銀屑病患者趨化素樣因子1、T淋巴細(xì)胞亞群及炎性因子的水平分析

劉容君，徐 淼，呂仁杰

(荊門市第二人民醫(yī)院:1.皮膚科；2.中醫(yī)康復(fù)科；3.腎內(nèi)科，湖北荊門 448000)

銀屑病不但是一種基因遺傳疾病，也是一種慢性炎癥性皮膚病。銀屑病不及時治療，會導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生，累及心臟、肝臟、腎臟等器官，如果患者發(fā)生感染還會危及生命。銀屑病春冬季發(fā)病率較高，臨床以鱗屑和紅斑為主，是在多種環(huán)境誘導(dǎo)因素的刺激下發(fā)生的免疫異常性、慢性炎癥性、增生性皮膚病[1]。銀屑病的誘因較多，發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，涉及許多免疫分子和細(xì)胞因子[2]。趨化素樣因子1(CKLF1)是影響銀屑病的一種因子，和銀屑病有密切關(guān)系，位于染色體16q22，由4個外顯子和3個內(nèi)含子組成[3]。CKLF1是由免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞分泌的細(xì)小蛋白顆粒[4]，可對免疫反應(yīng)和過敏反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)[5]，在造血和血管生成等一系列生理過程中發(fā)揮非常重要的作用[6]。銀屑病的皮膚損害可發(fā)于全身各處，但多見于頭皮、四肢伸側(cè)[7]。CKLF1的調(diào)控在機(jī)體的免疫反應(yīng)及白細(xì)胞的趨化過程中起著重要的作用[8]，本研究主要對銀屑病患者CKLF1、T淋巴細(xì)胞亞群、炎性因子水平進(jìn)行了分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年3月至2019年2月于本院門診確診的尋常型銀屑病患者34例作為觀察組，然后根據(jù)疾病發(fā)展程度又分為進(jìn)行期組(26例)，靜止期組(8例)；年齡23～59歲，平均(41.6±4.2)歲；病程為5個月至1.5年。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡為20～60歲，無過敏史，近2個月內(nèi)未接受過任何免疫抑制劑、維A類外用藥物者。排除標(biāo)準(zhǔn)：2個月內(nèi)使用過藥物治療者；合并其他嚴(yán)重疾病的患者。另外，選取21例健康志愿者作為對照組。上述所有納入研究者均對本研究知情同意并簽署了知情同意書。

1.2儀器與試劑 流式細(xì)胞儀(Thermo公司)、生物顯微鏡(Olympus公司)、淋巴細(xì)胞分離液(美國Pierce公司)、CKLF1抗體(Tanon公司)、甲醛溶液(上海蘇彭化工)、冰箱(青島海爾公司)。

1.3方法

1.3.1觀察組和對照組血液標(biāo)本的采集 抽取外周靜脈血5 mL，將采集的血液標(biāo)本放入離心機(jī)，以3 000 r/min離心5 min，離心后將血清與紅細(xì)胞分別置于EP管中保存。

1.3.2外周血細(xì)胞的純化和T淋巴細(xì)胞亞群的檢測 用含肝素的采血管采集靜脈血4 mL，然后以2 000 r/min，離心15 min處理。去上清液后分裝，于冰箱貯存1 h。取出細(xì)胞，加入溶血劑使紅細(xì)胞充分溶解，得到純化后的外周血細(xì)胞。然后滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記抗體，于37 ℃孵育10 min，生物顯微鏡下觀察CD3+、CD4+、CD8+陽性細(xì)胞比例。

1.3.3采用流式細(xì)胞檢測CKLF1和炎性因子水平 用生理鹽水調(diào)整細(xì)胞密度為2.0×107/mL備用。待測的多管細(xì)胞懸液中加入PBS緩沖液50 μL，然后在不同的管中分別加入CKLF1、IL-1β、IL-6和TNF-α抗體(2 μL，1∶10稀釋)，充分混勻，4 ℃避光放置40 min。加入PBS液2 mL混勻，1 500 r/min離心5 min，去掉上清液后以1%甲醛溶液固定，測定細(xì)胞中CKLF1和炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α陽性細(xì)胞所占百分比。

2 結(jié) 果

2.12組間外周血細(xì)胞中CKLF1的表達(dá)水平分析 觀察組外周血細(xì)胞中CKLF1的表達(dá)水平為(3.76±1.31)%，對照組外周血細(xì)胞中CKLF1的表達(dá)水平為(13.29±5.05)%。對照組外周血細(xì)胞中CKLF1的表達(dá)水平高于觀察組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2T淋巴細(xì)胞亞群的檢測 觀察組CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例分別為(46.41±8.21)%、(20.13±2.38)%，低于對照組的(68.16±1.84)%、(23.64±3.34)%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 外周血T淋巴細(xì)胞各因子在銀屑病患者的表達(dá)

2.3外周血細(xì)胞中炎性因子的表達(dá)分析 觀察組外周血細(xì)胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)水平分別為(78.65±3.62)%、(74.76±5.52)%、(69.58±3.78)%，均高于對照組中相應(yīng)指標(biāo)的表達(dá)水平，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 IL-1β、IL-6、TNF-α對外周血細(xì)胞膜表達(dá)

2.4銀屑病患者治療前、后外周血T淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞中CKLF1表達(dá)水平的比較 治療前銀屑病患者T淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞中CKLF1表達(dá)水平均低于治療后，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 在治療前、后CKLF1表達(dá)

3 討 論

銀屑病發(fā)病較急，會導(dǎo)致皮膚破損，有紅斑生成[9]，伴隨關(guān)節(jié)發(fā)炎疼痛，雖然銀屑病是一種基因遺傳疾病，但此病的發(fā)生并不是由遺傳因素決定的[10]，他的誘發(fā)因素較多，主要涉及遺傳、免疫、感染、神經(jīng)介質(zhì)等方面[11]；CKLF1并不是信號傳導(dǎo)受體，更多的是作為一種高效的清除受體，發(fā)揮清道夫的作用，清除血液中的趨化因子[12]，參與促炎性細(xì)胞因子調(diào)控，作為調(diào)節(jié)因子在炎癥的免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮調(diào)節(jié)和緩沖作用[13]。研究表明，銀屑病患者存在天然免疫紊亂現(xiàn)象[14]，天然免疫系統(tǒng)失調(diào)及過度活化導(dǎo)致了炎癥反應(yīng)的發(fā)生是銀屑病真正的啟始因素，引發(fā)自身免疫性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)而最終導(dǎo)致銀屑病發(fā)病[15]。

觀察組外周血細(xì)胞中CKLF1的表達(dá)水平明顯低于對照組。觀察組的CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比明顯低于對照組。對照組與觀察組的CD4+/CD8+細(xì)胞比值無明顯差異。外周血細(xì)胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)分析顯示，觀察組外周血細(xì)胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)水平明顯高于對照組。銀屑病患者治療后T淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞中CKLF1的表達(dá)水平明顯高于治療前。

綜上所述,CKLF1能改變炎性因子的趨向化，使外周血淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞得到修復(fù)，其水平能反映臨床治療銀屑病的效果。