流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HLA-B27抗原的表達(dá)及臨床意義

廖德權(quán)，成捷，許藍(lán)月

（廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 湛江 524000）

HLA-B27屬于具有遺傳多態(tài)性的等位基因，和大部分疾病存在關(guān)系，特別是脊椎關(guān)節(jié)系統(tǒng)疾病，其中包含反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)制性脊柱炎以及Reiter氏綜合征等[1]。此次研究探討流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HLA-B27抗原的表達(dá)及臨床意義，就相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 抽取1155例門(mén)診和住院腰痛患者作為此次研究對(duì)象，選擇流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者HLA-B27抗原表達(dá)，病例選擇時(shí)間為2018年6月-2019年5月，男性患者705例，女性患者450例，年齡最大者為75歲，年齡最小者為11歲，平均年齡為（41.6±3.3）歲。

1.2 方法 設(shè)備儀器：選擇Beckman-Coulter NAVIO流式細(xì)胞儀，Beckman-Coulter原裝HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙熒光標(biāo)記抗體，OptiLyse C溶血素。

操作：選擇K3-EDTA抗凝真空管對(duì)患者進(jìn)行標(biāo)本收集，抽取1 mL外周血，白細(xì)胞濃度調(diào)整范圍為4.0×109-10.0×109/L。選擇患者全血100 μL，將HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙熒光標(biāo)記抗體20 μL加入其中，而后進(jìn)行混勻，室內(nèi)需要避光放置15-20 min，然后將0.5ml溶血素加入進(jìn)行混勻，室內(nèi)需要避光放置15-20 min，然后加入PBS 2 mL進(jìn)行洗滌，洗滌次數(shù)為2次。上機(jī)檢測(cè)獲取的15000個(gè)細(xì)胞。

1.3 結(jié)果判斷[2]采用Beckman-Coulter公司數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)實(shí)施分析，設(shè)門(mén)為淋巴細(xì)胞，對(duì)門(mén)內(nèi)細(xì)胞抗HLAB27-FITC和抗HLA-B7-PE信號(hào)熒光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)定HLA-B7陰性而HLA-B27陽(yáng)性細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度和所占百分比，平均熒光強(qiáng)度大于8.0或所占百分比≥90%即可判斷為HLA-B27陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 HLA-B27檢測(cè)結(jié)果 通過(guò)檢測(cè)后可知705例男性患者中209例結(jié)果表現(xiàn)為陽(yáng)性，比例為18.10%，450例女性患者中70例結(jié)果表現(xiàn)為陽(yáng)性，比例為6.06%，1155例患者中279例陽(yáng)性，比例為24.16%，相關(guān)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 分析HLA-B27檢測(cè)結(jié)果

2.2 陽(yáng)性患者年齡以及性別情況 由表2可知，10-20歲患者49例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為4.24%，21-30歲患者中100例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為8.66%，31-40歲患者中49例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為4.24%，41-50歲患者中32例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.77%，51-60歲患者中33例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.86%，61-70歲患者中9例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為0.78%，71歲以上患者中7例結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為0.61%。

3 討論

HLA（人類(lèi)白細(xì)胞抗原）為機(jī)體中抗原系統(tǒng)，具有高度多態(tài)性，廣泛應(yīng)用于器官移植、輸血等方面，和多種疾病具有一定的關(guān)系，HLA-B27基因?yàn)镸HCI類(lèi)分子的等位基因，臨床研究證實(shí)此基因和強(qiáng)直性脊柱炎等疾病存在關(guān)系[3]。強(qiáng)直性脊柱炎主要患病人群為青壯年男性，腰腿疼為主要癥狀表現(xiàn)，部分患者會(huì)出現(xiàn)髖關(guān)節(jié)疼痛以及骶髂關(guān)節(jié)疼痛，通常伴隨晨僵，疾病引發(fā)因素并不確定。因?yàn)榇瞬『推渌膊【哂邢嗨频陌Y狀，提升了診斷困難程度[4]。為此需要對(duì)HLA-B27進(jìn)行正確檢測(cè)，血清學(xué)分析方法是檢測(cè)HLA-B27的常規(guī)方法，但是會(huì)因?yàn)榧?xì)胞純度、單價(jià)抗血清效價(jià)以及補(bǔ)體差異等因素產(chǎn)生影響，影響實(shí)驗(yàn)操作以及穩(wěn)定性。選擇流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并不需要對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離，操作方便，選擇單克隆抗HLA-B27和已知HLA-B27亞型進(jìn)行結(jié)合，可將靈敏度提升[5]。同時(shí)和血清學(xué)分型進(jìn)行對(duì)比可知，此檢查方法省時(shí)，且具有良好的特異性以及靈敏度，當(dāng)患者進(jìn)行臨床檢查可疑為強(qiáng)制性脊柱炎，可將HLA-B27作為診斷主要指標(biāo)[6]。本次研究經(jīng)過(guò)分析后可知，1155例患者中279例陽(yáng)性，比例為24.16%，其中男性患者209例，女性患者70例；年齡分布可知，10-20歲患者陽(yáng)性率為4.24%，21-30歲患者陽(yáng)性率為8.66%，31-40歲患者陽(yáng)性率為4.24%，41-50歲患者陽(yáng)性率為2.77%，51-60歲患者陽(yáng)性率為2.86%，61-70歲患者陽(yáng)性率為0.78%，71歲以上患者陽(yáng)性率為0.61%。

表2 分析陽(yáng)性患者年齡以及性別情況

綜上所述，臨床對(duì)細(xì)胞表達(dá)HLA-B27抗原進(jìn)行分析檢測(cè)過(guò)程中，流式細(xì)胞術(shù)可將其他細(xì)胞干擾進(jìn)行排除，能夠?qū)Y(jié)果進(jìn)行客觀(guān)分析，以免出現(xiàn)主觀(guān)性判斷，同時(shí)檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，具有良好的穩(wěn)定性以及重復(fù)性，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。