢測可能有助于判斷舌癌的發(fā)生發(fā)展。

[關(guān)鍵詞] 舌鱗癌;舌白斑;轉(zhuǎn)化生長因子β1;免疫組化

[中圖分類號] R737.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）04-0012-03

Correlation between TGF-β1 expression and development of tongue squamous cell carcinoma

LIU Jingang1? ?LIU Benyan1? ?YOU Yunhua2

1.Department of Stomatology， Zhuhai People's Hospital， Zhuhai? ?519000， China; 2.Department of Stomatology， the Fifth Affiliated Hospital Sun Yat-Sen University， Zhuhai? ?519000， China

[Abstract] Objective To observe the expression of transforming growth factor-β1（TGF-β1） in tongue dysplasia and tongue squamous cell carcinoma. To explore its clinical and pathological correlation with tongue squamous cell carcinoma. Methods Twenty specimens of normal tongue mucosa， twenty specimens of tongue atypical hyperplasia and thirty-five specimens of tongue squamous cell carcinoma were collected from specimens that were stored in the Department of Pathology from 2010 to 2015. The expression of TGF-β1 was detected by S-P immunohistochemistry. The TGF-β1 expression level was analyzed using statistical analysis， in combination of clinical pathological data. Results TGF-β1 expression was found to be different in specimens of normal tongue mucosa， tongue atypical hyperplasia and tongue squamous cell carcinoma（P<0.05）. The positive expression rate of TGF-β1 was positively correlated with the TNM stage of tongue cancer. There was significant difference in the expression rate between the lymph node metastasis group and the none lymph node metastasis group（P<0.05）. The expression rate of TGF-β1 was high in the recurrence group within 5 years（P<0.05）. Conclusion The positive expression rates of TGF-β1 are high in the tongue atypical dysplasia group， the tongue squamous cell carcinoma group， the tongue squamous cell carcinoma with metastatic lymph nodes and the recurrence group within 5 years after operation. The detection of TGF-β1 is helpful in predicting the occurrence and development of tongue cancer.

[Key words] Tongue squamous cell carcinoma; Tongue leukoplakia; Transforming growth factor-β1; Immunohistochemistry

舌鱗癌是最常見的口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌，其發(fā)病率在近幾年呈逐漸上升的趨勢[1]。舌鱗癌發(fā)生發(fā)展的機制尚未闡明，但臨床觀察和動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，大約80%的舌鱗癌的發(fā)生都具有明確的癌前損害（premalignant lesion）階段，即由正常黏膜到癌前病變再到舌鱗癌。16%～32%的口腔鱗癌與常見的口腔鱗癌癌前病變——白斑有關(guān)，即部分白斑可能發(fā)展成鱗狀細(xì)胞癌。癌的發(fā)生、發(fā)展由上皮和間質(zhì)交互作用所構(gòu)成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)所決定的。有證據(jù)表明，腫瘤間質(zhì)的改變先于上皮惡性改變，由此可以推測，檢測出現(xiàn)于腫瘤間質(zhì)的腫瘤異常蛋白具有重要的意義[2]。因此從分子水平來認(rèn)識舌鱗癌變發(fā)生發(fā)展的過程，了解其表達(dá)差異在不同病理分級、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移的病例的差異意義重大。在腫瘤進(jìn)展過程中，TGF-β1可通過通過促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和腫瘤轉(zhuǎn)移，可以促使腫瘤發(fā)生發(fā)展[3]。TGF-β1可能是影響口腔鱗癌患者生存率的獨立影響因素[4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，珠海市人民醫(yī)院病理科2010年5月～2015年3月保存，口腔頜面外科門診活檢及手術(shù)切除的病例，所有病例術(shù)前均未行放射治療和化學(xué)治療及其他相關(guān)的抗腫瘤治療。舌鱗癌組35例，均行舌鱗癌根治術(shù)及頸淋巴結(jié)清掃術(shù)，按2003年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）對口腔癌的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，其中：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期10例;按病理學(xué)分級：高分化鱗癌22例，中分化鱗癌10例，低分化鱗癌3例。術(shù)后病理證實有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的16例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的19例;其中男18例，女17例;年齡32～68歲，中位年齡51歲。非典型性增生組20例，選取同期手術(shù)切除，病理證實有異常增生的舌白斑20例。其中男10例，女10例;年齡25～68歲，中位年齡48歲。正常舌黏膜組20例，切取舌白斑旁正常黏膜組織作為對照。三組病例資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。上述標(biāo)本均經(jīng)過組織病理學(xué)檢查證實，并經(jīng)病理科醫(yī)生重新切片。

1.2 免疫組化方法檢測

免疫組織化學(xué)采用S-P法，試劑盒為美國Neomarker產(chǎn)品，購自福建邁新公司，其中S-P試劑盒為即用型，其余濃縮型抗體稀釋度均為1：50，采用微波抗原修復(fù)。顯微鏡下觀察染色情況。

1.3 結(jié)果判斷

TGF-β1陽性為胞質(zhì)著色，所有陽性表達(dá)均為棕黃色，定位于細(xì)胞漿及細(xì)胞膜，以陽性細(xì)胞數(shù)量作為觀察指標(biāo)，以細(xì)胞的染色深淺及陽性細(xì)胞所占百分率按以下方式進(jìn)行評價。A、按切片中細(xì)胞顯色有無及深淺評分：0分：無著色;1分：淺黃色;2分：棕黃色;3分：棕褐色;B：按陽性細(xì)胞所占的百分比評分：陽性細(xì)胞比例10%以下記作0分，10%～50%為1分，50%以上為2分，每例積分=A+B，A+B<3分計為陰性，≥3分為陽性[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，非正態(tài)計量資料用中位數(shù)表示，采用非參數(shù)檢驗，等級資料采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β1在正常舌黏膜組織、非典型性增生、舌鱗癌中的表達(dá)

TGF-β1的陽性顆粒彌散地分布于胞漿內(nèi)，呈棕黃色。在正?？谇火つそM織中部分病例陽性表達(dá)見于上皮粒、棘層，部分病例陽性表達(dá)見于上皮全層。在非典型性增生病變中，陽性表達(dá)主要見于粒、棘層，呈帶狀分布。在舌鱗癌中，多數(shù)陽性表達(dá)癌巢中心和腫瘤浸潤邊緣，某些血管內(nèi)皮細(xì)胞液有陽性表達(dá)。TGF-β1在正常舌黏膜組織、白斑、舌鱗癌中的表達(dá)陽性強度依次升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

2.2 TGF-β1與舌鱗癌分期及術(shù)后5年復(fù)發(fā)的關(guān)系

TGF-β1在舌鱗癌Ⅰ～Ⅲ期表達(dá)的陽性率有差異（P<0.05）。TGF-β1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性率（81.25%）高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（42.11%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在5年內(nèi)有復(fù)發(fā)的患者組高于無復(fù)發(fā)的患者組（P<0.05）。見表2。

3 討論

TGF-β1是一種由多種類型細(xì)胞分泌的多肽類生長因子，基因定位于人染色體19q13.1帶上。TGF-β1是細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的絲/蘇氨酸蛋白激酶超家族中最重要的一員，其可將細(xì)胞外信號傳至細(xì)胞內(nèi)，參與多種細(xì)胞的生理、病理過程，如細(xì)胞增殖分化、胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生、血管形成等[6，7]。以往認(rèn)為TGF-β1對體內(nèi)多種上皮源性細(xì)胞及多種腫瘤細(xì)胞具有生長抑制作用，但現(xiàn)在更多的研究認(rèn)為TGF-β1在腫瘤發(fā)生早期可能作為腫瘤抑制因子起作用，而隨著腫瘤發(fā)展，其可促進(jìn)腫瘤生長加速[8]。TGF-β1早期抑制腫瘤發(fā)生可能與以下機制有關(guān)：（1）TGF-β1通過抑制原癌基因C-myc的表達(dá)使細(xì)胞生長停滯于G期水平或延長G期。（2）其能使p53蛋白及Rb蛋白去磷酸化，而p53蛋白及Rb蛋白是抑癌基因野生型p53及Rb的表達(dá)產(chǎn)物，去磷酸化后的p53蛋白及Rb蛋白對腫瘤的形成具有抑制作用。（3）對周期蛋白依賴性激酶及周期蛋白可發(fā)揮抑制作用。周期蛋白依賴性激酶及周期蛋白是細(xì)胞完成其生長周期所必需的。馮慶輝等[9]應(yīng)用免疫組化研究舌白斑及鱗癌的結(jié)果表明，有上皮異常增生的細(xì)胞染色程度高于正常黏膜及單純性白斑組，鱗癌組又高于異常增生組，癌癥細(xì)胞分化程度越低，染色越濃且著色面積廣泛。這與我們的研究結(jié)果相似。對20例正常舌黏膜、20例不典型增生白斑和35例浸潤性癌組織行TGF-β1蛋白免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，TGF-β1表達(dá)陽性率隨著由正常黏膜向癌癥過渡也率逐漸增高。提示檢測癌前病變組織中的TGF-β1表達(dá)，對舌癌的早期診斷意義重大。

腫瘤的形成是一個復(fù)雜的過程，而細(xì)胞基質(zhì)改變和血管的形成易于腫瘤的發(fā)展浸潤與轉(zhuǎn)移。一般認(rèn)為TGF-β1通過以下途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移[10-12]：（1）拮抗機體免疫調(diào)節(jié)，使腫瘤細(xì)胞逃避機體的免疫監(jiān)視，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性增長。TGF通過抑制T和B淋巴細(xì)胞增殖、分化，抑制NK細(xì)胞和單核細(xì)胞的殺傷活性，抑制免疫球蛋白合成和免疫調(diào)節(jié)因子的作用，減少機體對腫瘤細(xì)胞生長抑制。（2）促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)形成。TGF-β1分泌增多可增強蛋白水解酶活性，增加間質(zhì)膠原的降解，從而降低癌細(xì)胞間的黏附力而易發(fā)生轉(zhuǎn)移。（3）促進(jìn)基質(zhì)蛋白合成與分泌。（4）TGF-β1也是一種促血管生成因子，參與腫瘤新生血管的形成，為腫瘤生長提供營養(yǎng)，促使腫瘤增值。而腫瘤新生血管由于基底膜不完整，通透性高，癌細(xì)胞易脫落利于局部浸潤和進(jìn)入血管淋巴系統(tǒng)，致使淋巴轉(zhuǎn)移。王曉冰等[13]報道TGF-β1高表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞的浸潤，組織學(xué)分期和淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，揭示乳腺癌細(xì)胞內(nèi)增高的TGF-β1有助于癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。Kinugasa S等[14]應(yīng)用免疫組化技術(shù)對50例胃癌手術(shù)后患者進(jìn)行回顧研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1高表達(dá)者5年生存率明顯低于TGF-β1低表達(dá)者。Schuster N等[15]曾對口腔鱗癌患者血清TGF-β1的前瞻性研究表明，血清TGF-β1水平與對照組相比，進(jìn)展期口腔鱗癌的淋巴結(jié)狀態(tài)、TNM分期、組織學(xué)分級均與TGF-β1高水平相關(guān)。TGF-β1的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)展相關(guān)[16]。

本研究中，舌癌的TNM分期越高，TGF-β1表達(dá)越強。術(shù)后證實有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者組顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組?；颊咝g(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)的組又高于無復(fù)發(fā)的患者組。因此對舌癌患者TGF-β1檢測可能有助于判斷舌癌的發(fā)展并對頸淋巴結(jié)有無微轉(zhuǎn)移灶的危險性作分子生物學(xué)方面的評估，可以發(fā)現(xiàn)實際有轉(zhuǎn)移而臨床和影像上未被發(fā)現(xiàn)的隱匿轉(zhuǎn)移，從而指導(dǎo)手術(shù)方案，并可對患者預(yù)后進(jìn)行評估。

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（收稿日期：2019-10-09）