希森美康XN血液分析儀淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)在IM與B-CLPD鑒別診斷中的臨床意義

周正宇，馬 煒，吳 康，張 明，岳展伊

(海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬上海長海醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科，上海 200433)

傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)是一種以咽喉腫痛、淋巴結(jié)腫大、發(fā)熱和疲勞為典型臨床癥狀的傳染性疾病，可合并肝脾大，外周血淋巴細(xì)胞增多，其中含大量異型淋巴細(xì)胞(>10%)，多種病原體可以導(dǎo)致IM,約90%的病例由一種γ皰疹病毒EB病毒(EBV)引起，另一種皰疹病毒人類巨細(xì)胞病毒(CMV)通常被認(rèn)為與EBV陰性的IM有關(guān)[1-3]。B細(xì)胞慢性淋巴增殖性疾病(B-CLPD)是一組累及外周血和骨髓的成熟B細(xì)胞克隆增殖性疾病，包括慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤(LPL)、毛細(xì)胞白血病(HCL)、套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、邊緣區(qū)淋巴瘤(MZL)等疾病，各類型均可出現(xiàn)淋巴結(jié)/脾大，或可出現(xiàn)發(fā)熱、貧血等癥狀，血常規(guī)檢測外周血淋巴細(xì)胞增多[4]，其臨床表現(xiàn)與血常規(guī)儀器檢測結(jié)果與IM類似，在初診時易將二者混淆，若能便捷、快速地對二者進(jìn)行鑒別，將有效提高診斷效率。希森美康 XN血液分析儀的淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)包括L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z，是淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)與形態(tài)的量化指標(biāo)，本研究將探討其在IM與B-CLPD鑒別診斷中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2017年12月至2019年3月于上海長海醫(yī)院門診就診的淋巴細(xì)胞增多患者(343例)希森美康XN血液分析儀淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)結(jié)果，根據(jù)患者臨床診斷分為3組，其中IM組樣本111例，B-CLPD組樣本87例，其他原因引起的非腫瘤性淋巴細(xì)胞增殖組樣本145例。

1.2主要儀器與試劑 希森美康 XN 血液分析流水線(含SP-10推片儀)及其配套試劑與耗材(日本希森美康公司)；EDTA-K2真空采血管(山東威高公司)。

1.3方法 患者EDTA-K2抗凝血樣本使用希森美康XN血液分析流水線檢測，記錄各樣本淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)的結(jié)果及患者的臨床診斷。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)經(jīng)Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)均不符合正態(tài)分布，因此計量資料使用M(P25～P75)表示，3組數(shù)據(jù)間差異性比較使用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，并進(jìn)一步使用Dunn-Bonferroni檢驗(yàn)比較3組中兩兩之間的差異，利用Logistic回歸分析生成各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)的聯(lián)合診斷因子，受試者工作曲線(ROC曲線)用以評價各指標(biāo)在診斷中的價值，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組間淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)比較 各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)(L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z)水平在IM組、B-CLPD組、非腫瘤性增殖組3組間有差異，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(H=46.399～190.487,P<0.001)，見表1。使用Dunn-Bonferroni檢驗(yàn)進(jìn)一步對各組間淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)水平進(jìn)行兩兩比較，IM組L-WX、L-WY、L-X、L-Y、L-Z水平高于B-CLPD組，IM組L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z水平高于非腫瘤性增殖組，B-CLPD組L-WZ、L-X、L-Z水平高于非腫瘤性增殖組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(調(diào)整后P<0.001),L-WZ在IM組與B-CLPD組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(調(diào)整后P=0.091),L-WX、L-WY、L-Y在B-CLPD組與非腫瘤性增殖組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(調(diào)整后P=0.079、0.841、0.507)。

表1 各組淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)水平比較[M(P25～P75)]

2.2Logistic回歸模型的建立 以診斷結(jié)果為IM或B-CLPD作為二分類因變量，各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)為協(xié)變量，利用SPSS軟件中LR前進(jìn)法功能對參數(shù)進(jìn)行篩選，生成聯(lián)合診斷因子pre1，建立Logistic回歸方程,方程表達(dá)為logist(pre1)=-72.090+0.014(L-WY)+0.171(L-X)+0.683(L-Z)。見表2。

2.3pre1鑒別IM與B-CLPD的臨床價值 利用SPSS22.0生成pre1與各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)鑒別診斷IM與B-CLPD的ROC曲線，見圖1，pre1鑒別診斷IM與B-CLPD的ROC曲線下面積為0.980，高于各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，當(dāng)取臨界值為0.594 5時，靈敏度為91.9%，特異度為96.6%，見表3。

表2 各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)鑒別IM與B-CLPD的Logistic模型擬合參數(shù)(LR前進(jìn)法)

續(xù)表2 各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)鑒別IM與B-CLPD的Logistic模型擬合參數(shù)(LR前進(jìn)法)

注：-表示該項(xiàng)無數(shù)據(jù)。

圖1 pre1與各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)鑒別診斷IM與B-CLPD的ROC曲線

表3 pre1與各淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)鑒別診斷IM與B-CLPD的診斷價值

項(xiàng)目AUC標(biāo)準(zhǔn)誤Pcut-off值靈敏度(%)特異度(%)pre10.9800.008<0.0010.594 591.996.6L-WX0.8260.029<0.001557.577.579.3L-WY0.9370.017<0.0011 134.081.194.3L-WZ0.6010.0410.015710.544.188.5L-X0.7640.036<0.00179.6598.246.0L-Y0.8280.030<0.00184.9562.289.7L-Z0.8080.033<0.00160.7596.455.2

2.4聯(lián)合診斷因子效能的驗(yàn)證 選取2019年4月至2019年7月IM患者樣本與B-CLPD患者樣本各16例，使用希森美康 XN血液分析儀對樣本進(jìn)行檢測并將測得的淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)，原方程變形后得到pre1=1/{1+e-[-72.090+0.014(L-WY)+0.171(L-X)+0.683(L-Z)]}，將數(shù)據(jù)代入方程，計算pre1的值，pre1≥0.594 5診斷為IM，pre1<0.594 5診斷為B-CLPD，驗(yàn)證得出聯(lián)合診斷因子鑒別診斷IM與B-CLPD的靈敏度為87.5%，特異度為100.0%，準(zhǔn)確度為93.8%。

3 討 論

IM病程多數(shù)為自限性且預(yù)后良好，少數(shù)遷延不愈則可能會出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，外周血中出現(xiàn)的大量異型淋巴細(xì)胞是診斷IM的重要證據(jù)[3,5]，這些異型淋巴細(xì)胞被ICSH建議報告為反應(yīng)性淋巴細(xì)胞，用以和腫瘤性增殖的淋巴細(xì)胞區(qū)分[6],異型淋巴細(xì)胞形態(tài)與正常淋巴細(xì)胞相比，胞體增大，胞質(zhì)增多，胞核母細(xì)胞化，嗜堿性增強(qiáng)，目前國內(nèi)一般根據(jù)細(xì)胞形態(tài)將其分為漿細(xì)胞型、單核細(xì)胞型、幼稚型3類[7]。B-CLPD多數(shù)進(jìn)展緩慢，但可向侵襲性發(fā)展，難以治愈，淋巴細(xì)胞以成熟淋巴細(xì)胞為主[4]，但是形態(tài)與正常淋巴細(xì)胞形態(tài)相比，亦有不同：CLL與MCL常見異常的成熟淋巴細(xì)胞，偶見帶有核仁的幼稚淋巴細(xì)胞；LPL細(xì)胞核具有淋巴細(xì)胞特征，其他方面具有漿細(xì)胞特征；HCL細(xì)胞胞質(zhì)較豐富，有不規(guī)則“毛發(fā)樣”突起，核比正常淋巴細(xì)胞大，染色質(zhì)較疏松；MZL核質(zhì)比較大，核仁明顯，胞質(zhì)一側(cè)具有短小絨毛[8]。當(dāng)懷疑IM或是淋巴組織增生時，血涂片檢查是一項(xiàng)重要的輔診手段，通過觀察細(xì)胞形態(tài)可以辨別增殖淋巴細(xì)胞的性質(zhì)：異型淋巴細(xì)胞增多、腫瘤性淋巴細(xì)胞增殖或是其他類型非腫瘤性淋巴細(xì)胞增殖。故而識別和報告血涂片中白細(xì)胞分類的能力非常重要，技術(shù)人員鑒別細(xì)胞的能力基于其個人經(jīng)驗(yàn)，且各種細(xì)胞的形態(tài)沒有標(biāo)準(zhǔn)化的定義，因此，個體技術(shù)人員識別細(xì)胞的能力存在偏差[9]。雖然通過流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物可以鑒別淋巴細(xì)胞的性質(zhì)，但是與血常規(guī)及血涂片檢測相比，檢測時間較長，成本較高，作為初篩檢測效率較低。

希森美康XN系列血液分析儀雖然可以給出異型淋巴細(xì)胞或是異常淋巴細(xì)胞等報警信息，但這種報警信息的準(zhǔn)確度不高[10]，希森美康 XN 血液分析儀分類計數(shù)白細(xì)胞的原理是通過檢測前向散射光、側(cè)向散射光、側(cè)向熒光對不同形態(tài)的白細(xì)胞進(jìn)行判斷：前向散射光是激光束照射細(xì)胞時,光以0°角散射的訊號，其強(qiáng)度反映細(xì)胞的大小；側(cè)向散射光是激光束照射細(xì)胞時,光以90°角散射的訊號，其強(qiáng)度反映細(xì)胞的復(fù)雜程度；側(cè)向熒光是熒光染料對細(xì)胞核酸染色后產(chǎn)生的熒光訊號，其強(qiáng)度反映細(xì)胞核酸的量。相對于散點(diǎn)圖以可視化的形式反映這3種光對白細(xì)胞的檢測結(jié)果，淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)以量化的形式反映這3種光對白細(xì)胞的檢測結(jié)果：X、Y、Z的值分別代表細(xì)胞胞內(nèi)的平均復(fù)雜程度、細(xì)胞核酸的平均含量、細(xì)胞胞體平均大??；WX、WY、WZ的值分別代表細(xì)胞胞內(nèi)復(fù)雜程度不均一性、細(xì)胞核酸含量不均一性、細(xì)胞胞體大小不均一性[11]。由于異型淋巴細(xì)胞、B-CLPD外周血淋巴細(xì)胞、正常淋巴細(xì)胞形態(tài)上的差異，IM組淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)中的L-WX、L-WY、L-X、L-Y、L-Z高于B-CLPD組(P<0.001)，IM組所有淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)均高于非腫瘤性增殖組(P<0.001)，而L-WZ在兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.091)的原因可能為IM組與B-CLPD組淋巴細(xì)胞胞體大小均存在一定不均一性。B-CLPD組部分淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)(L-WZ、L-X、L-Z)高于非腫瘤性增殖組(P<0.001)，說明兩組間淋巴細(xì)胞的體積與胞內(nèi)復(fù)雜程度差異較大；反映核染色質(zhì)的淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)L-WY與L-Y在兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.841，P=0.507)著說明兩組間核染色質(zhì)的量差異不大，其原因可能如前文所述，雖然B-CLPD的淋巴細(xì)胞以成熟淋巴細(xì)胞為主但仍與正常淋巴細(xì)胞形態(tài)有差異。

已有一些學(xué)者研究血液分析儀提供的淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)在IM的診斷價值，謝曉英等[12]研究表明L-Y在IM患者與健康人群間有差異，王宏等[13]探討了L-X、L-Y在篩查IM、ALL中的應(yīng)用。SALE等[14]的研究雖然與本研究類似，探討了淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)在IM與慢性淋系腫瘤鑒別中的價值，但其只探討了L-WX、L-WY、L-WZ 3項(xiàng)指標(biāo)，且在對3項(xiàng)指標(biāo)設(shè)定閾值聯(lián)合診斷的方法上較為粗糙，而本研究根據(jù)淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)與淋巴細(xì)胞形態(tài)間的關(guān)系，探討所有淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)(L-WX、L-WY、L-WZ、L-X、L-Y、L-Z)，并用Logistic回歸研究各參數(shù)聯(lián)合鑒別診斷IM與B-CLPD、其他類型非腫瘤性淋巴細(xì)胞增殖的臨床意義，本研究結(jié)果表明淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)在鑒別IM與B-CLPD方面，均具有較高的靈敏度(91.9%)、特異度(96.6%)。

本研究的不足首先在于樣本量不大，其次，淋巴系統(tǒng)增殖性疾病遠(yuǎn)不止B-CLPD一種，較為繁多，分類較細(xì)，若能在擴(kuò)大樣本量的基礎(chǔ)上探討各類淋巴系統(tǒng)增殖性疾病的淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)，可能會得到更加全面的研究結(jié)果。

4 結(jié) 論

通過Logistic回歸聯(lián)合淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)參數(shù)中的L-WY、L-X、L-Z在鑒別診斷IM與B-CLPD中有較高的價值，這些指標(biāo)在通過希森美康XN血液分析儀檢測血常規(guī)時即可便捷獲得，在擁有一定診斷準(zhǔn)確性的同時擁有較高的篩查效率。